分子克隆載體ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-02-10 09:15 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 1)氨芐青霉素抗性基因 (ampr apr) (2)卡那霉素抗性基因 (kanr kmr) (3)四環(huán)素抗性基因 （ tcr tetr） (4)氯霉素抗性基因 (cmpr cmr) (5)新霉素抗性基因（ neor） pBR322的大小是 4361bp的環(huán)狀雙鏈 DNA， 其堿基序列已經(jīng)全部清楚 。 是最早應用于基因工程的載體之一 。 含有 24種限制酶的單一識別位點 ， 具有四環(huán)素抗性基因 (tetr)和氨芐青霉素抗性基因 (ampr)。 將質(zhì)粒 pSF124中含 ampr基因 的 DNA片段和 質(zhì)粒 pSC101中含 tetr基因 的 DNA片段同 含 ColE1復制起始點 (來源于pMB 松散型 )的 DNA片段 重組 ， 構(gòu)建成質(zhì)?？寺≥d體pBR322。 pBR322 普通型載體 pBR322的結(jié)構(gòu)圖 pB R32 2B a m HIS a l IH i n d I I IP s t IS c a I A m pro r i(4. 36 k b)pBR322 如何篩選？ 利用 Tetr基因內(nèi)部的 BamHI位點來插入外源 DNA片段，可以通過插入失活進行篩選。 BamHI G/GATTC 經(jīng)重組 DNA分子轉(zhuǎn)化處理的受體菌在不含標記藥物 tc的瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，則含或不含重組 DNA分子的受體菌都能長出菌落。 然后取菌落的一部分接種在含 tc 的瓊脂培養(yǎng)基上，不會長出菌落的原菌落才是真正在 tcr基因區(qū)插入外源 DNA片段的克隆子。 （為什么？） pUC質(zhì)粒 pUC質(zhì)粒系列是在 pBR322基礎(chǔ)上改建成的； 包括 pBR322的 ampr基因； 缺乏控制拷貝數(shù)的 rop基因。 pUC的主要優(yōu)點： （ 1） 分子量更小 ，僅為 2686bp，容納外源 DNA量增大；具有 更高的拷貝數(shù) （每個細胞含 500700個拷貝）。 （ 2）含易于檢測是否有外源 DNA插入的標記基因 LacZ，可利用 ?互補原理進行 藍白篩選。 （ 3） 多克隆位點區(qū)（ MCS） 由人工合成的多個單一酶切位點構(gòu)成。 pUC18 pUC19 含四個部分： （ 1）來自 pBR322的質(zhì)粒復制起點（ ori）； （ 2） ampr 。 （ 3） 大腸桿菌 β半乳糖苷酶基因（ lacZ）的啟動子及其編碼 α肽鏈的 DNA序列； （ 4）多克隆位點 （ MCS） lacZ` Ori Ampr MCS Blue White ampr ampr Insert Insert No insert Lac Z` Lac Z` λ噬菌體載體 （ lambda phage vector） 把感染細菌的病毒稱為噬菌體 。 病毒主要有 DNA（ 或 RNA） 和外殼蛋白組成 。 通過感染 ， 病毒顆粒進入宿主細胞 。 T2噬菌體結(jié)構(gòu)示意圖 λ噬菌體的性質(zhì) 1 λ噬菌體由 λDNA和外殼蛋白組成。 2 在噬菌體中 DNA是線性的，全長 48502bp
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