微生物實驗論文word版(編輯修改稿)
2025-02-12 05:31 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 培養(yǎng)基成分如下： 纖維素剛果紅培養(yǎng)基（NH4）2SO4 MgSO47H2O （或MgSO4 ）KH2PO4 NaCl 纖維素 剛果紅 瓊脂 20g水 1000mLpH （2）涂布平板釋倍數(shù)分別為1010107的樣品溶液涂布到纖維素剛果紅培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)3—4 d（3）菌落形態(tài)觀察 選取一株生長較好的白色菌株（菌1）和一株粉紅色菌株（菌2）和一株水解圈非常明顯的菌株（菌3）和一株黃色真菌（菌4）進(jìn)行劃線分離。（4）劃線分離將步驟(1)中的鑒別培養(yǎng)基加熱熔化后倒入4個無菌平皿中，凝固后，用接種環(huán)挑取(3)中4種菌落在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)，至長出單菌落。2. 革蘭氏染色及菌種保存1. 革蘭氏染色基本原理：革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家Christain Gram氏創(chuàng)立的，而后一些學(xué)者在此礎(chǔ)上作了某些改進(jìn)。革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法。革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脫色，最后用復(fù)染劑(如番紅)復(fù)染。經(jīng)此方法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽性菌；如果細(xì)胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細(xì)菌染上復(fù)染劑的顏色(紅色)，該菌屬于革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色的主要原理是由于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應(yīng)不一樣。現(xiàn)在一般認(rèn)為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)。另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同PH條件下進(jìn)行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴(yán)格控制。例如，在強堿的條件下進(jìn)行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應(yīng)；PH很低時，則可都呈負(fù)反應(yīng)。此外，兩類菌的細(xì)胞壁等對結(jié)晶紫—碘復(fù)合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時間，脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。所需儀器或試劑：菌種1，2的平板培養(yǎng)物、革蘭氏染色液（結(jié)晶紫碘液，番紅染液）、顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯）、擦鏡紙、蒸餾水等。操作步驟：制片（涂布、干燥、固定）→結(jié)晶紫初染1—2min，水洗→碘液媒染1min，水洗→乙醇脫色30s，水洗→番紅復(fù)染1min，水洗→干燥→鏡檢，油鏡觀察。鏡檢結(jié)果見表1和圖4。表1 革蘭氏染色結(jié)果（“+”表示陽性，“—”表示陰性） 陰性/陽性白色菌（菌1）—粉色菌（菌2）+水解圈菌（菌3）—黃色菌（菌4）+圖1 黃色菌（菌4） 圖2 白
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