基因的克隆ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 22:02 本頁面
【文章內容簡介】 成黏性末端） 由于連接平末端 DNA片段時，所需底物濃度高，且連接效率低。所以一般需要進行修飾或改造形成黏性末端后再進行連接。 圖為人工接頭連接法 利用適配子來重組 DNA分子 連接產(chǎn)物導入受體細胞（細菌） ? 氯化鈣法將其導入受體細胞： 利用氯化鈣和熱休克使受體菌成為感受態(tài)細胞，促進外源 DNA進入。 ? 感受態(tài)細胞：宿主細胞與重組 DNA在 0攝氏度的氯化鈣溶液中孵育，快速轉入 42攝氏度造成熱休克。經(jīng)此處理后的細胞“容易”接受外源基因，一般叫做感受態(tài)細胞。 ? 處于感受態(tài)的細菌表面正電荷增加，細胞膜的結構有改變， 通透性增強，轉化子易于進入細胞。 連接產(chǎn)物導入受體細胞（真核細胞） ?借助于載體的基因轉移：主要是以重組的動植物病毒、反轉錄病毒及侵染植物的農(nóng)桿菌 Ti質粒直接傳染受體細胞，把外源基因引入。 ?不需借助載體的基因轉移： ? 磷酸鈣沉淀法的原理：將轉移基因的 DNA溶液與適量的氯化鈣溶液混合，再加入一定量的磷酸鹽溶液，逐步生成磷酸鈣 DNA沉淀復合物。將適量的沉淀復合物加入到細胞培養(yǎng)液中，通過細胞的胞飲作用進入到細胞質或進而轉移到細胞核中，然后整合到染色體上。 ? 脂質體介導法 :脂質體是磷脂在水中形成的一種有脂類雙分子層圍成的囊狀脂質小泡結構，其外周是脂雙層，內部是水腔。它可以與 DNA 分子通過靜電結合或直接把 DNA 分子包裹在其內，并通過細胞膜把基因運送到細胞內，實現(xiàn)外源基因的有效轉染。 ?血影細胞介導法 :血影細胞是指哺乳動物的紅細胞在機械作用、病毒誘導、低滲等條件下發(fā)生溶血且使血紅蛋白大量溢出，最后形成僅有被細胞膜包被的細胞結構。在溶血過程中由于外界的作用使細胞膜的通透性加強，不僅血紅蛋白溢出，外源基因也容易進入；當外界條件發(fā)生改變后，紅細胞膜又可以恢復原來的選擇通透性。外源基因→ 血影細胞 ﹢ 受體細胞 → 融合基因導入
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