【正文】 感謝哈成浩同學、王均明同學、蔣雯雯同學、楊曉燕同學、謝偉同學給我在畢業(yè)環(huán)節(jié)的關心和幫助。首先要感謝導師王利群副教授，感謝您在學習上給予我的無微不至的關心和耐心的教誨，您淵博的學識、嚴謹?shù)闹螌W態(tài)度讓我受益終身，是我在各方面逐漸的成長和成熟起來。參 考 文 獻[1] —原理、合成、測定及應用[M]. 北京：中國石化出版社，2005[2] 王霞，孫向田. 水環(huán)境中非離子表面活性劑生物降解性的研究[J]. 內(nèi)蒙古環(huán)境保護，2005，17（1）：2831[3] Stefan Wagener，Bernhard Schink. Anaerobic degradation of nonionic and anionic surfactants in enrichment cultures and fixedbed reactors[J].Water Research ,1987, 5:615622[4] 戴維著，黃漢生編譯. 世界表面活性劑市場[J]. 日用化學品科學，1991, 9（6）：2023[5] 臧瑞玲，胡曉芳，印春生，等. 農(nóng)田土壤中辛基酚聚氧乙烯醚降解菌的分離[J].環(huán)境科學與技術，2006，29（4）：1113[6] （德）. 非離子表面活性劑[M]. 北京：: 465468[7] Bema .,華章熙. 表面活性劑生物降解性和環(huán)境安全性[J]. 日用化學品科學. 2002, 8(25): 1114[8] Matthew J S, Malcolm N J. The biodegradation of surfactants in the environment [J]. Biochenical Biophysical Acta , 2000, 1508: 235251[9] 李軼，王棟，周集體. 我國表面活性劑LAS廢水處理技術進展[J]. 環(huán)境污染治理技術與設備，2000，1（1）：6571[10] 吳茂英，李堃寶. 表面活性劑污染及其進展[J]. 自然雜志，2002，24（3）：138141[11] 林力，楊惠芳，夏星輝，等. 細菌降解非離子表面活性劑的研究[J] . 環(huán)境科學，1996，17（6）：1721[12] ,. The biodegradation of nonionic surfactants [J]. Blagkie Academic and Professional,1995[13] . Basib principles of LAS biodegradation[J] . Tenside surt. Det ,1988,26(2)[14] . Surfactant biodegradation[M].New York, Marcel Dekker Inc ,1987[15] ,. The biodegradability of surfactants [M]. Biochimica et Biophysica Acta,2000[16] 翟福平，楊義燕，馮東旭，[J].中國環(huán)境科學，1999，19（1）：1821[17] 楊建成，曾清如，楊海君，[J].分析化學，2006，17（2），285290[18] 肖琳，楊柳燕，張敏躍，[M].北京：中國環(huán)境科學出版社2004[19] 劉東，[M].北京：高等教育出版社，2007[20] [M].北京：高等教育出版社，2007[21] 。（2）對A1，A2菌株的降解環(huán)境作深入的研究，確定最有降解效率的條件。 展望（1）將基因工程技術應用于生物法難降解的污染中，即可構建AEO基因工程菌。（2）為了達到本課題目標，即要降解AEO=300~500mg/L的工業(yè)廢水，采用逐漸提高AEO7濃度的方法篩選菌株。4 結論與展望 結論通過實驗和研究，針對含高濃度AEO系列非離子表面活性的工業(yè)廢水，選擇在污水處理廠的正常工作條件下，探討細菌對AEO降解原理和降解效率，得出具體結論如下：（1）采集的土樣在30℃，經(jīng)過多次的富集培養(yǎng)、菌株分離篩選，分離得到A1,A2兩株菌?？偨Y上面生理生化實驗結果如表8所示。（7）產(chǎn)H2S試驗：在培養(yǎng)到第三天，所有醋酸鉛濾紙都不同程度地變黑。（5）甲基紅試驗：經(jīng)過三天的培養(yǎng)，菌液不能使甲基紅變?yōu)榧t色。（3）淀粉水解實驗：經(jīng)過三天的培養(yǎng)，加入碘液，兩株菌菌苔周圍顯示紫色，沒有明顯的透明圈。圖4 A1菌株革蘭氏染色圖5 A2菌株革蘭氏染色 細菌大小的測定在顯微鏡的目鏡里加入鏡臺測微尺，在油鏡下觀并記錄細菌的大?。ū?）表6 A1菌體大小的測定編號長（μm）寬（μm）12345678910均值表7 A2菌體大小的測定編號長（μm）寬（μm）12345678910均值 細菌生理生化試驗 實驗現(xiàn)象（1）氧化酶實驗：AI菌株不能讓1%鹽酸對氨基二甲苯芐胺溶液變色，但是A2菌株可以。Wm=100% （3）式中：Wm是與m對應的編號的菌株的降解效率； Nm是表4中與m對應的溶液AEO7的濃度，mg/L； N9是表4中作對照的溶液AEO7的濃度，mg/L。 （1）式中：i,j是表3中試管的編號； Ai，Aj是表3對應的試管編號的吸光值； T是表3對應試管編號AEO7濃度差。分別對它們重新編號為AA2。表4 經(jīng)108h的培養(yǎng)液的吸光值培養(yǎng)液編號吸光值（經(jīng)過換算）123456789注：菌液經(jīng)過離心分離處理。表3 標準濃度的AEO7的吸光值試管編號AEO7標準液濃度（mg/L）吸光值（經(jīng)過換算處理）123456789100經(jīng)過108小時的培養(yǎng)，對培養(yǎng)液中殘余的AEO7用KII2分光光度法進行檢測。所以本實驗采取中間值480nm做為AEO7的特征吸收波長。3. 結果與討論 菌株對AEO7降解效率 AEO7特征吸收波長的確定配制一定濃度的AEO7溶液，取10mL加入10mL的試管內(nèi)，放置120min后，用全光分光光度計掃描最大吸收波長，其結果如圖3所示。在管身注明菌種名、保存日期以及菌種的作用。與接種后2d、7d、14d觀察，紙條變黑者為陽性，不變色者為陰性。（2）操作步驟將受檢細菌接種于蛋白胨胱氨酸培養(yǎng)基內(nèi)，用無菌鑷子夾取一條醋酸鉛濾紙，借助棉塞懸于培養(yǎng)基液面上，不接觸液面。接種菌在斜面上或沿穿刺生長，培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{色者為陽性，不能利用者培養(yǎng)基仍為綠色。 利用檸檬酸鹽試驗（1）基本原理有些細菌能利用檸檬酸鈉作為碳源，檸檬酸鈉分解后產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基呈堿性，培養(yǎng)基中的溴麝香草酚藍指示劑由綠色變成藍色。② 取1ml培養(yǎng)液，注入一支試管內(nèi)，用力振蕩。試劑加入少量α萘酚可使反應加速，呈色明顯。 乙酰甲基甲醇試驗（VP試驗）（1）基本原理有些細菌能將糖嗲寫過程中產(chǎn)生的丙酮酸脫羧形成乙酰甲基甲醇。② 37℃溫箱培養(yǎng)2~7d。 甲基紅試驗（1）基本原理某些細菌在降解葡萄糖的過程中產(chǎn)生丙酮酸，后者進而分解產(chǎn)生甲酸、乙酸和乳酸等多種有機酸，使pH顯著下降，滴加甲基紅指示劑后培養(yǎng)液由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色。在兩液體界面或界面以上呈現(xiàn)紅色，為陽性反應。② 30~37℃溫箱培養(yǎng)24h。吲哚與Kovac氏試劑中對二甲基氨基苯甲醛作用，形成紅色的玫瑰吲哚。若24h已全部變黃，即使從上往下開始變色，也可能是發(fā)酵，這是應用封油管檢查。③ 在30~37℃溫箱培養(yǎng)12~18h后觀察結果。② 用接種針以無菌操作分別取兩種受檢菌的菌苔少許，在軟瓊脂中作穿刺接種，注意接種不要碰到試管底。利用含含低有機氮的培養(yǎng)基，通過指示劑顏色變化的情況，可鑒別細菌從糖類是氧化性產(chǎn)酸還是發(fā)酵性產(chǎn)酸。 氧化發(fā)酵試驗（1）基本原理細菌能以煙花或發(fā)酵方式利用葡萄糖，糖代謝的結果