免疫學(xué)檢測與免疫學(xué)技術(shù)-文庫吧資料
2024-10-13 15:05本頁面
【正文】 后使所測抗原與之結(jié)合 ,再將特異性抗體生物素化 ,并通過親合素連結(jié)生物素化 DNA分子而將后者進(jìn)行 PCR 九、新型抗體的制備技術(shù) ? (一 )對鼠源性抗體的改造 ? 1．人 鼠嵌合抗體 (chimeric antibody)：鼠源性單抗的 V區(qū)，人免疫球蛋白的 C區(qū)。 ? 6. SNP(單個(gè)核苷酸多態(tài)性 )分析 ? (四 )補(bǔ)體基因分析 ? (五 )抗體基因分析 ? (六 )細(xì)胞膜分子基因分析 七、免疫標(biāo)記技術(shù) ? (一 )免疫熒光技術(shù) (二 )放射免疫分析法 ? (三 )酶免疫技術(shù) (四 )發(fā)光免疫測定 八、免疫 PCR(IMPCR)技術(shù) ? 免疫 PCR是將抗原抗體的特異性反應(yīng)與PCR技術(shù)結(jié)合起來 ,用以檢測微量蛋白質(zhì)的方法 。 ? 5． 指紋圖譜 (PCRfingerprinting)技術(shù) |：進(jìn)行 HLA基因分型鑒定時(shí) ， 將供 、 受體的 DNA擴(kuò)增產(chǎn)物混合 ， 電泳后得出一指紋圖 ， 再與二者各自的 PCR指紋圖譜進(jìn)行比較 ， 從中選擇出指紋圖一致的供 、 受體進(jìn)行移植 。 ? 4． 序列特異性引物 PCR技術(shù) (PCRSSP)：該法操作簡單 、 快速 、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易判斷 ， 雜合子也很易檢出 。 ? 應(yīng)用 PCRSSCP可以直接比較供 、 受體之間HLAⅡ 類基因是否完全一致 ， 且可精確到 1?2個(gè)堿基之差 ， 具有相對簡捷而精確的特點(diǎn) 。 ? 2． 限制性片段長度多態(tài)性 (PCRRFLP)技術(shù)：此項(xiàng)技術(shù)特別適用于個(gè)別標(biāo)本和小樣本的檢測 。 ? *用于惡性淋巴瘤和白血病等的臨床診斷以及白血病治療后微小殘留病灶的檢測。 ? 2. PCR擴(kuò)增技術(shù) :正常多克隆淋巴細(xì)胞群DNA的擴(kuò)增產(chǎn)物含有不同長度的片段 ， 電泳檢查呈現(xiàn)彌漫涂片狀結(jié)構(gòu)或多條帶 。 5． Southern印跡雜交 6. 斑點(diǎn)及狹縫印跡雜交 : 將 DNA變性后直接點(diǎn)樣于硝酸纖維膜上再進(jìn)行雜交 7. 細(xì)胞因子 mRNA表達(dá)的測定還可采用RTPCR、原位雜交與原位 PCR,RNA半壽期的檢測 ,進(jìn)行中的轉(zhuǎn)錄分析等。 ? *核酸探針技術(shù)的操作主要包括： ① 質(zhì)粒 DNA的提?。?② 靶 DNA片段的分離； ③ 靶 DNA片段的標(biāo)記； ④ 待測樣品 mRNA的提取； ⑤ 標(biāo)記cDNA探針與待測樣品進(jìn)行雜交； ⑥ 放射自顯影或顯色分析 。 ? 雜交技術(shù)主要工具是核酸探針 ， 它是指一段用放射性核素或其他標(biāo)記物 (生物素 、 熒光素 、地高辛等 )標(biāo)記 ， 并與目的基因互補(bǔ)的 DNA片段或單鏈 DNA、 RNA。 粘附分子的檢測方法目前大多采用免疫學(xué)技術(shù)檢查其在細(xì)胞膜上的分布和測定某些樣品中的含量 。因此細(xì)胞因子受體的檢測與細(xì)胞因子檢測一樣，已成為基礎(chǔ)理論和臨床免疫學(xué)研究的一個(gè)重要內(nèi)容。 ? (2)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn) (ELISPOT):所用的包被抗體與酶標(biāo)抗體應(yīng)分別針對細(xì)胞因子的不同抗原決定簇 ? (五 )細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測 ? 采用 FCM免疫熒光技術(shù)可從單細(xì)胞水平檢測不同細(xì)胞亞群中的細(xì)胞因子 ,用兩種標(biāo)記的熒光抗體可在一種細(xì)胞內(nèi)同時(shí)測定兩種不同的細(xì)胞因子 。亦可通過檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的基因組成或mRNA量，推算出細(xì)胞因子的合成量。 趨化性 (chemotaxis)是指誘導(dǎo)細(xì)胞向趨化因子化學(xué)濃度高的方向作定向移動 ,可采用瓊脂糖和微孔小室趨化試驗(yàn)測定細(xì)胞因子的趨化活性； ? 化學(xué)增活現(xiàn)象 (chemokinesis)是指增強(qiáng)細(xì)胞的隨機(jī)運(yùn)動 ,可采用瓊脂糖小滴化學(xué)動力學(xué)試驗(yàn)檢測。 ? 檢測抗病毒活性的方法 :測定細(xì)胞因子抑制病毒的致細(xì)胞病變效應(yīng) (CPE)、抑制病毒蝕斑形成或抑制病毒的產(chǎn)量等。 其中WISH和 Hep2/c細(xì)胞株用以檢測人干擾素 ,L929細(xì)胞株用于檢測小鼠干擾素 ,Ratec細(xì)胞株用于檢測大鼠干擾素 ,而 MDBK細(xì)胞株則可用于檢測多種族的 IFNα和 IFNγ。 ? 2. 細(xì)胞毒活性測定法 ? 許多細(xì)胞因子 (TNF)針對轉(zhuǎn)化的細(xì)胞及病毒感染的細(xì)胞具有溶細(xì)胞或抑制細(xì)胞生長的活性 。 ? 1. 促進(jìn)細(xì)胞增殖和增殖抑制法 ? *多種 IL、 表皮生長因子 、 轉(zhuǎn)化生長因子 α、神經(jīng)生長因子 、 血小板衍生生長因子 、 成纖維細(xì)胞生長因子 、 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 ? *各種 CSF作用于造血系統(tǒng)的不同細(xì)胞 ,可促進(jìn)其增殖及在半固體瓊脂
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