【正文】 感謝哈成浩同學(xué)、王均明同學(xué)、蔣雯雯同學(xué)、楊曉燕同學(xué)、謝偉同學(xué)給我在畢業(yè)環(huán)節(jié)的關(guān)心和幫助。首先要感謝導(dǎo)師王利群副教授，感謝您在學(xué)習(xí)上給予我的無(wú)微不至的關(guān)心和耐心的教誨，您淵博的學(xué)識(shí)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度讓我受益終身，是我在各方面逐漸的成長(zhǎng)和成熟起來(lái)。參 考 文 獻(xiàn)[1] —原理、合成、測(cè)定及應(yīng)用[M]. 北京：中國(guó)石化出版社，2005[2] 王霞，孫向田. 水環(huán)境中非離子表面活性劑生物降解性的研究[J]. 內(nèi)蒙古環(huán)境保護(hù)，2005，17（1）：2831[3] Stefan Wagener，Bernhard Schink. Anaerobic degradation of nonionic and anionic surfactants in enrichment cultures and fixedbed reactors[J].Water Research ,1987, 5:615622[4] 戴維著，黃漢生編譯. 世界表面活性劑市場(chǎng)[J]. 日用化學(xué)品科學(xué)，1991, 9（6）：2023[5] 臧瑞玲，胡曉芳，印春生，等. 農(nóng)田土壤中辛基酚聚氧乙烯醚降解菌的分離[J].環(huán)境科學(xué)與技術(shù)，2006，29（4）：1113[6] （德）. 非離子表面活性劑[M]. 北京：: 465468[7] Bema .,華章熙. 表面活性劑生物降解性和環(huán)境安全性[J]. 日用化學(xué)品科學(xué). 2002, 8(25): 1114[8] Matthew J S, Malcolm N J. The biodegradation of surfactants in the environment [J]. Biochenical Biophysical Acta , 2000, 1508: 235251[9] 李軼，王棟，周集體. 我國(guó)表面活性劑LAS廢水處理技術(shù)進(jìn)展[J]. 環(huán)境污染治理技術(shù)與設(shè)備，2000，1（1）：6571[10] 吳茂英，李堃寶. 表面活性劑污染及其進(jìn)展[J]. 自然雜志，2002，24（3）：138141[11] 林力，楊惠芳，夏星輝，等. 細(xì)菌降解非離子表面活性劑的研究[J] . 環(huán)境科學(xué)，1996，17（6）：1721[12] ,. The biodegradation of nonionic surfactants [J]. Blagkie Academic and Professional,1995[13] . Basib principles of LAS biodegradation[J] . Tenside surt. Det ,1988,26(2)[14] . Surfactant biodegradation[M].New York, Marcel Dekker Inc ,1987[15] ,. The biodegradability of surfactants [M]. Biochimica et Biophysica Acta,2000[16] 翟福平，楊義燕，馮東旭，[J].中國(guó)環(huán)境科學(xué)，1999，19（1）：1821[17] 楊建成，曾清如，楊海君，[J].分析化學(xué)，2006，17（2），285290[18] 肖琳，楊柳燕，張敏躍，[M].北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社2004[19] 劉東，[M].北京：高等教育出版社，2007[20] [M].北京：高等教育出版社，2007[21] 。（2）對(duì)A1，A2菌株的降解環(huán)境作深入的研究，確定最有降解效率的條件。 展望（1）將基因工程技術(shù)應(yīng)用于生物法難降解的污染中，即可構(gòu)建AEO基因工程菌。（2）為了達(dá)到本課題目標(biāo)，即要降解AEO=300~500mg/L的工業(yè)廢水，采用逐漸提高AEO7濃度的方法篩選菌株。4 結(jié)論與展望 結(jié)論通過(guò)實(shí)驗(yàn)和研究，針對(duì)含高濃度AEO系列非離子表面活性的工業(yè)廢水，選擇在污水處理廠的正常工作條件下，探討細(xì)菌對(duì)AEO降解原理和降解效率，得出具體結(jié)論如下：（1）采集的土樣在30℃，經(jīng)過(guò)多次的富集培養(yǎng)、菌株分離篩選，分離得到A1,A2兩株菌。總結(jié)上面生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表8所示。（7）產(chǎn)H2S試驗(yàn)：在培養(yǎng)到第三天，所有醋酸鉛濾紙都不同程度地變黑。（5）甲基紅試驗(yàn)：經(jīng)過(guò)三天的培養(yǎng)，菌液不能使甲基紅變?yōu)榧t色。（3）淀粉水解實(shí)驗(yàn)：經(jīng)過(guò)三天的培養(yǎng)，加入碘液，兩株菌菌苔周圍顯示紫色，沒(méi)有明顯的透明圈。圖4 A1菌株革蘭氏染色圖5 A2菌株革蘭氏染色 細(xì)菌大小的測(cè)定在顯微鏡的目鏡里加入鏡臺(tái)測(cè)微尺，在油鏡下觀并記錄細(xì)菌的大?。ū?）表6 A1菌體大小的測(cè)定編號(hào)長(zhǎng)（μm）寬（μm）12345678910均值表7 A2菌體大小的測(cè)定編號(hào)長(zhǎng)（μm）寬（μm）12345678910均值 細(xì)菌生理生化試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象（1）氧化酶實(shí)驗(yàn)：AI菌株不能讓1%鹽酸對(duì)氨基二甲苯芐胺溶液變色，但是A2菌株可以。Wm=100% （3）式中：Wm是與m對(duì)應(yīng)的編號(hào)的菌株的降解效率； Nm是表4中與m對(duì)應(yīng)的溶液AEO7的濃度，mg/L； N9是表4中作對(duì)照的溶液AEO7的濃度，mg/L。 （1）式中：i,j是表3中試管的編號(hào)； Ai，Aj是表3對(duì)應(yīng)的試管編號(hào)的吸光值； T是表3對(duì)應(yīng)試管編號(hào)AEO7濃度差。分別對(duì)它們重新編號(hào)為AA2。表4 經(jīng)108h的培養(yǎng)液的吸光值培養(yǎng)液編號(hào)吸光值（經(jīng)過(guò)換算）123456789注：菌液經(jīng)過(guò)離心分離處理。表3 標(biāo)準(zhǔn)濃度的AEO7的吸光值試管編號(hào)AEO7標(biāo)準(zhǔn)液濃度（mg/L）吸光值（經(jīng)過(guò)換算處理）123456789100經(jīng)過(guò)108小時(shí)的培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)液中殘余的AEO7用KII2分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。所以本實(shí)驗(yàn)采取中間值480nm做為AEO7的特征吸收波長(zhǎng)。3. 結(jié)果與討論 菌株對(duì)AEO7降解效率 AEO7特征吸收波長(zhǎng)的確定配制一定濃度的AEO7溶液，取10mL加入10mL的試管內(nèi)，放置120min后，用全光分光光度計(jì)掃描最大吸收波長(zhǎng)，其結(jié)果如圖3所示。在管身注明菌種名、保存日期以及菌種的作用。與接種后2d、7d、14d觀察，紙條變黑者為陽(yáng)性，不變色者為陰性。（2）操作步驟將受檢細(xì)菌接種于蛋白胨胱氨酸培養(yǎng)基內(nèi)，用無(wú)菌鑷子夾取一條醋酸鉛濾紙，借助棉塞懸于培養(yǎng)基液面上，不接觸液面。接種菌在斜面上或沿穿刺生長(zhǎng)，培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{(lán)色者為陽(yáng)性，不能利用者培養(yǎng)基仍為綠色。 利用檸檬酸鹽試驗(yàn)（1）基本原理有些細(xì)菌能利用檸檬酸鈉作為碳源，檸檬酸鈉分解后產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基呈堿性，培養(yǎng)基中的溴麝香草酚藍(lán)指示劑由綠色變成藍(lán)色。② 取1ml培養(yǎng)液，注入一支試管內(nèi)，用力振蕩。試劑加入少量α萘酚可使反應(yīng)加速，呈色明顯。 乙酰甲基甲醇試驗(yàn)（VP試驗(yàn)）（1）基本原理有些細(xì)菌能將糖嗲寫過(guò)程中產(chǎn)生的丙酮酸脫羧形成乙酰甲基甲醇。② 37℃溫箱培養(yǎng)2~7d。 甲基紅試驗(yàn)（1）基本原理某些細(xì)菌在降解葡萄糖的過(guò)程中產(chǎn)生丙酮酸，后者進(jìn)而分解產(chǎn)生甲酸、乙酸和乳酸等多種有機(jī)酸，使pH顯著下降，滴加甲基紅指示劑后培養(yǎng)液由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色。在兩液體界面或界面以上呈現(xiàn)紅色，為陽(yáng)性反應(yīng)。② 30~37℃溫箱培養(yǎng)24h。吲哚與Kovac氏試劑中對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，形成紅色的玫瑰吲哚。若24h已全部變黃，即使從上往下開(kāi)始變色，也可能是發(fā)酵，這是應(yīng)用封油管檢查。③ 在30~37℃溫箱培養(yǎng)12~18h后觀察結(jié)果。② 用接種針以無(wú)菌操作分別取兩種受檢菌的菌苔少許，在軟瓊脂中作穿刺接種，注意接種不要碰到試管底。利用含含低有機(jī)氮的培養(yǎng)基，通過(guò)指示劑顏色變化的情況，可鑒別細(xì)菌從糖類是氧化性產(chǎn)酸還是發(fā)酵性產(chǎn)酸。 氧化發(fā)酵試驗(yàn)（1）基本原理細(xì)菌能以煙花或發(fā)酵方式利用葡萄糖，糖代謝的結(jié)果