體內(nèi)藥物分析方法及方法的設(shè)計(jì)與評價(jià)(編輯修改稿)
2025-06-22 02:40 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 者相差應(yīng)小于 10％ ， 否則回收率偏離 100％ 太遠(yuǎn) 。 2． 方法回收率 ? 取一系列濃度的藥物標(biāo)準(zhǔn)品加到空白體液中 ，按設(shè)定方法測定 ， 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度及響應(yīng)的測定信號(hào)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 ， 先按最小二乘法求出回歸方程 。 然后取高 、 中 、 低濃度的藥物標(biāo)準(zhǔn)品添加到空白體液中 ， 每個(gè)濃度至少平行測定5份 ， 按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法同法測定 ， 所得信號(hào)值代入回歸方程 ， 求得測定值 。 最后與加入量比較 ， 得方法回收率 。 除定量限外 ， 各濃度點(diǎn)測得的平均值偏離實(shí)際加入量應(yīng)小于 15％ ，定量限這一點(diǎn)應(yīng)小于 20％ 。 ? 在測定回收率時(shí) ， 不管采用何種方法 ， 都要注意以下幾個(gè)問題： ① 添加的藥物量必須與實(shí)際測定量相近； ② 添加物質(zhì)必須與實(shí)際存在的狀態(tài)相似； ③ 必須同時(shí)做空白試驗(yàn) 。 ? 上述 ① 、 ② 兩點(diǎn)的原因： ? 一是如果添加量大 ， 實(shí)際測定量小 ， 那么有可能測定量在回收率的誤差范圍內(nèi) ， 這樣就不可靠； ? 二是如果添加量大 ， 蛋白質(zhì)實(shí)際結(jié)合能力小 ，這樣存在在空白血樣中的添加藥物部分沒有結(jié)合 ， 與實(shí)際存在的情況不符 ， 測得回收率容易偏高 。 ? 因此在報(bào)道一個(gè)方法的回收率時(shí) ， 必須說明添加量 。 ? 方法的準(zhǔn)確度有時(shí)也可用一個(gè)已證明有相當(dāng)專屬性和可靠性的方法與新建立的方法同時(shí)進(jìn)行測定 ， 然后比較兩法測得結(jié)果的相關(guān)程度 。 用相關(guān)系數(shù) r來表示 ， 一般要求 r＞ ， 直線的斜率接近 1， 表明兩法吻合 。 (二 )精密度 ? 精密度 (precision)是表示一組測量值彼此符合的程度 。 有多種表示方法 ， 在體內(nèi)藥物分析中常用的表示方法有： 100%SR S DX??相 對 標(biāo) 準(zhǔn) 差 : 21()1niiXXSn?????標(biāo) 準(zhǔn) 差 : ? 精密度測定通常采用高 、 中 、 低三種濃度進(jìn)行測定 。 低濃度選擇在定量限 (LOQ)附近 ， 高濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限附近 ， 中間選一個(gè)濃度 。每個(gè)濃度平行測定 5～ 7次 ， 計(jì)算測定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差 。 除定量限外 ， 各濃度點(diǎn)的 RSD不應(yīng)大于15％ ， 最低定量限這一點(diǎn)不應(yīng)大于 20％ 。 ? 精密度可進(jìn)一步分為日內(nèi)或批內(nèi)精密度和日間或批間精密度 。 前者表示一次測定的重復(fù)性 ，后者表示不同時(shí)間測定結(jié)果的重復(fù)性 。 ? 日內(nèi) (或批內(nèi) )精密度是考察分析方法在短期內(nèi)測定方法的變異情況 ， 凡是在同一天內(nèi)將樣品多次測定所計(jì)算出的精密度稱為日內(nèi)精密度；凡在同一批內(nèi)樣品多次測定所計(jì)算出的精密度稱為批內(nèi)精密度 。 所謂 “ 批內(nèi) ” 是指測定時(shí)使用同批試劑 、 同一條標(biāo)準(zhǔn)曲線等主要相同條件下完成的分析測定 。 ? 日間 (或批間 )精密度是考察分析方法在不同時(shí)間測定結(jié)果的變異情況 。 由于體內(nèi)藥物分析面臨樣品數(shù)量多 ， 測定持續(xù)時(shí)間長 ， 往往在同一天或同一批內(nèi)不能完成 ， 因此樣品測定時(shí)使用的儀器性能 、 試劑 、 標(biāo)準(zhǔn)曲線及環(huán)境條件等都可能發(fā)生微小的變化 ， 從而導(dǎo)致分析結(jié)果的變異增大 。 因此 ， 考察分析方法的精密度時(shí) ， 還應(yīng)考察日間或批間精密度 。 測定時(shí)可使用日內(nèi) (或批內(nèi) )精密度測定時(shí) ， 所使用的高 、 中 、 低三種濃度樣品 ， 在同一周內(nèi)不同日 (或不同批 )分別測定 3～ 5次 ， 然后計(jì)算出 RSD。 （ 三 ） 靈敏度 ? 靈敏度 (sensitivity)是指一種方法可以檢測出有關(guān)化合物的最小量 ， 常用以下幾種表示方法 。 1． 檢測限 (limit of detection， LOD) ? 檢測限表示在生物介質(zhì)中藥物的最低可測度(或絕對量 )。 ? 通常以被測信號(hào)和背景噪音比 S/N為 2～ 3倍時(shí)的被測物的絕對量來表示 ， LOD＝ 3N/S（ N＝噪音 ， S＝被測物信號(hào) /單位重量 )。 ? 例如 ， 在色譜分析中 ， 測得 N＝ 1mm， 取2ug/mL 的 樣 品 液 20uL 進(jìn)樣 ， 測 得 峰 高 為30mm。 按上式計(jì)算： ? 即以 S/N＝ 3時(shí) ， 測得樣品的 LOD為 4ng。 ? 也可通過多次空白試驗(yàn) ， 求得背景響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差 ， 再乘以 2或 3， 作為 LOD的估計(jì)值 ， 然后配制相應(yīng)檢測限濃度樣品 ， 反復(fù)測試來確定 。 2． 定量限 (limit of qnantification， LOQ) ? 定量限是指生物介質(zhì)中藥物可定量測定的最低量 ， 表示方式和測定方法與檢測限相同 ， 它與檢測限的不同在于定量限規(guī)定的最低測得濃度應(yīng)該符合一定精密度和準(zhǔn)確度的要求 。 ? 通常以標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度點(diǎn)作為定量限 。 也可以 S/N＝ 10或空白背景響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差乘以 10作為估計(jì)值 ， 再通過試驗(yàn)確定 。 ? 在進(jìn)行藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)時(shí)要求 LOQ至少能滿足測定 3～ 5個(gè)半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度 ， 或 Cmax的 1/10～ 1/20時(shí)的藥物濃度 。 3． 最低檢測濃度 ? 最低檢測濃度則多指可進(jìn)行定量測定的某一藥物的最低濃度 ， 它與樣品體積大小等因素有關(guān) ， 可通過下式求得 ， ? 以上表示靈敏度的方法均是指儀器的靈敏度 ，即進(jìn)入儀器的最低絕對量或最低濃度 。 ? 如果我們要知道體內(nèi)樣品的濃度檢測限 ， 則要根據(jù)樣品處理方法 ， 考慮稀釋度 。 ? 體內(nèi)樣品的濃度檢測限＝儀器的濃度檢測限 樣品稀釋度 ? 例如 ， 取血樣 1mL， 經(jīng)處理后進(jìn)樣前的血樣最終體積為 ， 已知最低檢測濃度為 106，則血樣中被測物的最低濃度為 106。 若經(jīng)處理后 ， 最終體積為 10 mL， 則血樣中被測物的最低濃度為 10 106。 這表明雖然儀器靈敏皮相同 ， 但因樣品預(yù)處理方法不同 ， 就有可能影響到實(shí)際樣品測定的靈敏度 。 ? 要提高檢測靈敏度 ， 可采用如下一些方法： ① 提高儀器本身的靈敏度； ② 提高進(jìn)樣量； ③ 降低儀器噪音； ④ 提高樣品的濃縮程度或降低樣品稀釋度； ⑤ 消除干擾 ， 降低空白值 ， 這可通過改變色譜條件 ， 改進(jìn)預(yù)處理方法來減少于擾雜質(zhì)的影響 。 （ 四 ） 方法的專屬性 ? 方法的專屬性 (specificity) 也稱選擇性(selectivity)， 是指樣品中含有其他共存物質(zhì)時(shí) ， 該法定量測定被測物的能力 。 即測定的訊號(hào)應(yīng)是屬于被測物所特有的 ， 否
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