【文章內(nèi)容簡介】 測試樣放在白 紙上 ,蓋上桶蓋密封 放置 24 小時后 ,反轉(zhuǎn)樣品面 ,蓋上桶蓋密封 密封放置 12小時后取出樣品于通風(fēng)櫥內(nèi)涼置 4小時 觀測顯影圖 實(shí)驗(yàn)報告 樣品來源、類型 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果分析 嬰氏 (福建 )紙業(yè)有限公司 YINGSHI(FUJIAN)PAPER CO.,LTD. 紙尿褲中細(xì)菌菌數(shù)總數(shù)測定 編制 :許金釵 審核 : YSQ 檢測方法 13 批準(zhǔn) : 細(xì)菌菌數(shù)總數(shù)的測定 目的 為了更好地統(tǒng)一公司的檢測方法 ,確保公司質(zhì)量控制和產(chǎn)品檢測的準(zhǔn)確性。 職責(zé) 品管部負(fù)責(zé)檢測方法的收集、編寫、審核 ,確保產(chǎn)品和環(huán)境衛(wèi)生。確實(shí)做好產(chǎn)品檢測的準(zhǔn) 確性 ,并做問題反饋 適用范圍 本方法適用于細(xì)菌菌數(shù)總數(shù)的測定。 儀器和試劑 10ml移液管、 1ml移液管、 15cm 平皿、破碎器、 0。 9%生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 ,250ml 三角瓶、試管 定義 菌落總數(shù) :每 L或每 ml樣檢中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。 無菌操作 :所用玻璃器皿必須是完全滅菌的 ,不得殘留有細(xì)菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理。樣品如果有包裝 ,應(yīng)用 75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺或經(jīng)過消毒處理的無菌室進(jìn)行。瓊脂平板在工作臺暴露 15分鐘 ,每個平板不得超過 15個菌 落。 檢驗(yàn)程序 檢樣→作成幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液→選擇 2~3 個適宜稀釋液→各以 1ml之量加入滅菌平皿內(nèi)→每平皿內(nèi)加入適量瓊脂→放置在 36177。 1℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48 小時→菌落計數(shù)→報告 操作步驟 (一 )樣品的處理和稀釋 : 操作方法 :(1)以無菌操作取檢樣 25g,放于 225mL 滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(nèi) (瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠 ,稀釋液后 ,最好置滅菌均質(zhì)器中以8000~10000r/min 的速度處理 1min,制成 1:10 的均勻稀釋液。 (2)用 1ml 滅菌吸管吸取 1:10 稀釋液 1ml,沿管壁徐徐注入含有 9ml 滅 菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi) ,振搖試管混合均勻 ,制成 1:100 的稀釋液。 (3)另取 1ml滅菌吸管 ,按上項操作順序 ,制 10倍遞增稀釋液 ,如此每遞增稀釋一次即換用 1 支 1ml 滅菌吸管。 (為減少樣品稀釋誤差 ,在連續(xù)遞次稀釋時 ,每一稀釋液應(yīng)充分振搖 ,使其均勻 ,同時每一稀釋度應(yīng)更換一支吸管。 ) (二 )傾注培養(yǎng) 操作方法 :(1)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計 ,選擇 2~3 個適宜稀釋度 ,分別在制 10倍遞增稀釋的同時 ,以吸取該稀釋度的吸管移取 1ml稀釋液于滅菌平皿中 ,每個稀釋度做兩個平皿。 (2)將涼至 46℃營養(yǎng)瓊 脂培養(yǎng)基注入平皿約 15ml,并轉(zhuǎn)動平皿 ,混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有 1ml 稀釋液 (不含樣品 )的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。 (3)待瓊脂凝固后 ,翻轉(zhuǎn)平板 ,置 36177。 1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng) 48177。 2h,取出計算平板內(nèi)菌落數(shù)目 ,乘以稀釋倍數(shù) ,即得每克 (每毫升 )樣品所含菌落總數(shù)。 (為了防止樣品顆粒與菌落混淆不清 ,可在營養(yǎng)瓊脂中加入氯化三苯四氮唑(TTC),培養(yǎng)后菌落呈紅色 ,易于分別。 ) (三 )計數(shù) 操作方法 :培養(yǎng)到時間后 ,計數(shù)每個平板上的菌落數(shù)。可用肉眼觀察 ,必要時用放大鏡檢查 ,以防遺漏。在記下各平板的菌落總數(shù)后 ,求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù) ,計算處原始樣品中每克 (或每 ml)中的菌落數(shù) ,進(jìn)行報告。 (到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時間 ,應(yīng)立即計數(shù)。如果不能立即計數(shù) ,應(yīng)將平板放置于 04℃ ,但不得超過24h。 ) 注 :(1)計數(shù)時應(yīng)選取菌落數(shù)在 30~300 之間的平板 (SN 標(biāo)準(zhǔn)要求為 25~250 個菌落 ),若有二個稀釋度均在 30~300 之間時 ,按國家標(biāo)準(zhǔn)方法要求應(yīng)以二者比值決定 ,比值小于或等于 2取平均數(shù) ,比值大于 2則其較小數(shù)字 (有的規(guī)定不考慮其比值大小 ,均以平均數(shù)報告 )。 (2)若所有稀釋度均不在計數(shù)區(qū)間。如均大于 300,則取最高稀釋度 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。如均小于 30,則以最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報告之。如菌落數(shù)有的大于 300,有的又小于 30,但均不在 30~300 之間 ,則應(yīng)以最接近 300 或 30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。如所有稀釋度均無菌落生長 ,則應(yīng)按小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。有的規(guī)定對上述幾種情況計算出的菌落數(shù)按估算值報告。 (3)不同稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比 (同一稀釋度的二個平板的菌落數(shù)應(yīng)基本接近 ),即稀釋倍數(shù)愈高菌落數(shù)愈少 ,稀釋倍數(shù)愈低菌落數(shù)愈多。如出現(xiàn)逆反現(xiàn)象 ,則應(yīng)視為檢驗(yàn)中的差錯 ,不應(yīng) 作為檢樣計數(shù)報告的依據(jù)。 (4)當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長時 ,如呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯界限 ,則應(yīng)作為一個菌落計 ,如存在有幾條不同來源的鏈 ,則每條鏈均應(yīng)按一個菌落計算 ,不要把鏈上生長的每一個菌落分開計數(shù)。如有片狀菌落生長 ,該平板一般不宜采用 ,如片狀菌落不到平板一半 ,而另一半又分布均勻 ,則可以半個平板的菌落數(shù)乘 2 代表全平板的菌落數(shù)。 (5)當(dāng)計數(shù)平板內(nèi)的菌落數(shù)過多 (即所有稀釋度均大于 300 時 ),但分布很均勻 ,可取平板的一半或 1/4計數(shù)。再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)作為該平板的菌落數(shù)。 (四 )結(jié)果報告 菌落數(shù)的報告 ,按國家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定菌落數(shù)在 1~100 時 ,按實(shí)有數(shù)字報告 ,如大于 100時 ,則報告前面兩位有效數(shù)字 ,第三位數(shù)按四舍五入計算。固體檢樣以克(g 為單位報告 ,液體檢樣以毫升 (ml)為單位報告 ,表面涂擦則以平方厘米 (cm2)報告。 嬰氏 (福建 )紙業(yè)有限公司 YINGSHI(FUJIAN)PAPER CO.,LTD. 紙尿褲中真菌菌落總數(shù)測定 編制 :許金釵 審核 : YSQ 檢測方法 14 批準(zhǔn) : 真菌菌落總數(shù)測定 目的 為了更好地統(tǒng)一公司的檢測方法 ,確保公司質(zhì)量控制和產(chǎn)品檢測的準(zhǔn)確性。 職責(zé) 品管部負(fù)責(zé)檢測方法的收集、編 寫、審核 ,確保產(chǎn)品和環(huán)境衛(wèi)生。確實(shí)做好產(chǎn)品檢測的準(zhǔn)確性 ,并做問題反饋 適用范圍 本方法適用于真菌菌落總數(shù)的測定。 儀器和試劑 10ml移液管、 1ml移液管、 15cm 平皿、破碎器、 0。 9%生理鹽水、沙氏瓊脂培養(yǎng)基 ,250ml 三角瓶、試管 定義 真菌菌落總數(shù) :每 L或每 ml樣檢中所含真菌菌落的總數(shù)。 無菌操作 :所用玻璃器皿必須是完全滅菌的 ,不得殘留有細(xì)菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理。樣品如果有包裝 ,應(yīng)用 75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺或經(jīng)過消毒處理的無菌室進(jìn)行。 瓊脂平板在工作臺暴露 15分鐘 ,每個平板不得超過 15 個菌落。 檢驗(yàn)程序 檢樣→作成幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液→選擇 2~3 個適宜稀釋液→各以 1ml之量加入滅菌平皿內(nèi)→每平皿內(nèi)加入適量沙氏瓊脂→放置在 28177。 1℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 5天→菌落計數(shù)→報告 操作步驟 (一 )樣品的處理和稀釋 : 操作方法 :(1)以無菌操作取檢樣 25g,放于 225mL 滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(nèi) (瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠 ,稀釋液后 ,最好置滅菌均質(zhì)器中以8000~10000r/min 的速度處理 1min,制成 1:10 的均勻稀釋液。 (2)用 1ml 滅菌吸 管吸取 1:10 稀釋液 1ml,沿管壁徐徐注入含有 9ml 滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi) ,振搖試管混合均勻 ,制成 1:100 的稀釋液。 (3)另取 1ml滅菌吸管 ,按上項操作順序 ,制 10倍遞增稀釋液 ,如此每遞增稀釋一次即換用 1 支 1ml 滅菌吸管。 (為減少樣品稀釋誤差 ,在連續(xù)遞次稀釋時 ,每一稀釋液應(yīng)充分振搖 ,使其均勻 ,同時每一稀釋度應(yīng)更換一支吸管。 ) (二 )傾注培養(yǎng) 操作方法 :(1)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計 ,選擇 2~3 個適宜稀釋度 ,分別在制 10倍遞增稀釋的同時 ,以吸取該稀釋度的吸管移取 1ml稀釋液于滅菌平皿中 ,每個稀釋度做兩個平皿。 (2)將涼至 46℃左右沙氏瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml,并轉(zhuǎn)動平皿 ,混合均勻。同時將沙氏瓊脂培養(yǎng)基傾入加有 1ml 稀釋液 (不含樣品 )的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。 (3)待瓊脂凝固后 ,翻轉(zhuǎn)平板 ,置 28177。 1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng) 5 天 ,取出計算平板內(nèi)菌落數(shù)目 ,乘以稀釋倍數(shù) ,即得每克 (每毫升 )樣品所含菌落總數(shù)。 (為了防止樣品顆粒與菌落混淆不清 ,可在營養(yǎng)瓊脂中加入氯化三苯四氮唑(TTC),培養(yǎng)后菌落呈紅色 ,易于分別。 ) (三 )計數(shù)