麻竹葉中竹多糖的堿提法的初探(編輯修改稿)
2025-06-24 00:57 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 需要進(jìn)一步除蛋白。把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度15cm的小段，在2%碳酸氫鈉和1mmoL/L EDTA ()溶液中將透析袋煮沸10min，用蒸餾水徹底清洗透析袋，放在1mmoL/L EDTA ()中將之再煮沸10min，冷卻后，存放于4℃的冰箱中，備用。 用蒸餾水沖洗處理后的透析袋5次，用透析夾夾住一端，將上述已經(jīng)脫蛋白的多糖溶液裝入透析袋中，離液面2－3cm處夾緊透析袋，置于一大燒杯中，置于流動(dòng)的自來(lái)水中2d。再將裝有多糖溶液的透析袋置于裝有蒸餾水的大燒杯中，每12h換一次水，重復(fù)4次。取出透析袋內(nèi)的多糖溶液，經(jīng)減壓濃縮后，于60℃下真空干燥至干，得竹葉多糖，稱量并記錄。取1支試管，加入1mL1%竹多糖溶液，加入莫氏試劑2滴，搖勻，將試管傾斜，硫酸層沉于試管底部，于糖溶液分成兩層，觀察液面交界處有無(wú)紫色環(huán)出現(xiàn)。、、得一系列濃度為1122336mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。，分，靜置10min，搖勻，室溫放置20min以蒸餾水作空白，于490nm處測(cè)吸光度，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。，其他條件與做標(biāo)準(zhǔn)曲線相同，從測(cè)得的吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查算出樣品液的糖含量，并進(jìn)一步計(jì)算出樣品中多糖的百分含量。W=100﹪W：糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（﹪）C：從標(biāo)準(zhǔn)曲線查算出樣品液的糖質(zhì)量濃度（mg/mL)V:竹多糖樣品溶液稀釋后的體積（mL)m：竹多糖樣品的質(zhì)量（mg），各6份,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD值。，溶解，于100mL的容量瓶中定容，配成加標(biāo)樣品母液，于100mL的容量瓶中定容，配成濃度為5mg/L的加標(biāo)樣品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線操作測(cè)定樣品溶液和加標(biāo)樣品溶液的吸光度值。4結(jié)果分析提取后，測(cè)得粗多糖質(zhì)量為：經(jīng)純化后，測(cè)得竹多糖質(zhì)量為：竹多糖的產(chǎn)率較低。：取1支試管，加入1mL1%竹多糖溶液，加入莫氏試劑2滴，搖勻，將試管傾斜，硫酸層沉于試管底部，于糖溶液分成兩層，液面交界處有紫色環(huán)出現(xiàn)。說(shuō)明是多糖。表41 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)表Table 41 Data of standard curve of glucose 管號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 葡萄糖濃度/（ug/ml） 0 8 12 16 20 24 28 32 36A490nm 0 圖41 標(biāo)準(zhǔn)曲線 Standard curve由圖41可知，曲線方程為y=y = ，其線性相關(guān)系數(shù)R2=，線性良好，能夠用作含量計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。樣品中竹多糖含量測(cè)定數(shù)據(jù)如表42表42 樣品中竹多糖含量測(cè)定數(shù)據(jù)Table 42 Determination of the content of bamboo polysaccharide in the sample 編號(hào) 0 1 竹多糖樣品濃度（mg/ml） 0 A490nm 0 測(cè)得糖濃度（mg/ml） 0 糖含量 0 %由表42可知，%。表43 精密度測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果 Tab1e3 Results of precision experiments 1 2 3 4 5 6 平均值 S RSD標(biāo)準(zhǔn)溶液 %樣品溶液 %由表43可知，%、%。試驗(yàn)重復(fù)性好，所得試驗(yàn)結(jié)果可靠。苯酚硫酸法測(cè)定竹多糖糖含量加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表43：表43 加標(biāo)回收率Table 43 The recovery of standard addition 編號(hào) 濃度（mg/ml） 吸光度 測(cè)得糖濃度（mg/ml） 回收率 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn) 竹多糖樣品溶液 % 加標(biāo)溶液 + 從上表43中樣品加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不難發(fā)現(xiàn)，本試驗(yàn)所采用的苯酚硫酸法測(cè)定百合多糖中糖含量的方法具有較好的回收率。5討論竹子是屬于禾本科竹亞科的一類(lèi)植物[21,22]。我國(guó)竹資源豐富，但各種品種的含糖量各有不同[23]。葉建中[24]等研究表明，同品種的竹葉上下部位多糖含量有所不同，且含量都是下部老葉高于上部嫩葉子。因而,多糖更多富集在下部老葉片中[5]。所以本試驗(yàn)選取的是竹下部的老葉。Sevage法：根據(jù)蛋白質(zhì)在氯仿等有機(jī)溶劑中變性的特點(diǎn)，用（氯仿）∶（戊醇或正丁醇）為5∶1或4∶1，混合物劇烈振搖20～30次 ，蛋白質(zhì)變性生成凝膠，離心分離，分去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì)，此種只能除去少量蛋白質(zhì)，效率不高，須反復(fù)多次，但此方法比較溫和，在避免多糖降解上效果較好，如配合加入一些蛋白質(zhì)水解酶，用Sevage法效果更佳。韓春然[25]等試驗(yàn)，酶法提取的黑木耳多糖，多糖溶液1/4體積加入Seavge試劑，劇烈震蕩30min，脫蛋白質(zhì)效果較好。三氟三氯乙烷法：將多糖溶液與三氟三氯乙烷等體積混合，低溫?cái)嚢?0min左右，離心分離得上層水層，水層繼續(xù)用上述方法反復(fù)處理幾次，得無(wú)蛋白質(zhì)的多糖溶液，此法效率較Seavge法高，但溶劑沸點(diǎn)低，易揮發(fā)，不宜大量應(yīng)用。三氯乙酸法：三氯乙酸是一種有機(jī)酸，使多糖提取液中的蛋白質(zhì)與有機(jī)酸作用而變性沉淀。該法是在多糖水提液中滴加5%～10%與多糖水提取液等體積的三氯乙酸，混勻靜置過(guò)夜，離心除去膠狀沉淀，重復(fù)以上的操作直至溶液不再繼續(xù)混濁為止，得無(wú)蛋白質(zhì)的多糖，三氯乙酸濃度越大，除蛋白質(zhì)效果越好，但對(duì)多糖的影響也越大，可能是三氯乙酸對(duì)多糖結(jié)構(gòu)具有破壞作用，使多糖降解，而且這種破壞作用隨著三氯乙酸濃度增大而增強(qiáng)。馬利華[26]等也在純化牛蒡多糖過(guò)程中得出：三氯乙酸法去除蛋白率高，但多糖在三氯乙酸中不穩(wěn)定，糖苷鍵易斷
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