蛋白質(zhì)的共價(jià)結(jié)構(gòu)ppt課件(編輯修改稿)
2025-04-17 21:42 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省S SSSSS胰島素HOCH2CH2SHSH SHSHSH SHSHSCH2C00H SCH2C00HSCH2C00H SCH2C00HSCH2C00H SCH2C00HICH2COOHDate 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省作用： 這些反應(yīng)可用于巰基的保護(hù) 。巰基（SH）的保護(hù)楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系 范樹國(guó)Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省（四）氨基酸組成的分析用于蛋白的氨基酸組成測(cè)定的水解方法主要是酸水解，同時(shí)輔以堿水解。氨基酸分析儀圖譜Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省（五）多肽鏈的部分裂解和肽段混合物的分離純化胰蛋白酶 (trypsin) 這是最常用的蛋白水解酶，專一性強(qiáng)，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。得到的是以 Arg或 Lys為 C末端殘基的肽段，肽段數(shù)目等于多肽鏈中 Arg和 Lys總數(shù)加 1。楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系 范樹國(guó)Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省為了減少胰蛋白酶的作用位點(diǎn)，可以通過化學(xué)修飾將其側(cè)鏈基因保護(hù)起來。用馬來酸酐可以保護(hù) Lys殘基側(cè)鏈上的 ε －NH2，胰蛋白酶就不會(huì)水解 Lys竣基參與形成的肽鍵，只能斷裂 Arg羧基所形成的肽鍵；反之，如果用 1， 2－環(huán)己二酮修飾Arg的胍基，則胰蛋白面只能裂解 Lys羧基所形成的肽鍵。如果想增加多肽鏈中胰蛋白酶的斷裂點(diǎn)，可以用丫丙啶處理多肽鏈樣品，這時(shí) Cys殘基側(cè)鏈被修飾成類似 Lys的側(cè)鏈，也具有 ε － NH2。這樣胰蛋白酶便能斷裂 Cys羧基端的肽鍵。R1=Lys和 Arg側(cè)鏈（專一性較強(qiáng)，水解速度快）。 R2=Pro 水解受抑。Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省糜蛋白酶 (chymotrypin)或胰凝乳蛋白酶 (Chymotrypsin)：它斷裂 Phe、 Trp和 Tyr等疏水氨基酸的羧基參與形成的肽鍵。斷裂鍵鄰近的基團(tuán)是堿性的，裂解能力增加；是酸性的，裂解能力將減弱。肽鏈水解位點(diǎn)R1=Phe, Trp,Tyr時(shí)水解快 。 R1= Leu， Met和 His水解稍慢。R2=Pro 水解受抑。Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省肽鏈水解位點(diǎn)胃蛋白酶 (pepsin) 它要求被斷裂鍵兩側(cè)的殘基都是疏水性氨基酸，如 PhePhe。此外與糜蛋白酶不同的是酶作用的最適 pH，前者是 pH2，后者是 pH89，由于二硫鍵在酸性條件下穩(wěn)定，因此確定二硫鍵位置時(shí)，常用胃蛋白酶來水解。R1和 R2＝ Phe, Trp, Tyr。 Leu以及其它疏水性氨基酸水解速度較快。R1=Pro 水解受抑。Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省肽鏈水解位點(diǎn)嗜熱菌蛋白酶（ thermolysin） :常用于斷裂較短的多肽鏈。R2=Phe, Trp, Tyr。 Leu， Ile, Met以及其它疏水性強(qiáng)的氨基酸水解速度較快。R2=Pro或 Gly 水解受抑。R1或 R3=Pro 水解受抑。楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系 范樹國(guó)Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省葡萄球菌蛋白酶（ Staphylococcal protease) 當(dāng)裂解在磷酸緩沖液 ()中進(jìn)行的，它能在 Glu殘基和 Asp殘基的羧基側(cè)斷裂肽鍵。如果改用碳酸氫銨緩沖液 ()或醋酸銨緩沖液 ()時(shí)，則只能斷裂 Glu殘基的羧基側(cè)肽鍵。梭菌蛋白酶（ clostripain） 專門裂解 Arg殘基的羧基所形成的肽鍵。即使在 6mol/L尿素中 20小時(shí)內(nèi)仍具活力，這樣對(duì)不溶性蛋白質(zhì)的長(zhǎng)時(shí)間裂解將是很有效的。楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系 范樹國(guó)Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省消化道內(nèi)幾種蛋白酶的專一性（ ） （ ）（脂肪族）胰凝乳蛋白酶胃蛋白酶 彈性蛋白酶羧肽酶胰蛋白酶氨肽酶 羧肽酶（ Phe. Trp）楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系 范樹國(guó)Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省2. 化學(xué)裂解法 溴化氰 只斷裂由 Met殘基的羧基參加形成的肽鍵。Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省羥胺 能專一性地?cái)嗔?— AsnGly— 之間的肽鍵。但專一性不很強(qiáng)，如 — AsnLeu— 及 — AsnAla— 鍵也能部分裂解。肽段的分離提純 多肽鏈用上述方法斷裂后，所得的肽段混合物通常使用凝膠過濾、凝膠電泳、離子交換纖維素和離子交換萄聚糖柱層析、高效液相色譜、高效薄層層析等方法進(jìn)行分離提純。楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系 范樹國(guó)Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世?。╇亩伟被嵝蛄械臏y(cè)定Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省 蛋白水解酶中有一類是肽鏈外切酶或稱外肽酶（exopeptidases)，例如氨肽酶和羧肽酶，它們分別從肽鏈的 N端和 C端逐個(gè)地向里切。因此，原則上只要能跟隨酶水解的過程分別定量測(cè)出釋放的氨基酸，便能確定肽的順序。然而這種方法實(shí)際上有許多困難，局限性很大，它只能用來測(cè)定末端附近很少幾個(gè)殘基的順序。質(zhì)譜法一次能測(cè)的氨基酸殘基一般 10個(gè)左右，但質(zhì)譜法具有樣品用量少，分析速度快的優(yōu)點(diǎn)。楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系 范樹國(guó)Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯世省柯世省推定的依據(jù)是 “ 中心法則 ” 。推定法仍需與直接的氨基酸序列分析相配合，如果沒有必需的部分氨基酸序列分析，就不可能找到正確的密碼讀框。楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系 范樹國(guó)Date 臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院臺(tái)州學(xué)院生命科學(xué)與醫(yī)藥化工學(xué)院 柯
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