高溫菌的分離純化與分子鑒定畢業(yè)論(參考版)
2025-06-11 12:57本頁面
【正文】 同時(shí)還要感謝宋兆齊老師等實(shí)驗(yàn)室的老師們對我的畢業(yè)論文的完成的鼓勵與指導(dǎo)，真心謝謝您們。 5 參考文獻(xiàn) [1] 賈文祥 , 楊宏偉 . 川藏溫泉嗜熱菌的篩選與鑒定 . 華西醫(yī)大學(xué)報(bào) JWCUMS1995。結(jié)合傳統(tǒng)方法及 16SrRNA 進(jìn)化樹的分析，可準(zhǔn)確的得出，該菌為嗜熱脂肪芽胞桿菌。 [8]因而 ,近年來有關(guān)β 半乳糖苷酶的研究與開發(fā)受到廣泛的重視因而本試驗(yàn)為 進(jìn)一步有關(guān)β 半乳糖苷酶的研究提供了優(yōu)良的菌種資源。β 半乳糖苷酶 ,又稱乳糖酶 ,主要催化水解乳糖生成半乳糖和葡萄糖。 3． 3高溫菌的研究意義 本實(shí)驗(yàn)建立了分離和鑒定嗜熱高溫菌的方法，篩選出嗜熱脂肪芽胞桿菌 ，這為進(jìn)一步開發(fā)利用高溫嗜熱菌的耐熱酶等寶貴資源，奠定了良好的基礎(chǔ)。 從 16S rRNA 的系統(tǒng)進(jìn)化分析可準(zhǔn)確地鑒定出，菌 51為嗜熱脂肪芽胞桿菌屬，是典型的該屬菌種，但為了進(jìn)一步提供充足的證據(jù)，對該菌又進(jìn)行了一定的生理驗(yàn)證試驗(yàn)。 3 討論 細(xì)菌菌株的鑒定 本實(shí)驗(yàn)先用傳統(tǒng)的方法：菌落形態(tài)觀察，革蘭氏染色， 在以乳糖為唯一碳源， xgal作為顯色劑的培養(yǎng)基中進(jìn)行生長驗(yàn)證 等一系列生化實(shí)驗(yàn)，但這并不能準(zhǔn)確得出該菌種屬；然后提取該菌株的全基因組 DNA，再以細(xì)菌 16SrDNA通用引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，采用國際上常用的16SrDNA直接測序法，通過與國際上收錄的序列做同源比對，系統(tǒng)進(jìn)化樹分析，可準(zhǔn)確且快速地得出該 菌與嗜熱脂肪芽胞桿菌具有最高同源性。 分子鑒定結(jié)果 16SrRNA 的擴(kuò)增 擴(kuò)增后的產(chǎn)物經(jīng)電泳后，可檢測到 16SrRNA 在 1500kb有較亮的特異性條帶，如下圖所 示 : 圖 1 菌 3hao 菌落 圖 2 菌 3hao 革蘭氏染色 Figure1 3haobacteria colony Figure 2 3haobacterium gram stain 6 圖 3 16SrRNA 的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物 Fgure 3 16 SrRNA PCR amplification products 3hao: 分離菌株 3hao 的 16SrRNA 的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物 0：空白對照 3hao ： isolates b 16SrRNA PCR amplification products 0: ck 16SrRNA 的測序結(jié)果 經(jīng)測序之后，菌 3hao的 16SrRNA 對應(yīng)的 DNA序列如下，即： 3hao GCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCCGCAAGACCGGGATAACTCCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAA ACCGAAGACCGCATGGTCTTTGGTTGAAAGGCGGCCTTTGGCTGTCACTTGCGGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGT GGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGG CCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGGCGAAAGCCTGACGGAGCGACGCCGCGTGAGCGAA AAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCTCTGTTGTGAGGGACGAAGGAGCGCCGTTCGAAGAGGGCGGCGCGGTGACGGTACCTC CGAGGAAGCCCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGGGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGT AAGCGCGCGCAGGCGGTCCCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGGAC TGAGTGCAGGAGAGGAGAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGG GGCTCTCTGGCCTGCAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCC TAAACGATGA DNA 序列分析 選取 GenBank 中已發(fā)表的相應(yīng)序列與該序列進(jìn)行同源性比對分析，并用分 析軟件 MEGA中的鄰位相連法構(gòu)建包含分離菌株的相應(yīng)進(jìn)化樹，所得進(jìn)化樹如下 7 在 NCBI中對分離的菌株進(jìn)行同源性分析，分離菌 3hao與相關(guān)菌的 16SrDNA 基因間同源性關(guān)系，結(jié)果如下： 表１分離菌與相關(guān)菌的 16SrDNA 基因間同源性關(guān)系 Table ２ 16 SrDNA gene homology relationships among isolates S and two related bacterias 菌株 BLAST 相似性 3hao Geobacillus stearothermophilusKJ722527 99 Geobacillus stearothermophilus 99 由進(jìn)化樹分析可得，所有菌株都屬于同一屬即為嗜熱脂肪芽胞桿菌屬 由表中在 NCBI 分析可得出， 3hao 菌與 Geobacillus stearothermophilusKJ722527 Geobacillus stearothermophilus 同源率最高，相似性高達(dá) 100%，即該實(shí)驗(yàn)分離出的菌株 3hao為嗜熱脂肪芽胞桿菌。 經(jīng)過平板劃線及革蘭氏染色觀察可得到以下結(jié)果： 菌 3hao 菌落類球形，呈乳白色，
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