麻竹葉中竹多糖的堿提法的初探(編輯修改稿)
2025-06-24 00:57 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 需要進一步除蛋白。把透析袋剪成適當長度15cm的小段，在2%碳酸氫鈉和1mmoL/L EDTA ()溶液中將透析袋煮沸10min，用蒸餾水徹底清洗透析袋，放在1mmoL/L EDTA ()中將之再煮沸10min，冷卻后，存放于4℃的冰箱中，備用。 用蒸餾水沖洗處理后的透析袋5次，用透析夾夾住一端，將上述已經(jīng)脫蛋白的多糖溶液裝入透析袋中，離液面2－3cm處夾緊透析袋，置于一大燒杯中，置于流動的自來水中2d。再將裝有多糖溶液的透析袋置于裝有蒸餾水的大燒杯中，每12h換一次水，重復(fù)4次。取出透析袋內(nèi)的多糖溶液，經(jīng)減壓濃縮后，于60℃下真空干燥至干，得竹葉多糖，稱量并記錄。取1支試管，加入1mL1%竹多糖溶液，加入莫氏試劑2滴，搖勻，將試管傾斜，硫酸層沉于試管底部，于糖溶液分成兩層，觀察液面交界處有無紫色環(huán)出現(xiàn)。、、得一系列濃度為1122336mg/L的標準溶液。，分，靜置10min，搖勻，室溫放置20min以蒸餾水作空白，于490nm處測吸光度，作標準曲線。，其他條件與做標準曲線相同，從測得的吸光度值，由標準曲線查算出樣品液的糖含量，并進一步計算出樣品中多糖的百分含量。W=100﹪W：糖的質(zhì)量分數(shù)（﹪）C：從標準曲線查算出樣品液的糖質(zhì)量濃度（mg/mL)V:竹多糖樣品溶液稀釋后的體積（mL)m：竹多糖樣品的質(zhì)量（mg），各6份,按照標準曲線制備方法測定吸光度，計算RSD值。，溶解，于100mL的容量瓶中定容，配成加標樣品母液，于100mL的容量瓶中定容，配成濃度為5mg/L的加標樣品溶液，按標準曲線操作測定樣品溶液和加標樣品溶液的吸光度值。4結(jié)果分析提取后，測得粗多糖質(zhì)量為：經(jīng)純化后，測得竹多糖質(zhì)量為：竹多糖的產(chǎn)率較低。：取1支試管，加入1mL1%竹多糖溶液，加入莫氏試劑2滴，搖勻，將試管傾斜，硫酸層沉于試管底部，于糖溶液分成兩層，液面交界處有紫色環(huán)出現(xiàn)。說明是多糖。表41 葡萄糖標準曲線數(shù)據(jù)表Table 41 Data of standard curve of glucose 管號 0 1 2 3 4 5 6 7 8 葡萄糖濃度/（ug/ml） 0 8 12 16 20 24 28 32 36A490nm 0 圖41 標準曲線 Standard curve由圖41可知，曲線方程為y=y = ，其線性相關(guān)系數(shù)R2=，線性良好，能夠用作含量計算的標準曲線圖。樣品中竹多糖含量測定數(shù)據(jù)如表42表42 樣品中竹多糖含量測定數(shù)據(jù)Table 42 Determination of the content of bamboo polysaccharide in the sample 編號 0 1 竹多糖樣品濃度（mg/ml） 0 A490nm 0 測得糖濃度（mg/ml） 0 糖含量 0 %由表42可知，%。表43 精密度測定實驗結(jié)果 Tab1e3 Results of precision experiments 1 2 3 4 5 6 平均值 S RSD標準溶液 %樣品溶液 %由表43可知，%、%。試驗重復(fù)性好，所得試驗結(jié)果可靠。苯酚硫酸法測定竹多糖糖含量加標回收率實驗數(shù)據(jù)如表43：表43 加標回收率Table 43 The recovery of standard addition 編號 濃度（mg/ml） 吸光度 測得糖濃度（mg/ml） 回收率 葡萄糖標準點 竹多糖樣品溶液 % 加標溶液 + 從上表43中樣品加標回收率實驗數(shù)據(jù)不難發(fā)現(xiàn)，本試驗所采用的苯酚硫酸法測定百合多糖中糖含量的方法具有較好的回收率。5討論竹子是屬于禾本科竹亞科的一類植物[21,22]。我國竹資源豐富，但各種品種的含糖量各有不同[23]。葉建中[24]等研究表明，同品種的竹葉上下部位多糖含量有所不同，且含量都是下部老葉高于上部嫩葉子。因而,多糖更多富集在下部老葉片中[5]。所以本試驗選取的是竹下部的老葉。Sevage法：根據(jù)蛋白質(zhì)在氯仿等有機溶劑中變性的特點，用（氯仿）∶（戊醇或正丁醇）為5∶1或4∶1，混合物劇烈振搖20～30次 ，蛋白質(zhì)變性生成凝膠，離心分離，分去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì)，此種只能除去少量蛋白質(zhì)，效率不高，須反復(fù)多次，但此方法比較溫和，在避免多糖降解上效果較好，如配合加入一些蛋白質(zhì)水解酶，用Sevage法效果更佳。韓春然[25]等試驗，酶法提取的黑木耳多糖，多糖溶液1/4體積加入Seavge試劑，劇烈震蕩30min，脫蛋白質(zhì)效果較好。三氟三氯乙烷法：將多糖溶液與三氟三氯乙烷等體積混合，低溫攪拌10min左右，離心分離得上層水層，水層繼續(xù)用上述方法反復(fù)處理幾次，得無蛋白質(zhì)的多糖溶液，此法效率較Seavge法高，但溶劑沸點低，易揮發(fā)，不宜大量應(yīng)用。三氯乙酸法：三氯乙酸是一種有機酸，使多糖提取液中的蛋白質(zhì)與有機酸作用而變性沉淀。該法是在多糖水提液中滴加5%～10%與多糖水提取液等體積的三氯乙酸，混勻靜置過夜，離心除去膠狀沉淀，重復(fù)以上的操作直至溶液不再繼續(xù)混濁為止，得無蛋白質(zhì)的多糖，三氯乙酸濃度越大，除蛋白質(zhì)效果越好，但對多糖的影響也越大，可能是三氯乙酸對多糖結(jié)構(gòu)具有破壞作用，使多糖降解，而且這種破壞作用隨著三氯乙酸濃度增大而增強。馬利華[26]等也在純化牛蒡多糖過程中得出：三氯乙酸法去除蛋白率高，但多糖在三氯乙酸中不穩(wěn)定，糖苷鍵易斷
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