基因克隆原核表達(dá)ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-08 07:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ? 長度鑒定：酶切、 PCR ? 方向鑒定：聯(lián)合酶切 ? 測序 原核基因表達(dá)系統(tǒng) 一 ． 表達(dá)系統(tǒng)： 基因工程中用來獲得有功能的異源蛋白質(zhì)的體系 ， 包括克隆載體 ， 表達(dá)載體及受體細(xì)胞 。 據(jù)受體細(xì)胞的不同可分為： 1． 原核表達(dá)載體系統(tǒng) ： 將外源基因引入原核細(xì)胞 ， 并使其在原核細(xì)胞中以 發(fā)酵形式 快速高效地表達(dá) 、合成基因產(chǎn)物的體系 。 2． 真核表達(dá)系統(tǒng) ：使外源基因在真核細(xì)胞中表達(dá)的體系。 二 ． 原核生物基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)特點(diǎn) 1. 原核生物染色體 DNA是裸露的環(huán)形 DNA，其轉(zhuǎn)錄和翻譯是偶聯(lián)的連續(xù)進(jìn)行。 2. 原核生物形成 多順反子 mRNA：mRNA在合成過程中和多個核糖體結(jié)合，翻譯形成多條肽鏈。 多順反子 mRNA（ polycistronic mRNA）：即可作為兩個或多個肽鏈翻譯模板的 mRNA 一般不含內(nèi)含子（ intron），沒有轉(zhuǎn)錄及翻譯后加工系統(tǒng) 原核生物中功能相關(guān)的基因串聯(lián)在一起 ， 形成 操縱子 。 操縱子（ operon） ：是一組功能上相關(guān)，受同一調(diào)控區(qū)控制的基因組成的一個遺傳單位 ? 原核生物基因表達(dá)的基本單位 （ 即一個轉(zhuǎn)錄單位 ） 。 ? 共同協(xié)調(diào)作用 ， 完成某一多肽的表達(dá)調(diào)控 。 ? 包括：調(diào)控區(qū) (調(diào)節(jié)基因 ， 啟動基因 ， 操作基因 )、 結(jié)構(gòu)基因： 原核生物中參與轉(zhuǎn)錄的基因結(jié)構(gòu)： ? 啟動子 ? 終止子 啟動子 (promoter, P)是指能被 RNA聚合酶識別、結(jié)合并啟動基因轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。 ? 一般長 4060bp，富含 AT鹼基對 ? 共有保守序列： 10區(qū)（ pribnow box）： TATAAT 35區(qū)： ? RNA聚合酶識別并結(jié)合啟動子 ， 但并不開始轉(zhuǎn)錄 ? 各種啟動子啟動轉(zhuǎn)錄能力不同 。 ? 啟動子強(qiáng)弱取決于 35區(qū)和 10區(qū)的堿基組成及其間隔序列 終止子（ terminator， T） :位于基因 3’端 ,給予 RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號的 DNA序列 ?富含 GC的反向重復(fù)序列
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