【文章內(nèi)容簡介】 化，將活潑的氫離子取代，使其喪失了強(qiáng)極性，因此酸化硅膠層不會與 TBBPA 發(fā)生牢固的結(jié)合，而未酸化的硅膠層會強(qiáng)烈地吸附 TBBPA，因此對傳統(tǒng)的酸化硅膠柱 (共五層：從下往上依次為無水硫酸鈉層、硅膠層、酸化硅膠層、硅膠層和無水硫酸鈉)進(jìn)行了大膽改進(jìn)，將酸化硅膠柱中的硅膠層去除，新型的酸化硅膠柱從下往上依次為：2cm 無水硫酸鈉、15g 44%酸化硅膠( 過量 )、2cm 無水硫酸鈉。試驗(yàn)結(jié)果證明，采用這個凈化方法，HBCD和 TBBPA 均取得了較為理想的絕對回收率 (50%80%)；而且此方法簡單快捷，油脂可以完全去除，能滿足后續(xù)液質(zhì)分析的需要，故采用自制酸化硅膠固相萃取柱進(jìn)行凈化處理。 目標(biāo)物流出體積的確定手動填充的酸化硅膠柱滿柱體積為 150 mL，因此設(shè)定 150 mL 可將目標(biāo)物100%洗脫下來。在將加標(biāo)的空白基質(zhì)上柱之后，每次加入 10 mL 洗脫液，分動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測定編制說明1015 次加入，編號為 115，進(jìn)樣后測定 115 號濃縮液中目標(biāo)物的含量。發(fā)現(xiàn) 2號4 號濃縮液有目標(biāo)物的流出，5 號8 號有極少量的目標(biāo)物流出，所以，流出體積確定為 80 mL，但是為了確保目標(biāo)物完全流出，所以本試驗(yàn)將目標(biāo)物流出體積定為 100 mL。 流動相的選擇根據(jù)相關(guān)資料，選擇了 Waters BEH C18 柱（ mm . 50 mm， μm）色譜柱。由于電噴霧質(zhì)譜的電離是在溶液狀態(tài)電離，因此流動相的組成和添加劑除了影響目標(biāo)化合物的保留時(shí)間和峰形外，還明顯影響到目標(biāo)化合物的離子化效率。從而影響目標(biāo)化合物的檢測靈敏度。實(shí)驗(yàn)在滿足較好的色譜分離的同時(shí)，比較了甲醇/乙腈(V/V: 1/1)水、乙腈水這 2 種流動相對目標(biāo)化合物離子化程度的影響。結(jié)果表明，當(dāng)流動相為甲醇/乙腈水時(shí)，響應(yīng)值明顯高于乙腈 水流動相時(shí)的響應(yīng)值(約為 2～4 倍)。因此，實(shí)驗(yàn)選用甲醇/ 乙腈(V/V: 1/1)水為流動相進(jìn)行 8020 等洗脫。除了考察了流動相組成外，還比較了流動相為甲醇/乙腈(V/V: 1/1)水和分別在此流動相中加入一定量的醋酸銨和氨水等添加劑對目標(biāo)化合物離子化效率的影響。當(dāng)加入一定量的醋酸銨或氨水后，目標(biāo)化合物的響應(yīng)值均有所降低，因此，實(shí)驗(yàn)中采用甲醇/乙腈(V/V: 1/1)水混合液作為流動相。 質(zhì)譜條件的優(yōu)化分析 TBBPA，需要用到多反應(yīng)監(jiān)測（ MRM）模式。首先，利用流動注射泵連續(xù)進(jìn)樣。在正離子和負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描以選擇適當(dāng)?shù)姆肿与x子峰和電離方式。結(jié)果表明：在負(fù)離子模式下，全掃描的分子離子[M H ] m/z 最理想。因此選用 TBBPA 的[M H] 作碰撞誘導(dǎo)解離的母離子。二級質(zhì)譜圖中，觀察到 m/z 、 等碎片離子峰。其中 m/z 碎片離子是[M BrOH ]，m/z 離子是[MBrOHCO ] 。分析 HBCDS 時(shí)，同樣利用流動注射泵連續(xù)進(jìn)樣。在正離子和負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描以選擇適當(dāng)?shù)姆肿与x子峰和電離方式。結(jié)果表明：在負(fù)離子模式下，同樣是全掃描的分子離子[M H ] m/z 最理想，但是對于二級質(zhì)譜，該化合物只能檢測 Br，所以用選擇離子（SIM）模式即可。但是本著高效的原則，希望和四溴雙酚 A 同時(shí)檢測，所以選擇了 m/z 和 m/z 作為其子離動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測定編制說明11子，與四溴雙酚 A 一起使用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式。在確定了母離子和子離子的基礎(chǔ)上，對毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、離子源溫度、脫溶劑溫度等條件進(jìn)行了優(yōu)化。 線性范圍以 、 ng/mLHBCDs 與 TBBPA 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，根據(jù)待測物和內(nèi)標(biāo)的峰面積比（y）和對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的質(zhì)量（x）進(jìn)行線性回歸，得出線性方程為：TBBPA：y = +；相關(guān)系數(shù)：R 2= ；αHBCD ：y = ；相關(guān)系數(shù)：R 2= ；βHBCD：y = ；相關(guān)系數(shù)：R 2= ；γHBCD：y = +；相關(guān)系數(shù)： R2= 。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相對響應(yīng)因子計(jì)算線性曲線圖中每個點(diǎn)上的相對響應(yīng)因子 RRF 得出平均相對響應(yīng)因子(見表 1)，計(jì)算公式如下： CnAsRF?? 公式中：Cs定量內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量；Cn目標(biāo)化合物的質(zhì)量；An目標(biāo)化合物的峰面積；As定量內(nèi)標(biāo)的峰面積。表 1 HBCDs 與 TBBPA 混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液相對響應(yīng)因子f1 f2 f3 f4 f5 f 平均 RSD%TBBPA αHBCD β HBCD γ HBCD 檢出限與定量限檢測限根據(jù)對基質(zhì)空白的測定確定噪聲，以3倍噪聲峰高對應(yīng)的濃度為檢測限(LOD)。計(jì)算公式如下：動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測定編制說明12SRFnHMsNLOD??3 式中：N 噪音峰高，本試驗(yàn) N 值為 1；M S 加入定量內(nèi)標(biāo)的量； H定量內(nèi)標(biāo)的峰高；S脂肪重量。而以10倍噪聲峰高對應(yīng)的濃度為定量限(LOQ) 。計(jì)算公式如下：SRFnsLOQ??10 取5g凍干好的肉制樣品(經(jīng)檢測確定不含TBBPA 和HBCD的魚肉樣品)作為不含目標(biāo)物的基質(zhì)樣，加入20 ng內(nèi)標(biāo)(同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液B 200μL)，上機(jī)測定(三組平行，取平均值)。結(jié)果如表2所示。確定HBCD三種異構(gòu)體αHBCD、 βHBCD和γHBCD的檢測限、 ng/g，、 ng/g，、 ng/g(以脂肪計(jì)) ； TBBPA的檢測限和定量限分別為 、 ng/g (以脂肪計(jì))。表 2 檢測限和定量限測定結(jié)果(ng/g，以脂肪計(jì))αHBCD βHBCD γHBCD TBBPA檢出限 定量限 檢出限 定量限 檢出限 定量限 檢出限 定量限平行 1 平行 2 平行 3 均值 回收率與精密度采用市售的金龍魚植物油為空白基質(zhì)，在樣品中添加低、中、高三個不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行 HPLCMS 分析，每個添加水平平行測定 6 次。回收率表示方法的可行性，以相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)表示方法的重現(xiàn)率即精密度，結(jié)果見表 3。結(jié)果顯示三種 HBCD 與 TBBPA 的平均回收率在 %%之間，RSD 范圍為 %%之間。表明該方法可行，且精密度良好。表 3 HBCDs 和 TBBPA 的回收率和精密度平均回收率(%) RSD%(n=6)加標(biāo)水平 αHBCD βHBCD γHBCD TBBPA αHBCD βHBCD γHBCD TBBPA2ng 5ng 動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測定編制說明1320ng 方法的可行性為了驗(yàn)證方法在實(shí)際樣品中的可行性，采用建立的方法，在魚類、肉類、蛋類、乳類這四種實(shí)際的空白樣品(樣品經(jīng)測定不含目標(biāo)物)中添加質(zhì)量濃度為20 ng 的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行 HPLCMS 分析，每個添加水平平行測定 6 次。以回收率表示方法的可行性，以相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)表示方法的重現(xiàn)性即精密度，結(jié)果見表 4。結(jié)果顯示三種 HBCD 與 TBBPA 的平均回收率在 %%之間，RSD 范圍為 %%之間，表明該方法可行，且精密度良好。表 4 實(shí)際樣品中加標(biāo)回收結(jié)果平均回收率(%) RSD%(n=6)實(shí)際樣品 αHBCD βHBCD γHBCD TBBPAαHBCD βHBCD γHBCD TBBPA魚類 肉類 蛋類 奶類 國際考核樣品驗(yàn)證試驗(yàn)采用所建立的方法，測定了從挪威采購的鱒魚肉(trout)樣品，并用此方法測得的樣品值與2022年挪威公共衛(wèi)生學(xué)院組織的食品中PCBs, PBDEs and HBCD試驗(yàn)室間比對試驗(yàn)得出的均值進(jìn)行了比對。樣品中α ，β ，γHBCD、TBBPA及相應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)的色譜圖如圖3所示。檢測結(jié)果均以濕重計(jì)，結(jié)果如表5所示。采用本方法分析的結(jié)果與國際不同試驗(yàn)室的均值相接近，說明本方法測定結(jié)果準(zhǔn)確，該分析方法可行。但實(shí)測值均低于國際均值，其原因可能是：同時(shí)分析兩種物質(zhì)時(shí)，前處理方法的目標(biāo)物損失率較單獨(dú)分析HBCDs稍高。動物性食品