食品微生物檢驗技術(shù)筆記(編輯修改稿)
2025-05-04 04:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 U 時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。菌落數(shù)大于或等于100 CFU 時，第3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2 位數(shù)字，后面用0 代替位數(shù)；也可用10 的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。稱重取樣以CFU/g 為單位報告，體積取樣以CFU/mL 為單位報告。注意事項如果稀釋度大的平板上菌落數(shù)反比稀釋度小的平板上菌落數(shù)高，則系檢驗工作中發(fā)生的差錯，屬實驗室事故。此外，也可能因抑菌劑混入樣品中所致，均不可用作檢樣計數(shù)報告的依據(jù)。必須做空白對照：監(jiān)測培養(yǎng)基、平皿、稀釋液的無菌程度。同時，應(yīng)在工作臺內(nèi)打開一塊空白PCA（其暴露時間應(yīng)與檢樣時間相當(dāng)），以了解樣品在檢驗過程中有無受到來自環(huán)境的污染。水浴和傾注溫度：46℃177。1℃培養(yǎng)條件：一般樣品36℃177。1℃/48h177。2h，水產(chǎn)品（指原生態(tài)、未加工水30℃177。1℃/72h177。3h如樣品（干調(diào)、面粉、脫水蔬菜）中可能含有在瓊脂表面蔓延生長的菌落，可在凝固后的瓊脂表面再覆蓋一層（4mL）培養(yǎng)基。樣品稀釋液有時會帶有細碎的食物顆粒（如奶粉、堅果），為避免這些顆粒與菌落發(fā)生混淆，可將樣品稀釋液與PCA混合，單做培養(yǎng)，置于4℃放置同樣時間，以便在計數(shù)時作為對照。菌落總數(shù)測定的幾點說明：由于檢樣中采用30/35℃有氧條件下培養(yǎng)，因而并不是樣品中實際的總活菌數(shù)，一些特殊營養(yǎng)要求的細菌、厭氧菌、微需氧菌、以及非嗜中溫細菌，均難以反映出來。鑒于食品檢樣中的細菌細胞是以單個、成雙、鏈狀、葡萄狀或成堆的形式存在，因而在平板上出現(xiàn)的菌落可以來源于細胞塊，也可以來源于單個細胞，因而平板上所得菌落的數(shù)字不應(yīng)報告菌數(shù)，而應(yīng)以單位重量、容積或表面積內(nèi)的菌落數(shù)或菌落形成單位（colony forming units，CFU）報告。問題：什么是菌落總數(shù)？ 測定食品、飲料等產(chǎn)品的菌落總數(shù)有 什么意義？ 畫出平板傾注法測定菌落總數(shù)的示意圖。 在測定菌落總數(shù)時，如何選擇菌落進行計數(shù)？ 在菌落總數(shù)的檢驗中，要注意哪些事項？ 在菌落總數(shù)的檢驗中，如何根據(jù)樣品的特性選擇培養(yǎng)溫度和時間？ 大腸菌群的定義：一群在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。意義@該菌主要來源于人畜糞便，作為糞便污染指標(biāo)評價食品的衛(wèi)生狀況，推斷食品中腸道致病菌污染的可能。@這些細菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。根據(jù)進一步的生化鑒定試驗，可將大腸菌群細分為大腸埃希氏菌（俗稱大腸桿菌）、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。大腸菌群的生物學(xué)特性：形態(tài)與染色：革蘭氏染色陰性，無芽胞桿菌。 發(fā)酵乳糖：產(chǎn)酸產(chǎn)氣 培養(yǎng)特性：在ＥＭＢ瓊脂上的典型菌落——呈深紫黑色或中心深紫色，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，常有金屬光澤； 在麥康凱瓊脂上的典型菌落——呈桃紅色或中心桃紅、圓形，扁平，光滑濕潤。麥康凱平板的原理：利用膽鹽來抑制革蘭陽性細菌的生長，利用乳糖發(fā)酵，中性紅的顏色可把分解乳糖和不分解乳糖的細菌區(qū)別開．沙門菌及志賀菌呈無色菌落，大腸埃希菌呈桃紅色菌落．供腸道致病菌的分離培養(yǎng)和非發(fā)酵細菌鑒別用。 糖發(fā)酵實驗原理： 多糖 →單糖 →丙酮酸 →酸性產(chǎn)物(或產(chǎn)酸產(chǎn)氣) →pH↓ → 指示劑呈酸性變色(若產(chǎn)氣者有氣泡出現(xiàn))培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管、半固體發(fā)酵管、微量發(fā)酵管指示劑：酚紅、溴甲酚紫等結(jié)果：培養(yǎng)基呈酸性變色應(yīng)用：觀察細菌對糖度的 分解情況，常用于腸道桿菌的鑒定原理：細菌分解糖類是依靠細菌細胞所產(chǎn)生的各種酶類的作用，細菌產(chǎn)生的分解糖類的酶，隨細菌種類不同而異，可以此來鑒別細菌。乳糖是雙糖，細菌分解雙糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖，葡萄糖可直接被細菌利用，而半乳糖則需在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)化為葡萄糖后再被利用。糖發(fā)酵試驗主要是測定細菌分解糖類以后所產(chǎn)生的酸，以培基基pH降低(指示劑變色)作為觀察結(jié)果的指標(biāo)。 MPN檢索表： MPN 為最大可能數(shù)(Most Probable Number)的簡稱。這種方法，對樣品進行連續(xù)系列稀釋，加入培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，從規(guī)定的反應(yīng)呈陽性管數(shù)的出現(xiàn)率，用概率論來推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。MPN檢索表只給了三個稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。3 、平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在15 CFU～150 CFU 之間的平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)， mm 或更大。 證實試驗從VRBA 平板上挑取10 個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB 肉湯管內(nèi)，36 ℃177。1 ℃培養(yǎng)24 h～48 h，觀察產(chǎn)氣情況。凡BGLB 肉湯管產(chǎn)氣，即可報告為大腸菌群陽性。大腸菌群平板計數(shù)的報告經(jīng)最后
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