新手上路westernblot問(wèn)題集合(編輯修改稿)
2025-02-11 09:10 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 度低。(2）膠體金，靈敏度高，檢測(cè)范圍可到pg級(jí)，但染色比較穩(wěn)定。（3）生物素化靈敏度位于2之間，可用于任何一種膜。 Q6: 用Western檢測(cè)基因轉(zhuǎn)染后細(xì)胞培養(yǎng)上清中表達(dá)的目的蛋白（定性），分子量為20KD，濃度約為幾百ng/ml。蛋白樣品是否需濃縮、純化？如何濃縮、純化上清液中的目的蛋白？對(duì)小分子蛋白Western blot時(shí)需特別注意哪些條件？A6：按照提供的濃度，如果做Western blot，是不用濃縮樣品的. 對(duì)于20kd的小分子的蛋白，Western Blot中要注意的是： 轉(zhuǎn)移時(shí)的時(shí)間， 轉(zhuǎn)移時(shí)的電流或電壓. transfer buffer 中加20%的甲醇. 可以用1315%的分離膠. Q7: 半干法轉(zhuǎn)移與膠的面積和蛋白分子兩大小有一定關(guān)系，那么濕法轉(zhuǎn)移是不是所有的轉(zhuǎn)移條件都一樣呢？一般的條件是怎樣的？A7：半干轉(zhuǎn)的電流大小是按照面積來(lái)算的，時(shí)間是根據(jù)蛋白分子大小定的；而濕轉(zhuǎn)的話電流是恒定的，時(shí)間也是根據(jù)分子量而定。 Q8: 采用生物素標(biāo)記的二抗SABCDAB檢測(cè)系統(tǒng)做western，非特異性的條帶和背景很高
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