生物分析中的探針ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 13:29 本頁面
【文章內容簡介】 金屬離子的氧化還原狀態(tài)、立體化學結構的信息。 熒光光譜探針又可分為有機熒光探針 (即分子熒光探針 )和離子熒光探針。探針離子具有熒光特征 ,與生物大分子結合后 ,其熒光特征 ,如：激發(fā)波長、發(fā)射波長、熒光強度、熒光壽命、熒光量子產率、各向異性等都會發(fā)生變化 ,從而獲得生物大分子的信息。目前用得最多的是稀土離子深針。如 [Ru(Phen)3(鄰菲羅啉 )]2+、[Tb(EDTA)]。 穆茲堡爾譜探針須采用穆茲堡爾譜儀測定。它有三個重要參數(shù)：化學位移、四極超精細分裂和茲曼 (Zeeman)效應。 (1) 化學位移 它反映最鄰近原子的電負性和成鍵的離子特征。這和 NMR、光電子能譜等的化學位移的特征有類似之處。 (2) 四極超精細分裂 它主要反映了原子中電荷的分布 ,判斷極性的大小和方向。 (3) 茲曼 (Zeeman)效應 茲曼 (Zeeman)效應可以分辨出潛在自旋狀態(tài)間的電荷分布差異?？捎媚缕澅栕V儀測定的核不多 ,151Eu是可測核之一。其同位素天然豐度為 %,Eu(Ⅱ )比Eu(Ⅲ )的化學位移大 ,而且對配位環(huán)境較為敏感 ,是一個很好的穆茲堡爾探針。而57Fe可用于血紅蛋白、肌紅蛋白、氧化型菠菜鐵氧化蛋白的研究。但由于 57Fe同位素自然豐度低 ,需要進行富集。 稀土 (絡合物 )離子熒光探針的應用 在水溶液中 ,稀土離子僅有 Tb(Ⅲ )、Eu(Ⅲ )是有熒光的。用 488nm的激發(fā)光源使 Tb(Ⅲ )產生熒光 ,其最大發(fā)射波長為545nm,熒光壽命為 ~5ms；用 575nm的激發(fā)光源使 Eu(Ⅲ )產生熒光 ,其最大發(fā)射波長為 612nm,在水溶液中熒光壽命為~、 非水溶液中為 2~、 在氘代溶劑中為 4~。且與溫度無明顯關系。 用 Eu(Ⅲ )、 Tb(Ⅲ )為探針研究蛋白質中的球蛋白 ,其熒光特征可分為兩類： (1) A類蛋白 A類蛋白的最大發(fā)射波長約為 304nm。它表現(xiàn)了 酪氨酸蛋白質 的熒光特性 ,表明其不含色氨酸殘基 ,但含有苯丙氨酸和酪氨酸殘基 ,這類蛋白包括胰島素、卵類黏蛋白等。 此類蛋白的熒光最大波長不受蛋白質分子空間構象變化的影響。 (2) B類蛋白 含有色氨酸同時含有 苯丙氨酸和酪氨酸殘基 的蛋白 ,稱之為“ B類蛋白” ,如人的血清白蛋白、 α－酪蛋白、卵黃高磷蛋白、 β－淀粉酶、凝血酶、牛腦 S－ 100蛋白等。這類蛋白質表現(xiàn) 色氨酸殘基 的熒光光譜特征。主要特征是 熒光光譜對環(huán)境的極性非常敏感 ,在極性和非極性環(huán)境中 ,光譜差異很大 。這表明 ,其光譜與蛋白質的三維空間結構關系密切。稀土探針離子的引入蛋白值的部位不同 ,其周圍環(huán)境也不同 ,所以會引起蛋白質分子許多 構象形式的變化 ,熒光光譜也就多樣化 。在常溫下 ,雖然結合部位不同 ,但因為晶體場的時間平均效應 ,探針熒光壽命只有一個值。在液氮低溫下 ,生物大分子結構因凍結使不同部位的探針離子各處于不同的晶體場中 ,此時構象的弛豫時間大于探針壽命 ,因此 ,各部位壽命的差異就會顯現(xiàn) ,壽命不是一個固定值 ,而呈概率分布。其至會產生熒光猝滅現(xiàn)象。這些現(xiàn)象必和生物大分子的構
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1