苯酚降解菌的分離和鑒定(參考版)
2025-05-19 07:02本頁面
【正文】 30℃培養(yǎng)條件下作生長溫度測試等生理生化特性指標，最后參照東秀珠,蔡妙英的《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》[6] 等文獻方法，中溫苯酚降解菌H1與假單胞菌相比較，絕大部分特征與模式菌假單胞菌吻合，經(jīng)初步鑒定為假單胞菌，具體確定到種則需要進一步的研究。通過土壤中分離的到的初級菌種然后經(jīng)過馴化優(yōu)選，得到三株菌株然后通過實驗從這三株菌株中選取了一株最優(yōu)的能夠效率分解苯酚的菌株。 H1菌株分類鑒定結(jié)果將H1接種于斜面培養(yǎng)基上30℃培養(yǎng)2d后進行菌落外觀觀察，并進行生化檢測.在斜面培養(yǎng)基上菌落較小,淡乳黃色微白,圓形或橢圓行突起,革蘭氏染色陰性. 通過生理生化檢測 過氧化氫陰性、淀粉水解試驗陽性、明膠液化試驗陰性、纖維素水解試驗陽性；得出此菌初步鑒定為假單胞菌屬。 H1菌株的性狀初步結(jié)果H1是我所培養(yǎng)且馴化較為成功的菌種，它的最適溫度是32℃。所以H1菌株依然具有優(yōu)勢。表3 pH對苯酚降解菌的影響500ml（500mg/L苯酚）測試培養(yǎng)液搖床培養(yǎng)30℃pH值H1降解苯酚濃度(mg/L)H2降解苯酚濃度(mg/L)H3降解苯酚濃度(mg/L)H1降解率%H2降解率%H3降解率%464542352348349364360361372360354545252由表3可以看出pH對于苯酚降解菌的影響，大于或小于都會影響到苯酚的分解速度。當在30℃ %. H1較為良好。第三章 結(jié)果與分析將加入了菌種活性測試液的菌種進行觀察發(fā)現(xiàn)H1周圍的培養(yǎng)基無紅色圈最大，H3其次，H2最小，由此可知H1的原始分解能力最好。:將測試菌接種于明膠水解培養(yǎng)基中，在室溫溫度下培養(yǎng)15～20d，放入4℃冰箱，觀察培養(yǎng)基還能不能凝固，不能凝固者明膠水解為陽性，能凝固者為陰性。 . 和 :分別將試驗菌種裝入葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管中，置于37℃恒溫培養(yǎng)2天，取出培養(yǎng)好的試管，～4滴，觀察是否變色，,%的KOH溶液，猛烈振蕩，2～。菌落周圍如有無色透明圈出現(xiàn)，說明淀粉被水解。：取菌種點種于淀粉水解實驗培養(yǎng)基平板上，適溫培養(yǎng)2～4d，形成菌落后，再平板上滴加盧哥爾氏碘液，以鋪滿菌落周圍為度。用水洗凈番紅，風干，用顯微鏡油鏡觀察涂片。用水沖去碘液，將片上的水甩干。用水沖凈結(jié)晶紫液。，在火焰上通過幾次，固定涂片。[7]將得到的最優(yōu)菌種進行生理生化測試，以及菌種斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)所得的菌種外觀特性。是否需氧測試：將馴化過后的菌種H1,H2,H3分別以靜止做兩組平行測試；搖床培養(yǎng)做兩組平行測試，并記錄其降解苯酚量，并計算出苯酚在不同培養(yǎng)狀態(tài)下的降解率。苯酚含量大于1000mg/L的的可以考慮回收酚，所以我們的最大酚濃度定為900mg/L 溫度測試：將馴化過后的菌種H1,H2,H3分別在不同溫度下進行培養(yǎng)，溫度區(qū)間2436，以兩度為一個梯度增加，其他條件相同，并記錄其降解苯酚量，并計算出苯酚在不同溫度下的降解率。將H1,H2,H3分別接入篩選培養(yǎng)液（苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)液）并以35℃.120r/（4氨基安替吡林試劑），待到苯酚分解完后加入比原溶液苯酚稍多的苯酚，如此增加苯酚濃度連續(xù)馴化2周使菌種能夠完全以苯酚為唯一碳源并快速生長。將HHH3接入篩選培養(yǎng)基，并將選取同一菌種分別接入測試培養(yǎng)基，30℃倒置培養(yǎng)2d后加入菌活性測定溶液，觀察未變色部位大小并記錄。主要試劑均為國產(chǎn)分析純。用復(fù)染液與蒸餾水1:%蕃紅水溶液.調(diào)用pH酸堿液lmol/L 鹽酸:量取36% mL，用水溶解并定容至1000 :lmol/L 鹽酸10 mL，蒸餾水90 mL。C)復(fù)染液(%的乙醇溶液)蕃紅 ， 95%乙醇 100 mL。先用少量(3～5mL)蒸餾水溶解碘化鉀，再投入碘片，待碘全溶解后，加入水稀釋至300ml。乙液: 草酸銨 ，蒸餾水80 mL。 纖維素水解培養(yǎng)基MgS04 %，%，K2HPO4 % ，KNO3 %， 濾紙片(長5cm，)121℃高壓蒸汽滅菌20min。過氧化氫酶試驗培養(yǎng)基：LB肉湯培養(yǎng)基 明膠液化培養(yǎng)基：%，明膠20%，葡萄糖2%，～。 測試培養(yǎng)基： 篩選培養(yǎng)基：（NH4）SO4 測試用苯酚培養(yǎng)液：（NH4）SO4 甲基紅（）試驗培養(yǎng)基：蛋白胨5 g，葡萄糖5 g， KH2PO4 5 g，蒸餾水 1000ml pH ～ 乙?；谆迹ǎ嶒炁囵B(yǎng)基：、過濾、調(diào)pH ～，再加指示劑，分裝試管。第二章 材料與方法
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