微生物工程第一章菌種與種子擴(kuò)大培養(yǎng)(編輯修改稿)
2025-02-09 23:42 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 g/l F616 (leu , Thr ) g/l F950 (leu , Thr , AEC r) g/l 基因的直接進(jìn)化 (directed evolution) ? 突變 基因突變庫(kù)的建立 ? 篩選 基因突變庫(kù)的篩選 ? 基因復(fù)制與遺傳 步驟： 在分子水平上，對(duì)目標(biāo)基因直接處理，然后通過(guò)高通量的篩選方法，提高目標(biāo)蛋白的性能。 七 、 生產(chǎn)用菌種的保藏與復(fù)壯 （ 一 ） 、 菌種保藏 概念：根據(jù)菌種的生理生化特點(diǎn) ， 人工地創(chuàng)造條件 ， 使其代謝活動(dòng)處于不活潑狀態(tài) 。 不同情況 、 不同菌種采用不同方法 。 ?斜面低溫保藏法 （ 如 酵母菌 ） ?石蠟油封保藏法 （ 如 酵母菌 ） ?砂土保藏法 （ 如放線菌 ） ?硅膠保藏法 ?冷凍干燥保藏法 （ 如一般細(xì)菌 ） ?液氮超低溫凍結(jié)法（如真菌） （ 二 ） 、 防止菌種衰退的措施 （ 1） 、 菌種的衰退 ?發(fā)酵力的下降 ?繁殖力的下降 ?發(fā)酵產(chǎn)品的得率降低 （ 2） 、 衰退的原因 ?菌種保藏不妥 ?菌種生長(zhǎng)的要求沒(méi)有得到滿足 遇到不利的條件 失去某些必要的條件 ?發(fā)生回復(fù)突變 （ 3） 、 防止衰退的方法 ?做好菌種的保藏工作 ?盡可能滿足生長(zhǎng)條件 ?盡量減少傳代次數(shù) （ 4） 、 菌種的分離復(fù)壯 ?普通方法：稀釋平板法或平板劃線法分離單細(xì)胞菌落 ?芽孢桿菌：先將菌液沸水處理數(shù)分鐘 ， 再用平板進(jìn)行分離 ?改變培養(yǎng)條件：如單細(xì)胞分離仍效果不佳，可考慮改變培養(yǎng)溫度條件，以利高產(chǎn)菌株生長(zhǎng)而不利低產(chǎn)菌株生長(zhǎng) 返回 第二節(jié) 種子的擴(kuò)大培養(yǎng) 種子擴(kuò)大培養(yǎng)的目的與要求 工業(yè)微生物的培養(yǎng)類型 種子制備的技術(shù)概要及種子制備實(shí)例 影響種子質(zhì)量的因素 種子擴(kuò)大培養(yǎng)是指將保存在砂土管 、 冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后 ， 再經(jīng)過(guò)扁瓶或搖瓶及種子罐逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng) ,最終獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過(guò)程 。 這些純種培養(yǎng)物稱為種子 。 一、 種子擴(kuò)大培養(yǎng)的目的與要求 種子擴(kuò)大培養(yǎng)的概念 : 種子擴(kuò)培的目的 ? 接種量的需要 ? 菌種的馴化 ? 縮短發(fā)酵時(shí)間、保證生產(chǎn)水平 種子的要求： ? 總量及濃度能滿足要求 ? 生理狀況穩(wěn)定，個(gè)體與群體 ? 活力強(qiáng)，移種至發(fā)酵后，能夠迅速生長(zhǎng) ? 無(wú)雜菌污染 二、工業(yè)微生物的培養(yǎng)類型 培養(yǎng)類型 靜置培養(yǎng) 通氣培養(yǎng) 種子擴(kuò)大培養(yǎng) 液體培養(yǎng) 表層培養(yǎng) 固態(tài)培養(yǎng) 大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn) 嫌氣性發(fā)酵 好氣性發(fā)酵 酒精、丙酮、丁醇、乳酸等 固體培養(yǎng) 液體深層培養(yǎng) 載體培養(yǎng) 兩步法液體深層培養(yǎng) 返回 三、 影響種子質(zhì)量的因素 （一）、種子制備的過(guò)程 （一）、種子制備的過(guò)程 實(shí)驗(yàn)室階段： 不用種子罐，所用的設(shè)備為培養(yǎng)箱、搖床等實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)設(shè)備，在工廠這些培養(yǎng)過(guò)程一般都在菌種室完成，因此現(xiàn)象地將這些培養(yǎng)過(guò)程稱為實(shí)驗(yàn)室階段的種子培養(yǎng)。 生產(chǎn)車間階段 ： 種子培養(yǎng)在種子罐里面進(jìn)行，一般在工程歸為發(fā)酵車間管理，因此形象地稱這些培養(yǎng)過(guò)程為生產(chǎn)車間階段 。 （二）、實(shí)驗(yàn)室階段 培養(yǎng)物選擇的原則 目的：種子擴(kuò)培到一定的量和質(zhì)，根據(jù)菌種的特點(diǎn)最終的培養(yǎng)物可分為兩類： ? 對(duì)于不產(chǎn)孢子和芽胞的微生物 —— 獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的菌體 對(duì)于不產(chǎn)芽孢和孢子的微生物，實(shí)驗(yàn)室階段的種子擴(kuò)培最終是獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的菌體，如谷氨酸的種子培養(yǎng)。 ? 獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的孢子 菌絲體培養(yǎng)步驟少，因而更容易獲得量和質(zhì)穩(wěn)定的種子，但操作繁瑣。 ? 對(duì)于產(chǎn)孢子的微生物 ? 獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的菌絲體 便于操作，但需要更仔細(xì)的控制。 培養(yǎng)基選擇的原則 培養(yǎng)基的選擇應(yīng)該是有利于菌體的生長(zhǎng)，對(duì)孢子培養(yǎng)基應(yīng)該是有利于孢子的生長(zhǎng) 。 在原料方面，實(shí)驗(yàn)室種子培養(yǎng)階段，規(guī)模一般比較小，因此為了保證培養(yǎng)基的質(zhì)量，培養(yǎng)基的原料一般都比較精細(xì)。
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