【文章內(nèi)容簡介】 化，將活潑的氫離子取代，使其喪失了強極性，因此酸化硅膠層不會與 TBBPA 發(fā)生牢固的結(jié)合，而未酸化的硅膠層會強烈地吸附 TBBPA，因此對傳統(tǒng)的酸化硅膠柱 (共五層：從下往上依次為無水硫酸鈉層、硅膠層、酸化硅膠層、硅膠層和無水硫酸鈉)進行了大膽改進，將酸化硅膠柱中的硅膠層去除，新型的酸化硅膠柱從下往上依次為：2cm 無水硫酸鈉、15g 44%酸化硅膠( 過量 )、2cm 無水硫酸鈉。試驗結(jié)果證明，采用這個凈化方法，HBCD和 TBBPA 均取得了較為理想的絕對回收率 (50%80%)；而且此方法簡單快捷，油脂可以完全去除，能滿足后續(xù)液質(zhì)分析的需要，故采用自制酸化硅膠固相萃取柱進行凈化處理。 目標物流出體積的確定手動填充的酸化硅膠柱滿柱體積為 150 mL，因此設(shè)定 150 mL 可將目標物100%洗脫下來。在將加標的空白基質(zhì)上柱之后，每次加入 10 mL 洗脫液，分動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測定編制說明1015 次加入，編號為 115，進樣后測定 115 號濃縮液中目標物的含量。發(fā)現(xiàn) 2號4 號濃縮液有目標物的流出，5 號8 號有極少量的目標物流出，所以，流出體積確定為 80 mL，但是為了確保目標物完全流出，所以本試驗將目標物流出體積定為 100 mL。 流動相的選擇根據(jù)相關(guān)資料，選擇了 Waters BEH C18 柱（ mm . 50 mm， μm）色譜柱。由于電噴霧質(zhì)譜的電離是在溶液狀態(tài)電離，因此流動相的組成和添加劑除了影響目標化合物的保留時間和峰形外，還明顯影響到目標化合物的離子化效率。從而影響目標化合物的檢測靈敏度。實驗在滿足較好的色譜分離的同時，比較了甲醇/乙腈(V/V: 1/1)水、乙腈水這 2 種流動相對目標化合物離子化程度的影響。結(jié)果表明，當流動相為甲醇/乙腈水時，響應(yīng)值明顯高于乙腈 水流動相時的響應(yīng)值(約為 2～4 倍)。因此，實驗選用甲醇/ 乙腈(V/V: 1/1)水為流動相進行 8020 等洗脫。除了考察了流動相組成外，還比較了流動相為甲醇/乙腈(V/V: 1/1)水和分別在此流動相中加入一定量的醋酸銨和氨水等添加劑對目標化合物離子化效率的影響。當加入一定量的醋酸銨或氨水后，目標化合物的響應(yīng)值均有所降低，因此，實驗中采用甲醇/乙腈(V/V: 1/1)水混合液作為流動相。 質(zhì)譜條件的優(yōu)化分析 TBBPA，需要用到多反應(yīng)監(jiān)測（ MRM）模式。首先，利用流動注射泵連續(xù)進樣。在正離子和負離子模式下進行全掃描以選擇適當?shù)姆肿与x子峰和電離方式。結(jié)果表明：在負離子模式下，全掃描的分子離子[M H ] m/z 最理想。因此選用 TBBPA 的[M H] 作碰撞誘導解離的母離子。二級質(zhì)譜圖中，觀察到 m/z 、 等碎片離子峰。其中 m/z 碎片離子是[M BrOH ]，m/z 離子是[MBrOHCO ] 。分析 HBCDS 時，同樣利用流動注射泵連續(xù)進樣。在正離子和負離子模式下進行全掃描以選擇適當?shù)姆肿与x子峰和電離方式。結(jié)果表明：在負離子模式下，同樣是全掃描的分子離子[M H ] m/z 最理想，但是對于二級質(zhì)譜，該化合物只能檢測 Br，所以用選擇離子（SIM）模式即可。但是本著高效的原則，希望和四溴雙酚 A 同時檢測，所以選擇了 m/z 和 m/z 作為其子離動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測定編制說明11子，與四溴雙酚 A 一起使用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式。在確定了母離子和子離子的基礎(chǔ)上，對毛細管電壓、錐孔電壓、離子源溫度、脫溶劑溫度等條件進行了優(yōu)化。 線性范圍以 、 ng/mLHBCDs 與 TBBPA 混合標準溶液進樣，根據(jù)待測物和內(nèi)標的峰面積比（y）和對應(yīng)的標準溶液中待測物的質(zhì)量（x）進行線性回歸，得出線性方程為：TBBPA：y = +；相關(guān)系數(shù)：R 2= ；αHBCD ：y = ；相關(guān)系數(shù)：R 2= ；βHBCD：y = ；相關(guān)系數(shù)：R 2= ；γHBCD：y = +；相關(guān)系數(shù)： R2= 。 標準曲線的相對響應(yīng)因子計算線性曲線圖中每個點上的相對響應(yīng)因子 RRF 得出平均相對響應(yīng)因子(見表 1)，計算公式如下： CnAsRF?? 公式中：Cs定量內(nèi)標的質(zhì)量；Cn目標化合物的質(zhì)量；An目標化合物的峰面積；As定量內(nèi)標的峰面積。表 1 HBCDs 與 TBBPA 混合標準系列溶液相對響應(yīng)因子f1 f2 f3 f4 f5 f 平均 RSD%TBBPA αHBCD β HBCD γ HBCD 檢出限與定量限檢測限根據(jù)對基質(zhì)空白的測定確定噪聲，以3倍噪聲峰高對應(yīng)的濃度為檢測限(LOD)。計算公式如下：動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測定編制說明12SRFnHMsNLOD??3 式中：N 噪音峰高，本試驗 N 值為 1；M S 加入定量內(nèi)標的量； H定量內(nèi)標的峰高；S脂肪重量。而以10倍噪聲峰高對應(yīng)的濃度為定量限(LOQ) 。計算公式如下：SRFnsLOQ??10 取5g凍干好的肉制樣品(經(jīng)檢測確定不含TBBPA 和HBCD的魚肉樣品)作為不含目標物的基質(zhì)樣，加入20 ng內(nèi)標(同位素內(nèi)標混合標準應(yīng)用溶液B 200μL)，上機測定(三組平行，取平均值)。結(jié)果如表2所示。確定HBCD三種異構(gòu)體αHBCD、 βHBCD和γHBCD的檢測限、 ng/g，、 ng/g，、 ng/g(以脂肪計) ； TBBPA的檢測限和定量限分別為 、 ng/g (以脂肪計)。表 2 檢測限和定量限測定結(jié)果(ng/g，以脂肪計)αHBCD βHBCD γHBCD TBBPA檢出限 定量限 檢出限 定量限 檢出限 定量限 檢出限 定量限平行 1 平行 2 平行 3 均值 回收率與精密度采用市售的金龍魚植物油為空白基質(zhì)，在樣品中添加低、中、高三個不同質(zhì)量濃度的標準溶液進行 HPLCMS 分析，每個添加水平平行測定 6 次?；厥章时硎痉椒ǖ目尚行?，以相對標準差(RSD)表示方法的重現(xiàn)率即精密度，結(jié)果見表 3。結(jié)果顯示三種 HBCD 與 TBBPA 的平均回收率在 %%之間，RSD 范圍為 %%之間。表明該方法可行，且精密度良好。表 3 HBCDs 和 TBBPA 的回收率和精密度平均回收率(%) RSD%(n=6)加標水平 αHBCD βHBCD γHBCD TBBPA αHBCD βHBCD γHBCD TBBPA2ng 5ng 動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測定編制說明1320ng 方法的可行性為了驗證方法在實際樣品中的可行性，采用建立的方法，在魚類、肉類、蛋類、乳類這四種實際的空白樣品(樣品經(jīng)測定不含目標物)中添加質(zhì)量濃度為20 ng 的標準溶液進行 HPLCMS 分析，每個添加水平平行測定 6 次。以回收率表示方法的可行性，以相對標準差(RSD)表示方法的重現(xiàn)性即精密度，結(jié)果見表 4。結(jié)果顯示三種 HBCD 與 TBBPA 的平均回收率在 %%之間，RSD 范圍為 %%之間，表明該方法可行，且精密度良好。表 4 實際樣品中加標回收結(jié)果平均回收率(%) RSD%(n=6)實際樣品 αHBCD βHBCD γHBCD TBBPAαHBCD βHBCD γHBCD TBBPA魚類 肉類 蛋類 奶類 國際考核樣品驗證試驗采用所建立的方法，測定了從挪威采購的鱒魚肉(trout)樣品，并用此方法測得的樣品值與2022年挪威公共衛(wèi)生學院組織的食品中PCBs, PBDEs and HBCD試驗室間比對試驗得出的均值進行了比對。樣品中α ，β ，γHBCD、TBBPA及相應(yīng)的同位素內(nèi)標的色譜圖如圖3所示。檢測結(jié)果均以濕重計，結(jié)果如表5所示。采用本方法分析的結(jié)果與國際不同試驗室的均值相接近，說明本方法測定結(jié)果準確，該分析方法可行。但實測值均低于國際均值，其原因可能是：同時分析兩種物質(zhì)時，前處理方法的目標物損失率較單獨分析HBCDs稍高。動物性食品