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正文內(nèi)容

微生物工程第一章菌種與種子擴大培養(yǎng)(編輯修改稿)

2025-02-09 23:42 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 g/l F616 (leu , Thr ) g/l F950 (leu , Thr , AEC r) g/l 基因的直接進化 (directed evolution) ? 突變 基因突變庫的建立 ? 篩選 基因突變庫的篩選 ? 基因復(fù)制與遺傳 步驟: 在分子水平上,對目標基因直接處理,然后通過高通量的篩選方法,提高目標蛋白的性能。 七 、 生產(chǎn)用菌種的保藏與復(fù)壯 ( 一 ) 、 菌種保藏 概念:根據(jù)菌種的生理生化特點 , 人工地創(chuàng)造條件 , 使其代謝活動處于不活潑狀態(tài) 。 不同情況 、 不同菌種采用不同方法 。 ?斜面低溫保藏法 ( 如 酵母菌 ) ?石蠟油封保藏法 ( 如 酵母菌 ) ?砂土保藏法 ( 如放線菌 ) ?硅膠保藏法 ?冷凍干燥保藏法 ( 如一般細菌 ) ?液氮超低溫凍結(jié)法(如真菌) ( 二 ) 、 防止菌種衰退的措施 ( 1) 、 菌種的衰退 ?發(fā)酵力的下降 ?繁殖力的下降 ?發(fā)酵產(chǎn)品的得率降低 ( 2) 、 衰退的原因 ?菌種保藏不妥 ?菌種生長的要求沒有得到滿足 遇到不利的條件 失去某些必要的條件 ?發(fā)生回復(fù)突變 ( 3) 、 防止衰退的方法 ?做好菌種的保藏工作 ?盡可能滿足生長條件 ?盡量減少傳代次數(shù) ( 4) 、 菌種的分離復(fù)壯 ?普通方法:稀釋平板法或平板劃線法分離單細胞菌落 ?芽孢桿菌:先將菌液沸水處理數(shù)分鐘 , 再用平板進行分離 ?改變培養(yǎng)條件:如單細胞分離仍效果不佳,可考慮改變培養(yǎng)溫度條件,以利高產(chǎn)菌株生長而不利低產(chǎn)菌株生長 返回 第二節(jié) 種子的擴大培養(yǎng) 種子擴大培養(yǎng)的目的與要求 工業(yè)微生物的培養(yǎng)類型 種子制備的技術(shù)概要及種子制備實例 影響種子質(zhì)量的因素 種子擴大培養(yǎng)是指將保存在砂土管 、 冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后 , 再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級擴大培養(yǎng) ,最終獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程 。 這些純種培養(yǎng)物稱為種子 。 一、 種子擴大培養(yǎng)的目的與要求 種子擴大培養(yǎng)的概念 : 種子擴培的目的 ? 接種量的需要 ? 菌種的馴化 ? 縮短發(fā)酵時間、保證生產(chǎn)水平 種子的要求: ? 總量及濃度能滿足要求 ? 生理狀況穩(wěn)定,個體與群體 ? 活力強,移種至發(fā)酵后,能夠迅速生長 ? 無雜菌污染 二、工業(yè)微生物的培養(yǎng)類型 培養(yǎng)類型 靜置培養(yǎng) 通氣培養(yǎng) 種子擴大培養(yǎng) 液體培養(yǎng) 表層培養(yǎng) 固態(tài)培養(yǎng) 大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn) 嫌氣性發(fā)酵 好氣性發(fā)酵 酒精、丙酮、丁醇、乳酸等 固體培養(yǎng) 液體深層培養(yǎng) 載體培養(yǎng) 兩步法液體深層培養(yǎng) 返回 三、 影響種子質(zhì)量的因素 (一)、種子制備的過程 (一)、種子制備的過程 實驗室階段: 不用種子罐,所用的設(shè)備為培養(yǎng)箱、搖床等實驗室常見設(shè)備,在工廠這些培養(yǎng)過程一般都在菌種室完成,因此現(xiàn)象地將這些培養(yǎng)過程稱為實驗室階段的種子培養(yǎng)。 生產(chǎn)車間階段 : 種子培養(yǎng)在種子罐里面進行,一般在工程歸為發(fā)酵車間管理,因此形象地稱這些培養(yǎng)過程為生產(chǎn)車間階段 。 (二)、實驗室階段 培養(yǎng)物選擇的原則 目的:種子擴培到一定的量和質(zhì),根據(jù)菌種的特點最終的培養(yǎng)物可分為兩類: ? 對于不產(chǎn)孢子和芽胞的微生物 —— 獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的菌體 對于不產(chǎn)芽孢和孢子的微生物,實驗室階段的種子擴培最終是獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的菌體,如谷氨酸的種子培養(yǎng)。 ? 獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的孢子 菌絲體培養(yǎng)步驟少,因而更容易獲得量和質(zhì)穩(wěn)定的種子,但操作繁瑣。 ? 對于產(chǎn)孢子的微生物 ? 獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的菌絲體 便于操作,但需要更仔細的控制。 培養(yǎng)基選擇的原則 培養(yǎng)基的選擇應(yīng)該是有利于菌體的生長,對孢子培養(yǎng)基應(yīng)該是有利于孢子的生長 。 在原料方面,實驗室種子培養(yǎng)階段,規(guī)模一般比較小,因此為了保證培養(yǎng)基的質(zhì)量,培養(yǎng)基的原料一般都比較精細。
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