沈萍微生物學(xué)第八章(編輯修改稿)
2025-02-12 04:33 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 電鏡下直接觀察到接合現(xiàn)象 1946年采用 株?duì)I養(yǎng)缺陷型進(jìn)行實(shí)驗(yàn) ? ? 雄性菌株 F+含游離的 F因子 ? Hfr含整合的 F因子 ? F‘含游離帶有核 DNA的 F因子 ? 雌性菌株 F 不含 F因子 ? 四種菌株的相互關(guān)系 ? 性導(dǎo)的概念 （ 1） F+ F– F++ F+ （ 2） Hfr F– Hfr + F– （在大多數(shù)情況下） Hfr F– Hfr + Hfr（或 F+） （極少數(shù)情況下） （ 3） F F– F′+ F′ 注意： 接合實(shí)驗(yàn)所用到的 F 菌株是一系列營養(yǎng)缺陷型菌株，當(dāng)發(fā)生重組時(shí)，變成原養(yǎng)型 二 . 細(xì)菌的轉(zhuǎn)導(dǎo) ?概念： 借助缺陷噬菌體為媒介 ， 把供體細(xì)胞中 DNA片段攜帶到受體細(xì)胞中 ， 從而使后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象 ， 稱 轉(zhuǎn)導(dǎo) 。 獲得新遺傳性狀的受體細(xì)胞稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)子（ transductant） 。 轉(zhuǎn)導(dǎo)過程不需要細(xì)胞接觸 ，而是以噬菌體為載體 ? ： 轉(zhuǎn)導(dǎo)主要分為： 完全普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo) ? 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo) 流產(chǎn)普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo) 低頻局限性轉(zhuǎn)導(dǎo) ? 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)兩種類型 高頻局限性轉(zhuǎn)導(dǎo) ? （ 1） 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo) 供體菌任何部位的基因都有被轉(zhuǎn)導(dǎo)的可能性。 ? 兩種情況 ： 完全 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo) ? ? ? ? ? 流產(chǎn)普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo) ? （ 2） 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo) 是指通過部分缺陷的溫和噬菌體把供體菌的少數(shù)特定基因攜帶到受體菌中并獲得表達(dá)的轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象。 ?三 .細(xì)菌的轉(zhuǎn)化 ? ? 轉(zhuǎn)化 感受態(tài) 感受態(tài)因子 ? 自然轉(zhuǎn)化 ? 人工轉(zhuǎn)化 ? ? 雙鏈吸附 單鏈進(jìn)入 同源區(qū)配對整合 復(fù)制與分離 形成 1/2轉(zhuǎn)化子 Hfr菌株中 F因子的整合、斷裂和轉(zhuǎn)移 四 .基因定位和基因組測序 Hfr的接合中斷實(shí)驗(yàn) 接合的結(jié)果轉(zhuǎn)性低，染色體基因重組率高 Hfr的中斷雜交實(shí)驗(yàn) ? “全基因組鳥槍法測序 ” ? 也稱 “ 霰彈法 ” ， 是將基因組ＤＮＡ打成小片段進(jìn)行測序，然后再將這些小的片段拼接起來，重新組裝成一個(gè)完整的基因組。它的最大優(yōu)點(diǎn)是經(jīng)濟(jì)、快速、高效，但對高性能計(jì)算的方法和設(shè)備要求非常高。 全基因組鳥槍法測序的主要步驟是 ? 第一，建立高度隨機(jī)、插入片段大小為 ? 2kb左右的基因組文庫。 ? 第二，高效、大規(guī)模的末端測序。測序 ? 總長度達(dá) 6倍基因組。 ? 第三，序列集合、按末端重疊連接成大片斷。 ? 第四，重疊群按合適順序排隊(duì)、填補(bǔ)缺口。 ? 鳥槍法測序的缺點(diǎn) 隨著所測基因組總量增大，所需測序的片段大量增加， ? 高等真核生物（如人類）基因組中有大量重復(fù)序列，導(dǎo)致判斷失誤。 DNA測序方法 雙脫氧核苷酸終止法 化學(xué)修飾法 ? 核苷酸序列分析 ? （ 1） Sanger 雙脫氧鏈終止法 ? 例 。 ? CTGACTTCGACAA ? ddATP ddCTP ddTTP ddGTP DNApol 4種 dNTP ddNTP 5/ 3/ 標(biāo)記的引物 ? CTGACTTCGACAA ? ddATP ddCTP ddTTP ddGTP ? 11 ddATP 10 ddCTP 9 ddTTP 12 ddGTP ? 7 ddATP 4 ddCTP 3 ddTTP 8 d
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