生物技術實踐生物選修一資料知識復習圖解(編輯修改稿)
2025-05-14 07:20 本頁面
【文章內容簡介】 作時注意：（1）配制系列梯度稀釋液時，所用的試管和移液管均需滅菌，必須用無菌水配制；（2）涂布器用70%的酒精消毒，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰引燃。不要將過熱的涂布器放入盛有酒精的燒杯中，一面引燃其中的酒精；（3）配制系列梯度稀釋液和轉移菌液以及涂布過程等必須都在酒精燈火焰旁進行，移液管頭不能接觸任何物體。3．菌種的保存 ①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。 ②對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。注意：①菌種保藏的原理是：低溫、干燥和隔絕空氣，使微生物代謝能力和繁殖能力降低。②不同菌種的保藏方法因不同菌種而異。需氧型，必須低溫有氧，而厭氧型必須低溫無氧；腐生微生物可提供牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，而寄生微生物需提供活體組織等非人工培養(yǎng)基，如病毒需提供活雞胚。（三）微生物的篩選與計數（以“土壤中分解尿素的細菌”為例）篩選菌株原則：人為提供有利于目的菌生長的條件，同時抑制或阻止其他微生物的生長培養(yǎng)基的成分：尿素作為惟一的氮源(選擇培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基)菌落計數菌種的鑒定對照：將不接種的培養(yǎng)基置于相同溫度恒溫箱培養(yǎng)(目的:證實培養(yǎng)基是否被雜菌污染)統(tǒng)計茵落數目的方法：(1)顯微鏡直接計數法①原理：利用特定細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容積樣品中微生物數量②方法：用計數板計數。③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計數法(活菌計數法)①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②計算公式：每克樣品中的菌株數＝(C247。V)M，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數。③操作：設置重復組，增強實驗的說服力與準確性。同時為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30～300的平板進行計數。方法：檢測培養(yǎng)基pH的變化判斷原理：在細菌分解尿素時，分泌的脲酶將尿素分解為氨，氨使培養(yǎng)基堿性增高，pH升高 菊花的組織培養(yǎng) 制備MS培養(yǎng)基外植體消毒接種成分：無機物(大量元素、微量元素)、有機物：糖類(最常使用的糖是蔗糖，提供能源和維持滲透壓)、維生素、氨基酸、有機添加劑（生長因子）、激素pH：滅菌：高壓蒸汽滅菌注意：①為降低工作量、減少誤差，可通過配制母液，達到一次稱量藥品、多次使用。②配制培養(yǎng)基時，母液的應用應先搖勻，移液用的移液管或量筒需清洗兩次，以免造成誤差。培養(yǎng)試管苗愈傷組織胚狀體(或不定芽)脫分化再分化移栽(煉苗)栽培材料：植物的種類、年齡、保存時間消毒原因：大部分來自田間，帶有大量病毒、細菌菊花莖段消毒：所用消毒劑為體積分數為70％％的氯化汞溶液，所使用的清洗液是無菌水。注意：不同植株或同一植株的不同部位，所選用的消毒劑種類及濃度可能不同；方法：始終在酒精燈火焰旁進灼燒滅菌。注意：將菊花莖段插入培養(yǎng)基時不要倒插溫度：18～22℃光照：在初期菊花的組織培養(yǎng)需光照，月季的花藥培養(yǎng)不需光照(有利愈傷組織形成)，二者后期均需要光照(有利葉綠素形成和光合作用)注意：生長素和細胞分裂素的使用 使用順序不同→結果不同(先生長素，后細胞分裂素：有利于細胞分裂，但不分化先細胞分裂素，后生長素：細胞既分裂也分化同時使用： 分化頻率提高) 用量比例不同→發(fā)育方向不同(高：利用根的分化，抑制芽的形成低：利用芽的分化，抑制根的形成適中：促進愈傷組織的生長)注意：培養(yǎng)一株完整的試管苗，必須先進行生芽培養(yǎng)，然后進行生根培養(yǎng)，如果順序顛倒，先誘導生根，就不好誘導生芽了。原因：因試管苗光合作用能力低，對不良環(huán)境耐受力差，一定要在保溫、保濕一段時間以增強適應力方法：流水清洗根部，移栽至消過毒的蛭石或珍珠巖環(huán)境培養(yǎng)脫分化階段只分裂；再分化階段既有分裂也有分化人工種子制備階段原理：細胞的全能性(高度分化的植物細胞，仍具有發(fā)育為完整個體的潛能) (1)原因：體細胞攜帶有本物種全部的遺傳信息 (2)實現(xiàn)的條件：離體狀態(tài)和適宜條件(水分、無機鹽、有機營養(yǎng)及激素、溫度、pH等)(3)細胞的全能性大小與細胞種類的關系：①受精卵＞生殖細胞＞體細胞；植物細胞＞動物細胞；分化程度低的細胞＞分化程度高的細胞②一般的，離體的植物細胞的全能性在一定條件下可充分地體現(xiàn)出來。③離體的動物細胞的全能性受到限制，但其細胞核的全能性借助卵細胞的細胞質可體現(xiàn)出來。④未離體的細胞的全能性不能表達，只是在機體的調控下進行定向分化。
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