蛋白質iiippt課件(編輯修改稿)
2025-02-11 10:43 本頁面
【文章內容簡介】 ? 根據純化和鑒定的方式的不同，常把蛋白質的純度定義為：電泳純、結晶純、色譜純等等 蛋白質分離純化常用技術 ? 沉降分離（ Sedimentation） ? 蛋白質分子量、形狀的不同會產生密度和沉降速度的差異 ? 差速離心：利用蛋白質分子在離心力場的作用下沉降速度的差異分離不同蛋白質 ? 單位離心力場下，物質的沉降速度與分子量和分子形狀有關 ? 在生物化學中常用沉降系數表征分子量 ? 密度梯度離心 ? 利用物質在密度與其相同的溶液中不會沉降的特點區(qū)分不同密度的物質 ? 常用蔗糖， CSCl等構建 ? 層析、色譜（ Chromatography） ? 分配層析 ? 一般原理：利用待分離物質在流動相和固定相中分配系數的不同，使物質間出現移動速度的差異，從而區(qū)分不同的物質。 ? 常用方式： ? 分配柱層析 ? 濾紙層析 ? 薄層層析 ? 離子交換層析 ? 氣相色譜 ? 高效液相色譜（ HPLC） ? 利用非常細的顆粒固相支持劑，提高分配表面積 ? 溶劑系統(tǒng)采用高壓，提高系統(tǒng)速度 ? 離子交換層析 ? 原理： ? 利用不同離子在不同的 pH下與固定相結合強度的差異，使待分離的物質在特定條件下與固定相中的同型離子發(fā)生交換，而與固定相結合，從而區(qū)分不同物質 ? 可分為： ? 陽離子交換柱：強酸型、弱酸型 ? 陰離子交換柱：強堿型、弱堿型 ? 常用介質： ? 聚苯乙烯 苯二乙烯樹脂 ? 離子交換纖維素 ? 離子交換葡聚糖 ? 洗脫方式 ? 分段洗脫 ? 梯度洗脫 ? 分子排阻層析（ molecularexclusion Chromatography） ? 原理：利用具有不同孔徑的多孔網狀結構的凝膠珠作為分離介質，小分子由于擴散作用進入凝膠顆粒內部而被滯留；大分子被排阻在凝膠顆粒外面，在顆粒之間迅速通過。又稱凝膠過濾、分子篩 ? 一般步驟 ? 柱平衡 ? 蛋白質混合物上柱 ? 洗脫液洗脫蛋白
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