苯酚降解菌的分離和鑒定(編輯修改稿)
2025-06-12 07:02 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 氣氧化使污水中的苯酚氧化分解成COH2O等無(wú)害物質(zhì)，達(dá)到凈化目的。其特點(diǎn)是凈化效率高，流程簡(jiǎn)單，占地面積少。生物強(qiáng)化技術(shù) 生物強(qiáng)化技術(shù)是指在生物處理體系中投加具有特定功能的微生物來(lái)改善原有處理體系的處理效果。投加的微生物可以來(lái)源于原有的處理體系，經(jīng)過(guò)馴化、富集、篩選、培養(yǎng)達(dá)到一定數(shù)量后投加，也可以是原來(lái)不存在的外源微生物。實(shí)際應(yīng)用中這兩種方法都有采用，主要取決于原有處理體系中的微生物組成及所處的環(huán)境。這一技術(shù)可以充分發(fā)揮微生物的潛力，改善難降解有機(jī)物生物處理效果。Selvaratnam等通過(guò)在活性污泥中投加苯酚降解菌Psendomonas Pvotida ATCC11172，提高了苯酚的去除率，系統(tǒng)在40d內(nèi)一直保持在95％－100％的苯酚去除率，而沒(méi)有進(jìn)行生物強(qiáng)化的對(duì)照組中苯酚去除率開(kāi)始很高，但很快降到40％左右。芬頓試劑技術(shù) 芬頓試劑對(duì)有機(jī)分子的破壞是非常有效的，其實(shí)質(zhì)是二價(jià)鐵離子和過(guò)氧化氫之間的鏈反應(yīng)催化生成OH自由基，三價(jià)鐵離子催化劑（稱(chēng)芬頓類(lèi)試劑）也能激發(fā)這個(gè)反應(yīng)，這兩個(gè)反應(yīng)生成的OH自由基能有效地氧化各種有毒的和難處理的有機(jī)化合物如苯酚；或者采用紫外燈作為輻射能源放射紫外線(xiàn)進(jìn)入廢水，當(dāng)過(guò)氧化氫被紫外光激活后，反應(yīng)產(chǎn)物是一個(gè)高反應(yīng)性的OH自由基，這個(gè)OH基團(tuán)迅速引發(fā)氧化鏈反應(yīng)，最終有機(jī)化合物被分解為CO2和H2O。[9]苯酚降解菌的篩選主要有兩種方式:第一種是將從廢水中和土壤中富集的細(xì)菌進(jìn)行馴化，使其達(dá)到可以以苯酚為單一碳源的高效菌種。第二種是將自然界得來(lái)的細(xì)菌直接接入只有以苯酚為單一碳源的培養(yǎng)液中進(jìn)行缺陷培養(yǎng)，得到的就是可以以苯酚為單一碳源的菌種。上面提到的主要苯酚處理方式中 催化濕式氧化技術(shù)優(yōu)點(diǎn)是經(jīng)濟(jì)但是它的催化過(guò)程中需要高溫高壓，消耗能源、水資源而且需要設(shè)備的支持，前期投入大。芬頓試劑技術(shù)中催化中需要Fe2+ 酸性環(huán)境催化效率高。Fe2+可能導(dǎo)致二次Fe2+污染，酸性環(huán)境不僅容易造成設(shè)備的耐久度降低而且需要大量的堿來(lái)中和它。而生物技術(shù)連續(xù)性好，反應(yīng)條件溫和，無(wú)劇烈反應(yīng)條件，且不消耗能源，從長(zhǎng)遠(yuǎn)的角度來(lái)看它無(wú)疑是最好的解決苯酚污染的辦法。而且近年來(lái)不少科學(xué)家利用科學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)了可以使苯酚分解成為細(xì)菌的原材料來(lái)生產(chǎn)其他生產(chǎn)資料。所以本課題的要就思路就是篩選自然界中的細(xì)菌通過(guò)逐步增加培養(yǎng)基中的苯酚含量來(lái)馴化得到可以高效分解以及耐受高濃度苯酚的優(yōu)秀菌種。第二章 材料與方法采自學(xué)校操場(chǎng)附近地土壤，學(xué)校門(mén)口糧油店門(mén)口土壤，學(xué)校西山土壤。斜面培養(yǎng)基： 富集培養(yǎng)基：牛肉膏 。 測(cè)試培養(yǎng)基： 篩選培養(yǎng)基：（NH4）SO4 測(cè)試用苯酚培養(yǎng)液：（NH4）SO4 甲基紅（）試驗(yàn)培養(yǎng)基：蛋白胨5 g，葡萄糖5 g， KH2PO4 5 g，蒸餾水 1000ml pH ～ 乙?；谆迹ǎ?shí)驗(yàn)培養(yǎng)基：、過(guò)濾、調(diào)pH ～，再加指示劑，分裝試管。70kPa滅菌20min。過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)培養(yǎng)基：LB肉湯培養(yǎng)基 明膠液化培養(yǎng)基：%，明膠20%，葡萄糖2%，～。115℃高壓蒸汽滅菌30min。 纖維素水解培養(yǎng)基MgS04 %，%，K2HPO4 % ，KNO3 %， 濾紙片(長(zhǎng)5cm，)121℃高壓蒸汽滅菌20min。菌活性測(cè)定用溶液原FeCl3液: ，然后定容到100 mL，貯于棕色瓶中備用(每月制備一次).稀FeCl3液:取lmL原FeCl3液用蒸餾水稀釋100倍(每天制備一次).革蘭氏染色液A)結(jié)晶紫液甲液: 結(jié)晶紫2g，95%乙醇20 mL。乙液: 草酸銨 ，蒸餾水80 mL。將甲、乙兩液相混，靜置48h后過(guò)濾使用，)碘液碘片1g， 碘化鉀2g，蒸餾水30 mL。先用少量(3～5mL)蒸餾水溶解碘化鉀，再投入碘片，待碘全溶解后，加入水稀釋至300ml。放置棕色瓶貯存數(shù)月。C)復(fù)染液(%的乙醇溶液)蕃紅 ， 95%乙醇 100 mL。復(fù)染液保存于棕色瓶中。用復(fù)染液與蒸餾水1:%蕃紅水溶液.調(diào)用pH酸堿液lmol/L 鹽酸:量取36% mL，用水溶解并定容至1000 :lmol/L 鹽酸10 mL，蒸餾水90 mL。lmol/L氫氧化鈉稱(chēng)取氫氧化鈉40g，用蒸餾水溶解并定容至1000 ，蒸餾水90 mL。主要試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。垂直流超凈工作臺(tái) 上海智城分析儀器有限公司雙目型顯微鏡XSP4C 上海長(zhǎng)方光學(xué)儀器有限公司新型恒溫鼓風(fēng)干燥箱 寧波江南儀器廠(chǎng)250D恒溫光照培養(yǎng)箱 常州式華普達(dá)教學(xué)儀器有限公司立式滅菌器 山
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