【文章內(nèi)容簡介】 參數(shù)設(shè)置分析儀的一些通用操作步驟如取樣、沖洗、吸光度檢測、數(shù)據(jù)處理等，其程序均已經(jīng)固化在存儲器里，用戶不能修改。各種測定項(xiàng)目的分析參數(shù)（analysis　paramete）大部分也已設(shè)計(jì)好，存于磁盤中，供用戶使用；目前大多數(shù)生化分析儀為開放式，用戶可以更改這些參數(shù)。生化分析儀一般另外留一些檢測項(xiàng)目的空白通道，由用戶自己設(shè)定分析參數(shù)。因此必須理解各參數(shù)的確切意義。一、分析參數(shù)介紹（一）必選分析參數(shù)這類參數(shù)是分析儀檢測的前提條件，沒有這些參數(shù)無法進(jìn)行檢測。1．試驗(yàn)名稱 試驗(yàn)名稱（test code）是指測定項(xiàng)目的標(biāo)示符，常以項(xiàng)目的英文縮寫來表示。2．方法類型（也稱反應(yīng)模式） 方法類型（assay）有終點(diǎn)法、兩點(diǎn)法、連續(xù)監(jiān)測法等，根據(jù)被檢物質(zhì)的檢測方法原理選擇其中一種反應(yīng)類型。3．反應(yīng)溫度 一般有30℃、37℃可供選擇，通常固定為37℃。4．主波長 主波長（primary wavelength）是指定一個與被測物質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收有關(guān)的波長。5．次波長 次波長（secondary wavelength）是在使用雙波長時，要指定一個與主波長、干擾物質(zhì)光吸收有關(guān)的波長。6．反應(yīng)方向 反應(yīng)方向（response direction）有正向反應(yīng)和負(fù)向反應(yīng)兩種，吸光度增加為正向反應(yīng)，吸光度下降為負(fù)向反應(yīng)。7．樣品量 樣品量（sampling volum）一般是2μl～35μl?？稍O(shè)置常量、減量和增量。8． 第一試劑量 第一試劑量（first regengt volum）一般是20～300μl，以1μl步進(jìn)。9． 第二試劑量 第二試劑量（second regengt volum）一般也是20～300μl，以1μl步進(jìn)。10．總反應(yīng)容量 總反應(yīng)容量（total reacting volum）在不同的分析儀有一個不同的規(guī)定范圍，一般是180～350μl，個別儀器能減少至120μl?？偡磻?yīng)容量太少無法進(jìn)行吸光度測定。11．孵育時間 孵育時間（incubate time）在終點(diǎn)法是樣品與試劑混勻開始至反應(yīng)終點(diǎn)為止的時間，在兩點(diǎn)法是第一個吸光度選擇點(diǎn)開始至第二個吸光度選擇點(diǎn)為止的時間。12．延遲時間 延遲時間（delay time）在連續(xù)監(jiān)測法中樣品與反應(yīng)試劑（第二試劑）混勻開始至連續(xù)監(jiān)測期第一個吸光度選擇點(diǎn)之間的時間。13．連續(xù)監(jiān)測時間 連續(xù)監(jiān)測時間（continuous monitoring time）在延遲時間之后即開始，一般為60～120s，不少于4個吸光度檢測點(diǎn)（3個吸光度變化值）。14．校準(zhǔn)液個數(shù)及濃度 校準(zhǔn)曲線線性好并通過坐標(biāo)零點(diǎn)的，可采用一個校準(zhǔn)液（calibrator）；線性好但不通過坐標(biāo)零點(diǎn)，應(yīng)使用兩個校準(zhǔn)液；對于校準(zhǔn)曲線呈非線性者，必須使用兩個以上校準(zhǔn)液。每一個校準(zhǔn)液都要有一個合適的濃度。15．校準(zhǔn)K值或理論K值 通過校準(zhǔn)得到的K值為校準(zhǔn)K值（calibrate coefficient）或由計(jì)算得出的K值為理論K值。16．線性范圍 即方法的線性范圍（linearity range），超過此范圍應(yīng)增加樣品量或減少樣品量重測。與試劑/樣品比值有關(guān)。17．小數(shù)點(diǎn)位數(shù) 檢測結(jié)果的小數(shù)點(diǎn)位數(shù)（decimal point digit）。（二）備選分析參數(shù)這類分析參數(shù)與檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性有關(guān)，一般來說不設(shè)置這類分析參數(shù)，分析儀也能檢測出結(jié)果，但若樣品中待測物濃度太高等，檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確。1．樣品預(yù)稀釋 設(shè)置樣品量、稀釋劑量和稀釋后樣品量三個數(shù)值，便可在分析前自動對樣品進(jìn)行高倍稀釋。2．底物耗盡值 底物耗盡值（substrate exhaust limit）在負(fù)反應(yīng)的酶活性測定中，可設(shè)置此參數(shù)，以規(guī)定一個吸光度下降限。若低于此限時底物已太少，不足以維持零級反應(yīng)而導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。 3．前區(qū)檢查 免疫比濁法中應(yīng)用，以判斷是否有抗原過剩。將終點(diǎn)法最后兩個吸光度值的差別（ΔA）設(shè)置一個限值，如果后一點(diǎn)的吸光度比前一點(diǎn)低，表示已有抗原過剩，應(yīng)稀釋樣品后重測。4．試劑空白吸光度范圍 超過此設(shè)定范圍表示試劑已變質(zhì)，應(yīng)更換合格試劑。5．試劑空白速率 連續(xù)監(jiān)測法中使用，是試劑本身在監(jiān)測過程中沒有化學(xué)反應(yīng)時的變化速率。6．方法學(xué)補(bǔ)償系數(shù) 用于校準(zhǔn)不同分析方法間測定結(jié)果的一致性，有斜率和截距兩個參數(shù)。7．參考值范圍 對超過此范圍的測定結(jié)果，儀器會打印出提示。（三）某些參數(shù)的特殊意義 1．最小樣品量 最小樣品量是指分析儀進(jìn)樣針能在規(guī)定的誤差范圍內(nèi)吸取的最小樣品量。一般分析儀的最小樣品量是2μl。在樣品含高濃度代謝產(chǎn)物或高活性酶濃度的情況下往往需采用分析儀的最小樣品量作為減量參數(shù)，從而使分析儀檢測范圍（與線性范圍不同）的上限得以擴(kuò)大。2．最大試劑量 方法靈敏度很高而線性上限低的檢測項(xiàng)目，如血清白蛋白的溴甲酚氯法測定，以往手工法操作時樣品量10μl，試劑量4ml，這樣試劑量/樣品量比例（R/S）為200，線性上限則為60g/L。此法移植到分析儀上后，R/S卻很難達(dá)到200，致使線性上限變低。因此對這類檢測項(xiàng)目最大試劑量非常重要。 3．彈性速率 在酶活性測定中，當(dāng)酶活性太高，在連續(xù)監(jiān)測期中已不呈線性反應(yīng)時，有些儀器具有彈性速率（flexrate）功能，能自動選擇反應(yīng)曲線上連續(xù)監(jiān)測期中仍呈線性的吸光度數(shù)據(jù)計(jì)算結(jié)果，使酶活性測定的線性范圍得以擴(kuò)大。如AST可從1000U/L擴(kuò)展至4000U/L，從而減少稀釋及重測次數(shù)、降低成本。4．試劑空白速率 當(dāng)樣品中存在膽紅素時，膽紅素對堿性苦味酸速率法或兩點(diǎn)法測定肌酐有負(fù)干擾。因?yàn)槟懠t素在肌酐檢測的波長505nm有較高光吸收，而且膽紅素在堿性環(huán)境中可被氧化轉(zhuǎn)變，因而在肌酐反應(yīng)過程中膽紅素的光吸收呈下降趨勢。若在加入第一試劑后一段時間內(nèi)設(shè)置試劑空白速率，因?yàn)榇硕沃锌辔端嵘形磁c肌酐反應(yīng)，而膽紅素在第一試劑的堿性環(huán)境中已同樣被氧化轉(zhuǎn)變，因而以第二試劑加入后的速率變化，減去試劑空白速率變化，便可消除膽紅素的負(fù)干擾，見圖78。二、單波長和雙波長方式（一）概念采用一個波長檢測物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式稱為單波長(monowavelength)方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分，或在混合反應(yīng)液中待測組分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時，可以選用。在吸光度檢測中，使用一個主波長和一個次波長的稱雙波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性時，采用雙波長方式更好。（二）雙波長的作用雙波長(diwavelength)測定優(yōu)點(diǎn)是①消除噪音干擾。②減少雜散光影響。③減少樣品本身光吸收的干擾。從光源，到比色杯、單色器、檢測器的整個光路系統(tǒng)中，均存在著隨時間發(fā)生變化的不穩(wěn)定的檢測信號，即噪音，而雙波長檢測是同時進(jìn)行的，兩種波長檢測產(chǎn)生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干擾。當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時，會產(chǎn)生非特異性的光吸收，而干擾測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用雙波長方式測定可以部分消除這類干擾，提高檢測的準(zhǔn)確性。 （三）次波長的確定方法當(dāng)被測物的主波長確定之后，再選擇次波長。如根據(jù)甘油三酯等干擾物吸收光譜特征，選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。一般來說，次波長應(yīng)大于主波長100nm。以主波長與次波長吸光度差來計(jì)算結(jié)果。（四）雙波長的具體應(yīng)用對于某些反應(yīng)速度快且無法設(shè)置為兩點(diǎn)終點(diǎn)法的分析項(xiàng)目，尤其是單試劑分析中，可以利用雙波長的方式來部分消除樣品本身的光吸收干擾。目前用單試劑法測定的項(xiàng)目應(yīng)用雙波長的為血清總蛋白（雙縮脲法）主波長500nm，次波長576nm；血清白蛋白（溴甲酚氯法）主、次波長分別為600和700nm；鈣（偶氮砷Ⅲ法）主、次波長分別為 660、770nm；磷（紫外比色法）主、次波長為3405nm，鎂（二甲苯胺藍(lán)法）主、次波長為505和 600nm。三、單試劑和雙試劑方式反應(yīng)過程中只加一次試劑稱單試劑方式，加兩次試劑便為雙試劑方式。目前的生化分析儀大多可用雙試劑方式分析，其優(yōu)點(diǎn)是：①可提高試劑的穩(wěn)定性，多數(shù)雙試劑混合成單一工作試劑時，其穩(wěn)定時間縮短；②能設(shè)置兩點(diǎn)終點(diǎn)法，來消除來自樣品本身的光吸收干擾；③在某些項(xiàng)目檢測時能消除非特異性化學(xué)反應(yīng)的干擾。如血清ALT測定，血清中的內(nèi)源性丙酮酸及其它酮酸也可與試劑中的指示酶（乳酸脫氫酶）起反應(yīng)，使結(jié)果偏高。若先加入缺乏α酮戊二酸的第一試劑，使其它酮酸與指示酶反應(yīng)之后再加入含有α酮戊二酸的第二試劑，啟動真正的ALT酶促反應(yīng)生成丙酮酸，而丙酮酸與乳酸脫氫酶的反應(yīng)消耗的NAD＋能真正反映ALT的活性，從而消除以上副反應(yīng)的影響。四、測定過程的自動監(jiān)測各種自動生化分析儀或多或少都具有對測定過程進(jìn)行各種監(jiān)測的功能