苯酚降解菌的分離和鑒定(編輯修改稿)
2025-06-12 07:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 氣氧化使污水中的苯酚氧化分解成COH2O等無害物質(zhì)，達到凈化目的。其特點是凈化效率高，流程簡單，占地面積少。生物強化技術 生物強化技術是指在生物處理體系中投加具有特定功能的微生物來改善原有處理體系的處理效果。投加的微生物可以來源于原有的處理體系，經(jīng)過馴化、富集、篩選、培養(yǎng)達到一定數(shù)量后投加，也可以是原來不存在的外源微生物。實際應用中這兩種方法都有采用，主要取決于原有處理體系中的微生物組成及所處的環(huán)境。這一技術可以充分發(fā)揮微生物的潛力，改善難降解有機物生物處理效果。Selvaratnam等通過在活性污泥中投加苯酚降解菌Psendomonas Pvotida ATCC11172，提高了苯酚的去除率，系統(tǒng)在40d內(nèi)一直保持在95％－100％的苯酚去除率，而沒有進行生物強化的對照組中苯酚去除率開始很高，但很快降到40％左右。芬頓試劑技術 芬頓試劑對有機分子的破壞是非常有效的，其實質(zhì)是二價鐵離子和過氧化氫之間的鏈反應催化生成OH自由基，三價鐵離子催化劑（稱芬頓類試劑）也能激發(fā)這個反應，這兩個反應生成的OH自由基能有效地氧化各種有毒的和難處理的有機化合物如苯酚；或者采用紫外燈作為輻射能源放射紫外線進入廢水，當過氧化氫被紫外光激活后，反應產(chǎn)物是一個高反應性的OH自由基，這個OH基團迅速引發(fā)氧化鏈反應，最終有機化合物被分解為CO2和H2O。[9]苯酚降解菌的篩選主要有兩種方式:第一種是將從廢水中和土壤中富集的細菌進行馴化，使其達到可以以苯酚為單一碳源的高效菌種。第二種是將自然界得來的細菌直接接入只有以苯酚為單一碳源的培養(yǎng)液中進行缺陷培養(yǎng)，得到的就是可以以苯酚為單一碳源的菌種。上面提到的主要苯酚處理方式中 催化濕式氧化技術優(yōu)點是經(jīng)濟但是它的催化過程中需要高溫高壓，消耗能源、水資源而且需要設備的支持，前期投入大。芬頓試劑技術中催化中需要Fe2+ 酸性環(huán)境催化效率高。Fe2+可能導致二次Fe2+污染，酸性環(huán)境不僅容易造成設備的耐久度降低而且需要大量的堿來中和它。而生物技術連續(xù)性好，反應條件溫和，無劇烈反應條件，且不消耗能源，從長遠的角度來看它無疑是最好的解決苯酚污染的辦法。而且近年來不少科學家利用科學技術發(fā)現(xiàn)了可以使苯酚分解成為細菌的原材料來生產(chǎn)其他生產(chǎn)資料。所以本課題的要就思路就是篩選自然界中的細菌通過逐步增加培養(yǎng)基中的苯酚含量來馴化得到可以高效分解以及耐受高濃度苯酚的優(yōu)秀菌種。第二章 材料與方法采自學校操場附近地土壤，學校門口糧油店門口土壤，學校西山土壤。斜面培養(yǎng)基： 富集培養(yǎng)基：牛肉膏 。 測試培養(yǎng)基： 篩選培養(yǎng)基：（NH4）SO4 測試用苯酚培養(yǎng)液：（NH4）SO4 甲基紅（）試驗培養(yǎng)基：蛋白胨5 g，葡萄糖5 g， KH2PO4 5 g，蒸餾水 1000ml pH ～ 乙?；谆迹ǎ嶒炁囵B(yǎng)基：、過濾、調(diào)pH ～，再加指示劑，分裝試管。70kPa滅菌20min。過氧化氫酶試驗培養(yǎng)基：LB肉湯培養(yǎng)基 明膠液化培養(yǎng)基：%，明膠20%，葡萄糖2%，～。115℃高壓蒸汽滅菌30min。 纖維素水解培養(yǎng)基MgS04 %，%，K2HPO4 % ，KNO3 %， 濾紙片(長5cm，)121℃高壓蒸汽滅菌20min。菌活性測定用溶液原FeCl3液: ，然后定容到100 mL，貯于棕色瓶中備用(每月制備一次).稀FeCl3液:取lmL原FeCl3液用蒸餾水稀釋100倍(每天制備一次).革蘭氏染色液A)結晶紫液甲液: 結晶紫2g，95%乙醇20 mL。乙液: 草酸銨 ，蒸餾水80 mL。將甲、乙兩液相混，靜置48h后過濾使用，)碘液碘片1g， 碘化鉀2g，蒸餾水30 mL。先用少量(3～5mL)蒸餾水溶解碘化鉀，再投入碘片，待碘全溶解后，加入水稀釋至300ml。放置棕色瓶貯存數(shù)月。C)復染液(%的乙醇溶液)蕃紅 ， 95%乙醇 100 mL。復染液保存于棕色瓶中。用復染液與蒸餾水1:%蕃紅水溶液.調(diào)用pH酸堿液lmol/L 鹽酸:量取36% mL，用水溶解并定容至1000 :lmol/L 鹽酸10 mL，蒸餾水90 mL。lmol/L氫氧化鈉稱取氫氧化鈉40g，用蒸餾水溶解并定容至1000 ，蒸餾水90 mL。主要試劑均為國產(chǎn)分析純。垂直流超凈工作臺 上海智城分析儀器有限公司雙目型顯微鏡XSP4C 上海長方光學儀器有限公司新型恒溫鼓風干燥箱 寧波江南儀器廠250D恒溫光照培養(yǎng)箱 常州式華普達教學儀器有限公司立式滅菌器 山
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