基因的克隆ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 22:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 成黏性末端） 由于連接平末端 DNA片段時，所需底物濃度高，且連接效率低。所以一般需要進(jìn)行修飾或改造形成黏性末端后再進(jìn)行連接。 圖為人工接頭連接法 利用適配子來重組 DNA分子 連接產(chǎn)物導(dǎo)入受體細(xì)胞（細(xì)菌） ? 氯化鈣法將其導(dǎo)入受體細(xì)胞： 利用氯化鈣和熱休克使受體菌成為感受態(tài)細(xì)胞，促進(jìn)外源 DNA進(jìn)入。 ? 感受態(tài)細(xì)胞：宿主細(xì)胞與重組 DNA在 0攝氏度的氯化鈣溶液中孵育，快速轉(zhuǎn)入 42攝氏度造成熱休克。經(jīng)此處理后的細(xì)胞“容易”接受外源基因，一般叫做感受態(tài)細(xì)胞。 ? 處于感受態(tài)的細(xì)菌表面正電荷增加，細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)有改變， 通透性增強，轉(zhuǎn)化子易于進(jìn)入細(xì)胞。 連接產(chǎn)物導(dǎo)入受體細(xì)胞（真核細(xì)胞） ?借助于載體的基因轉(zhuǎn)移：主要是以重組的動植物病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒及侵染植物的農(nóng)桿菌 Ti質(zhì)粒直接傳染受體細(xì)胞，把外源基因引入。 ?不需借助載體的基因轉(zhuǎn)移： ? 磷酸鈣沉淀法的原理：將轉(zhuǎn)移基因的 DNA溶液與適量的氯化鈣溶液混合，再加入一定量的磷酸鹽溶液，逐步生成磷酸鈣 DNA沉淀復(fù)合物。將適量的沉淀復(fù)合物加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，通過細(xì)胞的胞飲作用進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)或進(jìn)而轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中，然后整合到染色體上。 ? 脂質(zhì)體介導(dǎo)法 :脂質(zhì)體是磷脂在水中形成的一種有脂類雙分子層圍成的囊狀脂質(zhì)小泡結(jié)構(gòu)，其外周是脂雙層，內(nèi)部是水腔。它可以與 DNA 分子通過靜電結(jié)合或直接把 DNA 分子包裹在其內(nèi)，并通過細(xì)胞膜把基因運送到細(xì)胞內(nèi)，實現(xiàn)外源基因的有效轉(zhuǎn)染。 ?血影細(xì)胞介導(dǎo)法 :血影細(xì)胞是指哺乳動物的紅細(xì)胞在機械作用、病毒誘導(dǎo)、低滲等條件下發(fā)生溶血且使血紅蛋白大量溢出，最后形成僅有被細(xì)胞膜包被的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。在溶血過程中由于外界的作用使細(xì)胞膜的通透性加強，不僅血紅蛋白溢出，外源基因也容易進(jìn)入；當(dāng)外界條件發(fā)生改變后，紅細(xì)胞膜又可以恢復(fù)原來的選擇通透性。外源基因→ 血影細(xì)胞 ﹢ 受體細(xì)胞 → 融合基因?qū)?
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