生物技術實踐專題二(編輯修改稿)
2025-02-12 18:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 定要考慮所設置的重復組的結果是否一致，結果不一致，意味著操作有誤，需要重新實驗。 （三）設置對照 A同學的結果與其他同學不同，可能的解釋有兩種。一是由于土樣不同，二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個原因，可以通過實驗來證明。實驗方案有兩種。一種方案是可以由其他同學用與 A同學一樣的土樣進行實驗，如果結果與 A同學一致，則證明 A無誤；如果結果不同，則證明 A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。另一種方案是將 A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是必不可少的。 土壤中某樣品細菌的分離與計數(shù) 實驗的具體操作步驟如下。 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土 3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。 2 .制備培養(yǎng)基 準備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為 103～ 107。每個稀釋度下需要 3個選擇培養(yǎng)基， 1個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此共需要 15個選擇培養(yǎng)基， 5個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。此外，還需要準備 8個滅菌的試管和 1個滅菌的移液管。 參考課本中圖 27的實驗流程示意圖，將 10 g土樣加入盛有 90 mL無菌生理鹽水的錐形瓶中（錐形瓶體積為 250 mL），充分搖勻，吸取上清液 1 mL，轉移至盛有 9 mL的生理鹽水的無菌大試管中，依次等比稀釋至 107稀釋度，并按照由 107～ 103稀釋度的順序分別吸取 mL進行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。將涂布好的培養(yǎng)皿放在 30 ℃ 溫度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時間的延長，會有不同的菌落產(chǎn)生。比較牛肉膏培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄。挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生如課本中圖 210的顏色反應。 當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在 30～ 300的平板進行計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對 3個平板進行重復計數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。 課題成果評價 （一）培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落 對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。 （二）樣品的稀釋操作是否成功 如果得到了 2個或 2個以上菌落數(shù)目在 30～ 300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)。 （三）重復組的結果是否一致 如果學生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結果應該接近。如果結果相差太遠，教師需要引導學生一起分析產(chǎn)生差異的原因。 答案和提示 ，如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？ 答：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進行計算。 ？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？ 答：這是因為土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株 /kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為 2 185萬，放線菌數(shù)約為 477萬，霉菌數(shù)約為 。因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按
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