【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 5） 加強(qiáng)理論學(xué)習(xí)，熟練掌握胎兒及盆腔內(nèi)各器官解剖 位置。 處理 : (1)及時(shí)報(bào)告主管院長(zhǎng) 、 醫(yī)務(wù)科 ,就地或迅速進(jìn)入手術(shù)室開(kāi)腹探查 ,結(jié)扎 14 破裂血管 ,組織高效 、 快捷的搶救 。 (2)對(duì)癥處理并發(fā)癥 ,必要時(shí)全院會(huì)診搶救 。 、 無(wú) CO2 氣或使用異常 預(yù)防 : (1)培養(yǎng)箱專(zhuān)線供電 ,并安裝應(yīng)急電源 。 (2)每日檢查氣瓶氣體量 ,總壓 力 1MPa時(shí)更換氣瓶 ,防止氣體無(wú)供應(yīng) 。 (3)每天測(cè)定培養(yǎng)箱參數(shù) ,定期維護(hù)保養(yǎng) 。 處理 : (1)立即將羊水標(biāo)本移至正常培養(yǎng)箱內(nèi) ,定期觀察羊水細(xì)胞生長(zhǎng)情況 。 (2)立即維護(hù)培養(yǎng)箱 ,恢復(fù)供電 、 供氣 。 (3)查找原因 ,徹底解決 。 ,羊水標(biāo)本遭到破壞 預(yù)防 : (1)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室加鎖 。 (2)無(wú)關(guān)人員嚴(yán)格禁止進(jìn)入培養(yǎng)室 。 (3)具有完善的消防系統(tǒng) ,防止火災(zāi) 。 處理 :與患者講明情況 ， 承擔(dān)相應(yīng)責(zé)任和賠償損失。 第四章 產(chǎn)前診斷技術(shù)操作規(guī) 范 一、 羊膜腔穿刺技術(shù)操作規(guī)程 （一） 適應(yīng)癥 孕婦年齡大于 35 歲。 產(chǎn)前篩查高危人群。 曾生過(guò)染色體病、神經(jīng)管缺陷兒的孕婦。 夫婦之一為染色體畸變攜帶者。 B 超檢查懷疑胎兒患染色體病的孕婦。 有性連鎖遺傳病、脆性 X綜合征家族史。 曾有原因不明的習(xí)慣性流產(chǎn) 、死胎及畸胎史的孕婦。 孕早期有感染、環(huán)境致畸因素影響的孕婦。 （二） 穿刺時(shí)間 羊水穿刺檢查在 1622周進(jìn)行。 （三） 禁忌癥 妊娠小于 16周或超過(guò) 22 周，適應(yīng)癥不明確或羊水過(guò)少者。 先兆流產(chǎn) 。 中央性前置胎盤(pán)或前置、低置胎盤(pán)有出血者。 盆腔或?qū)m腔內(nèi)有感染。 穿刺部位的皮膚有膿腫、皮炎、感染者。 15 單純因社會(huì)原因測(cè)胎兒性別者。 孕婦有全身性疾病，不能耐受羊膜腔穿刺者。 術(shù)前測(cè)量體溫（腋溫）高于 ℃兩次 （四） 穿刺用具的準(zhǔn)備 穿刺包：包括治療 巾一塊、 20G 穿 刺針（帶針芯）一個(gè)、止血鉗一把、注射器（ 2ml/1,20ml/1）、消毒紗布 3塊，無(wú)菌 10ml刻度離心管 2支，彎盤(pán)一個(gè)。 酒精燈。 （五） 羊膜腔穿刺要點(diǎn) 羊膜腔穿刺時(shí)間：以妊娠 1620 周為宜。 羊膜腔穿刺方法： ①術(shù)前半小時(shí)口服舒喘靈 ，孕婦排空膀胱后平臥于手術(shù)臺(tái)上，并向左右側(cè)翻身數(shù)次。 ②常規(guī)皮膚消毒，鋪無(wú)菌孔巾，在介入超聲引導(dǎo)下（其部位約在腹中線旁 2cm，宮底下約 3cm 處），右手持穿刺針垂直刺入腹壁、子宮、進(jìn)入羊膜腔，一般深度為 710cm。 ③拔出穿刺針芯，見(jiàn)有清亮淡黃 色羊水溢出，接 5ml 注射器抽取羊水 2ml 棄去 ,更換注射器抽取羊水 20ml（抽取速度約為 7ml/min），由助手分別注入兩支無(wú)菌離心管中，將蓋旋緊送實(shí)驗(yàn)室。 ④抽畢將針芯插回，迅速拔出穿刺針，用無(wú)菌棉球及紗布蓋住針眼壓迫片刻，以免羊水外溢或出血，用膠布固定。 術(shù)后臥床休息 12小時(shí)，隨時(shí)觀察胎心搏動(dòng)，并囑孕婦回去后適當(dāng)休息，二 周內(nèi)禁止劇烈運(yùn)動(dòng)，繼續(xù)口服舒喘靈三天， 抗生素三天。三天后去敷料，兩周內(nèi)避免性生活，如近日有出血腹痛等情況及時(shí)就診。 （六） 術(shù)中及術(shù)后可能并發(fā)癥 標(biāo)本取材及細(xì)胞培養(yǎng)有可能失?。ㄑ蚰?腔穿刺失敗率約為 %，培養(yǎng)失敗率約為 510%），若失敗需進(jìn)行第二次穿刺，每次取材不得超過(guò)兩次。標(biāo)本取材有可能引發(fā)流產(chǎn)（羊膜腔穿刺流產(chǎn)率約為%）、早產(chǎn)或死胎。 穿刺時(shí)可能有胎兒或臍帶損傷出血、胎盤(pán)出血或早剝、孕婦臟器損傷或羊水栓塞等情況。 羊膜腔穿刺羊水有血污染者約為 10%，但不影響診斷結(jié)果。 （七） 注意事項(xiàng) 向孕婦詳細(xì)說(shuō)明羊水穿刺的必要性及可能發(fā)生的并發(fā)癥。 術(shù)前認(rèn)真核對(duì)適應(yīng)癥、禁忌癥、妊娠周數(shù)、測(cè)量血壓、體 溫、胎心、 16 確定子宮大小及宮底高度。 穿刺前對(duì)孕婦全面查體，應(yīng)作血常規(guī)、出凝血時(shí)間、肝炎系列、抗HIV、梅毒抗體、血型、心電圖等檢查。 術(shù)前應(yīng)做 B超檢查，確定胎頭位置、胎齡大小、胎兒發(fā)育情況、胎盤(pán)附著部位、羊水量并確定穿刺點(diǎn)。 羊膜腔穿刺應(yīng)在手術(shù)室進(jìn)行，必須嚴(yán)格無(wú)菌操作，并在 B超引導(dǎo)下進(jìn)行。 術(shù)后應(yīng)囑孕婦臥床休息 12小時(shí)，并嚴(yán)密觀察胎心、宮縮情況，有無(wú)胎盤(pán)早剝、羊水外溢、腹痛、陰道出血情況， B 超檢查有無(wú)內(nèi)出血。 向孕婦交待可能發(fā)生的并發(fā)癥：囑孕婦若有腹痛、陰道出血、陰道流液等不適隨診。禁 止性生活 2周。避免體力活動(dòng) 2周。 二、 羊水細(xì)胞染色體標(biāo)本操作規(guī)程 取材：妊娠 1620 周孕婦在嚴(yán)格無(wú)菌操作下，經(jīng)腹部作羊膜腔穿刺抽取羊水，最初 2ml 羊水棄去不用，另?yè)Q注射器再取 20ml，分裝在 2 個(gè)無(wú)菌離心管內(nèi)。 離心：離心 (2020轉(zhuǎn) /分 )10 分鐘，無(wú)菌條件下吸去上清，留約 羊水，加入 3ml 培養(yǎng)液，制成細(xì)胞懸液，移到方形培養(yǎng)瓶中（蓋松動(dòng)），置 37℃、 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)，使細(xì)胞貼壁。 培養(yǎng)：培養(yǎng)約 57天取培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察，此時(shí)可見(jiàn)梭形纖維狀羊水細(xì)胞貼壁，并進(jìn)行換液，繼續(xù)培養(yǎng)。 收獲：約 10 天左右后收獲細(xì)胞，收獲前 處理，然后棄去培養(yǎng)液加入 %胰酶 2ml，約 3分鐘后，鏡下可見(jiàn)細(xì)胞脫落，加入 %生理鹽水 1ml，將消化液移入離心管中，離心 2020轉(zhuǎn) /分， 10分鐘。 低滲處理：棄去上清液，加入預(yù)溫 37℃的 ，約細(xì)胞壓積的 68倍（ 3ml 左右），輕輕沖吸混勻， 37℃溫箱內(nèi)低滲處理 30 分鐘。 預(yù)固定：低滲后加入新鮮配制的 3： 1 甲醇冰醋酸固定液 1ml，沖吸混勻，離心（ 2020轉(zhuǎn) /分） 10 分鐘。 固定：棄上清液，慢慢加入固定 液 3ml 沖吸混勻， 37 度溫水浴 靜置 10分鐘，離心（ 2020轉(zhuǎn) /分） 10 分鐘。 重復(fù)固定：按上一步驟重復(fù)固定一次。 制片：棄上清液，加入 ，沖吸混勻成細(xì)胞懸液，在低溫玻片上滴 34 滴，輕輕吹氣使其均勻平鋪在玻片上，空氣中晾干。 17 分帶染色：標(biāo)本片采用 60℃烤箱烤片 過(guò)夜 后，置濃度 %的胰蛋白酶中，消化 3060 秒，用 Giemsa 染色 5分鐘，流水沖洗晾干。 1 染色體核型分析。 原位法參照上述實(shí)驗(yàn)規(guī)程操作。 注 1：羊水培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)： 每培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)至少有三堆細(xì)胞島；每個(gè)細(xì)胞島在40 倍鏡下鋪滿(mǎn)視野；加秋水仙素前有 10 個(gè)以上圓細(xì)胞，加秋水仙素后圓細(xì)胞更多。 注 2：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)： 1．復(fù)查率不超過(guò) 10%。 2．質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照外周染色體部分。 注 3： 正常羊水染色體結(jié)果書(shū)寫(xiě)?染色體核型無(wú)異常?。 三、 外周血細(xì)胞染色體操作規(guī)程 采血培養(yǎng)：用經(jīng) %肝素濕潤(rùn)的注射器靜脈取血 2ml，接種到裝有5ml生長(zhǎng)液的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)（約 － －－去針頭后滴入 12 滴），然后每瓶注入 PHA 5mg，放入溫箱中 37℃，培養(yǎng) 70小時(shí)。 秋水仙素處理：培養(yǎng)至 70 小時(shí)后，加秋水仙素 2 滴（ 最終濃度）繼續(xù)培養(yǎng) 2小時(shí)。 低滲處理：將終止培養(yǎng)的細(xì)胞懸液離心，以 1500轉(zhuǎn) /分離心 10 分鐘，棄上清，加入 37℃ ℃溫箱30 分鐘。 預(yù)固定：在上述離心管內(nèi)加入 1ml 固定液（甲醇 3：冰醋酸 1）輕輕吹打混勻后以 1500轉(zhuǎn) /分離心 10 分鐘，棄上清。 固定：在上述離心管內(nèi)加入 68 ml固定液（甲醇：冰醋酸 =3： 1），放置 30 分鐘。 第二次固定：將上述離心管以 1500轉(zhuǎn) /分離心 10 分鐘，棄上清，加入 68 ml 固定液（甲醇 3：冰醋酸 1） ，放置 30 分鐘。 制片：將上述離心管以 1500 轉(zhuǎn) /分離心 10 分鐘，棄上清，加入 68滴固定液（甲醇 3：冰醋酸 1），輕輕吹打混勻成懸浮夜，將懸浮液滴在用冰水處理的載玻片上，每片 23 滴，輕輕吹氣使其均勻平鋪在玻片上，空氣中晾干。 分帶染色：標(biāo)本片采用 60℃烤箱烤片 過(guò)夜 后，置濃度 %的胰蛋白酶中，消化 3060 秒，用 Giemsa 染色 5分鐘，流水沖洗晾干。 按實(shí)驗(yàn)規(guī)范嚴(yán)格操作，玻片編號(hào)準(zhǔn)確，分帶適中（以 10 號(hào)染色體長(zhǎng)臂分帶清晰為標(biāo)準(zhǔn)）、染色清楚。 染色體核型分析。 18 注 1：染色體 核型分析 的閱片、審片、 報(bào)告發(fā)放規(guī)定 1．外周血一般滴片三張，分帶染色處理兩張。染色體核型分析時(shí)，所有被分析和計(jì)數(shù)的分裂相都要記錄玻片號(hào)和顯微鏡座標(biāo)。 2．每張玻片分別計(jì)數(shù) 10 個(gè)核型 (共需記數(shù) 20個(gè)核型 )，選擇 5個(gè)分散良好、帶型清晰的分裂相進(jìn)行分析，并于計(jì)算機(jī)中配對(duì)保存。如果在鏡下發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)相同異常的核型則計(jì)數(shù) 50 個(gè)核型，如其中又發(fā)現(xiàn)相同異常要計(jì)數(shù)至 100 個(gè)核型，并增加計(jì)算機(jī)分析核型至10 個(gè)。如疑嵌合體，計(jì)數(shù) 100個(gè)核型，并計(jì)算百分比。 3．報(bào)告發(fā)放時(shí)間為接收標(biāo)本后 1421天。如因特殊原因不能準(zhǔn)時(shí)發(fā)放報(bào)告者，應(yīng)及時(shí) 通知受檢者和 送檢醫(yī)師。 4．如發(fā)現(xiàn)染色體核型異常 (包括數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常 )，上級(jí)醫(yī)師或主任審片，方可發(fā)放報(bào)告。 5．發(fā)現(xiàn)受檢者染色體結(jié)構(gòu)異常者 (平衡易位、重復(fù)、 缺失等 )，應(yīng)建議 家系調(diào)查。 6．嵌合體發(fā)報(bào)告原則：?jiǎn)渭內(nèi)w型和結(jié)構(gòu)異常型應(yīng)有兩個(gè)或以上相同異常核型。單體型應(yīng)有三個(gè)或以上相同異常核型。確定為嵌合體后，計(jì)數(shù) 100個(gè)核型，并計(jì)算百分比。 7．如標(biāo)本培養(yǎng)失敗，應(yīng)即時(shí)通知受檢者和送檢醫(yī)師，以便能及時(shí)復(fù)查。 8．產(chǎn)前診斷染色體結(jié)果必須由兩名（包括兩名）以上資深細(xì)胞遺傳醫(yī)師或技師審片后方可發(fā)放。 9．發(fā)現(xiàn)胎兒染色 體結(jié)構(gòu)異常者，及時(shí)通知孕婦并應(yīng)建議夫婦雙方檢查染色體，如有必要，建議家系調(diào)查，以明確異常染色體的來(lái)源或是否突變。 10．一般情況下產(chǎn)前診斷嚴(yán)禁發(fā)放有關(guān)性別報(bào)告，除非醫(yī)學(xué)上具有明確的需要進(jìn)行胎兒性別鑒定指征者。 11．復(fù)查率不超過(guò) 5%。 注 2： 正常外周血染色體結(jié)果書(shū)寫(xiě)?染色體核型 46， XX或 46， XY?。 注 3： G分帶染色體核型分析 A組染色體：包括 13號(hào)，其長(zhǎng)度最長(zhǎng)； 1號(hào)和 3號(hào)染色體的著絲粒在 1/2處； 2號(hào)染色體的著絲粒在 3/8 處。 1 號(hào)染色體：著絲粒和次縊痕染色深。 短臂 —— 近側(cè) 段 和中段各有一條深帶 ，其中段深帶稍寬，處理較好的標(biāo)本上，遠(yuǎn)側(cè)段可顯出 34條淡然的深帶。 長(zhǎng)臂 —— 次縊痕緊貼著絲粒，染色濃 。其遠(yuǎn)側(cè)為一寬的淺帶，中段和遠(yuǎn)側(cè)段各有兩條深帶，以中段第 2 深帶染色較濃，中段兩條深帶 19 稍靠近。 2 號(hào)染色體： 短臂 —— 可見(jiàn)四條深帶，中段的兩條深帶稍靠近。 長(zhǎng)臂 —— 可見(jiàn) 67條深帶。 3 號(hào)染色體：著絲粒染色濃 。短臂和長(zhǎng)臂中段各有一條明顯而寬闊的淺帶，是該染色體的特征。兩臂近似對(duì)稱(chēng)，形似?蝴蝶?。 短臂 —— 一般在近側(cè)段可見(jiàn)兩條深帶，遠(yuǎn)側(cè)段可見(jiàn) 3 條深帶，其中遠(yuǎn)側(cè)近端部的一條較窄，且著色較淡，中間的 一條著色較深，這是區(qū)別第 3號(hào)染色體短臂的顯著特征。 長(zhǎng)臂 —— 一般在近側(cè)段和遠(yuǎn)側(cè)段各有一條較寬的深帶。在處理較好的標(biāo)本上，遠(yuǎn)側(cè)段的深帶可分為三條深帶。 B組染色體：包括 5號(hào)，長(zhǎng)度次于 A組，著絲粒約在 1/4 處。 4 號(hào)染色體： 短臂 —— 可見(jiàn)一條深帶。 長(zhǎng)臂 —— 可見(jiàn)均勻分布的四條深帶，近著絲粒的一條著色最深，在處理較好的標(biāo)本上，第 3深帶之間還可顯出一條較窄的深帶。 5 號(hào)染色體： 短臂 —— 可見(jiàn) 12條深帶，其遠(yuǎn)側(cè)的深帶寬而且著色濃。 長(zhǎng)臂 —— 近側(cè)段有兩條深帶，染色較淡，有時(shí)不顯 ；中段可見(jiàn)三條深帶，染色較濃，有時(shí)融合成一條；遠(yuǎn)側(cè)段可見(jiàn) 12 條深帶，近末端的一條著色較濃。 C組染色體：包括 612 號(hào)和 X染色體，中等長(zhǎng)度， 11 號(hào)和X 染色體著絲粒約在 3/8處，其它號(hào)的著絲點(diǎn)約在 1/4處。 6 號(hào)染色體：著絲粒染色濃 。 短臂 —— 中間有一條明顯而寬闊的淺帶，近側(cè)段和遠(yuǎn)側(cè)段各有一條深帶，近側(cè)段的深帶緊貼著絲粒。在處理較好的標(biāo)本上，遠(yuǎn)側(cè)段的深帶可分為兩條深帶。 長(zhǎng)臂 —— 可見(jiàn)五條深帶，近側(cè)的一條緊貼著絲粒。遠(yuǎn)側(cè)末端的一條深帶窄而且著色較淡。 7 號(hào)染色體：著絲粒染色濃 。 短臂 —— 有三條深帶，中間的一條窄而且極淡，有時(shí)不明顯，遠(yuǎn)側(cè)近末端的深帶著色濃而且稍寬，宛如?瓶蓋?，這常常是辨別第 7號(hào)染色體的顯著特征。 長(zhǎng)臂 —— 有三條明顯的深帶，遠(yuǎn)側(cè)近末端的一條著色較淡，第 2和第 3深帶稍接近。 8 號(hào)染色體： 20 短臂 —— 有兩條深帶，其間有一條明顯的淺帶，這是與 10 號(hào)染色體相區(qū)別的主要特征。 長(zhǎng)臂 —— 近側(cè)可見(jiàn) 23 條分界不明顯的深帶，遠(yuǎn)側(cè)段有一條明顯而恒定的深帶。