基因定位與克隆ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-25 22:40 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 細(xì)胞融合 —— 仙臺(tái)病毒 ? 化學(xué)融合技術(shù) —— 聚乙二醇 (PEG) ? 電融合技術(shù) —— 電穿孔法 體細(xì)胞雜交 體細(xì)胞雜交 異核細(xì)胞 體細(xì)胞雜交 體細(xì)胞雜交 合核細(xì)胞 雜種細(xì)胞兩個(gè)同種的動(dòng)物細(xì)胞融合后形成的雜種細(xì)胞 ， 細(xì)胞核一般保留雙親的染色體；不同種動(dòng)物的細(xì)胞融合后 ， 細(xì)胞核含有雙親的的染色體 ， 但隨著增殖傳代的過(guò)程 ，會(huì)出現(xiàn)保留一方染色體 ， 另一方染色體逐漸丟失的現(xiàn)象 。 體細(xì)胞雜交 HAT選擇系統(tǒng) ? 1962，人類(lèi) HPRT ? 1964，小鼠 TK ? H：次黃嘌呤 (hypoxanthine) ? A：氨基喋呤 (Aminopterin) ? T：胸腺嘧啶 (Thymidine) HPRT－ TK－ HAT選擇系統(tǒng) TK－ HPRT－ HAT選擇系統(tǒng) HAT選擇系統(tǒng) 體細(xì)胞雜交 TK: chromosome 17 雜種細(xì)胞克隆嵌板 Hybrid clone Human chromosome 1 2 3 4 5 6 7 8 A + + + + B + + + + C + + + + ? 微細(xì)胞融合 (microcell fusion) 體細(xì)胞雜交 人工建立的僅含有一條人類(lèi)染色體的雜種細(xì)胞 ， 即 微細(xì)胞 ， 再與嚙齒類(lèi)細(xì)胞進(jìn)行融合 。 ? 區(qū)域定位 (regional assignment) 體細(xì)胞雜交 依據(jù)染色體結(jié)構(gòu)畸變的特點(diǎn) ， 建立只含有特殊的部分人類(lèi)染色體的雜種細(xì)胞 ， 再與嚙齒類(lèi)細(xì)胞進(jìn)行融合 。 ? 輻射雜種 (radiation hybrid) 體細(xì)胞雜交 用含有輻射切割的人類(lèi)染色體片段的細(xì)胞與嚙齒類(lèi)細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜種克隆細(xì)胞 。 ? 1975年 ， Goss和 Harris提出 ? 1990年 ， Cox構(gòu)建單染色體雜種細(xì)胞 ? 1994年 ， Walter建立全基因組放射雜種 原位雜交 (In Site Hybridization， ISH)：利用同位素標(biāo)記的 DNA探針 ， 與玻片上的中期染色體進(jìn)行雜交 。 是一種直接進(jìn)行基因定位的方法 。 原位雜交
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