人教版教學課件名校聯(lián)盟江蘇省懷仁中學高二生物12基因工程的基本操作程序(編輯修改稿)
2025-02-14 00:46 本頁面
【文章內容簡介】 /10 23 ① 概念： PCR全稱為 _______________，是一項 在生物 ____復制 ___________的核酸合成技術 ③ 條件： _______________________、 _______________、 ___________ 、 ： ② 原理： __________ ④ 方式：以 _____方式擴增，即 ____（ n為擴增循 環(huán)的次數(shù)） ⑤ 結果： 選修 1 P60 聚合酶鏈式反應 體外 特定 DNA片段 DNA雙鏈復制 已知基因的核苷酸序列 四種脫氧核苷酸 一對引物 DNA聚合酶 指數(shù) 2n 使目的基因的片段在短時間內成百萬倍地擴增 利用 PCR技術擴增目的基因 2022/2/10 24 ⑥ 過程： a、 DNA變性（ 90℃ 95℃ ）：雙鏈 DNA模板 在熱作用下， _____斷裂，形成 ___________ b、退火（ 復性 55℃ 65℃ ）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與 DNA模板結合，形成局部 ________。 c、延伸（ 70℃ 75℃ ）：在 Taq酶的作用下，從 引物的 5′ 端 → 3′ 端 延伸，合成與模板互補 的 ________。 氫鍵 單鏈 DNA 雙鏈 DNA鏈 2022/2/10 25 2022/2/10 26 利用 PCR技術擴增目的基因 2022/2/10 27 山西省孝義市第二中學 PCR技術擴增過程 a、 DNA變性（ 90℃ 95℃ ）：雙鏈 DNA模板 在熱作用下， 斷裂，形成 _______ b、復性（ 55℃ 60℃ ）：系統(tǒng)溫度降低，引物 與 DNA模板結合，形成局部 ________。 c、延伸（ 70℃ 75℃ ）：在 Taq酶的作用下，從引物的 5′ 端 → 3′ 端延伸，合成與模板互補的 ________。 氫鍵 單鏈 DNA 雙鏈 DNA鏈 隨堂闖關隨堂闖關2022/2/10 28 PCR技術 DNA復制 過程 DNA變性（ 90～ 95℃ ） → 退火（復性 55~60℃ ） → 子鏈延伸（ 70~75℃ ） → 重復循環(huán) DNA復制起始， RNA引物形成→ DNA片段生成 → RNA引物水解→ 完整的 DNA分子形成 相同點 原則 堿基互補配對 條件 模板、原料（ dCTP、 dATP、 dGTP、 dTTP）、能量、酶、引物等 不同點 解旋方式 氫鍵在高溫下斷裂，雙鏈全部解開 解旋酶催化氫鍵逐步斷裂 場所 體外 主要在細胞核中 引物 DNA RNA 酶 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（ Taq酶） 解旋酶、 DNA聚合酶、 DNA連接酶等 結果 在短時間內形成大量的 DNA片段 形成完整的 DNA分子 利用 PCR技術擴增目的基因 2022/2/10 29 目的基因的 mRNA 單鏈 DNA (cDNA） 雙鏈 DNA (即目的基因 ) 反轉錄 合成 1）反轉錄法： 以目的基因轉錄成的信使 RNA為模板，反轉錄成互補的單鏈 DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈 DNA，從而獲得所需的基因。 蛋白質的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結構基因的核苷酸序列 目的基因 推測 推測 化學合成 2）根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： 2022/2/10 30 ： 將目的基因導入微生物細胞 ： 大腸桿菌 繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對少 處理細胞 → 細胞→ 表達載體與感受態(tài)細胞混合 → _________細胞吸收 DNA分子。 Ca2+
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