【文章內(nèi)容簡介】 作用。 ⑶ 大多為重復(fù)序列：長約 50bp，適合與反式因子結(jié)合，內(nèi)部常有一個核心序列，為增強(qiáng)效應(yīng)所必需。 ⑷ 增強(qiáng)效應(yīng)具有嚴(yán)密的組織和細(xì)胞特異性。 ⑸ 沒有基因?qū)Ｒ恍浴? ⑹ 許多增強(qiáng)子受外部信號的調(diào)控。 （三） RNA聚合酶 Ⅲ 的啟動子 即 tRNA基因的啟動子，稱 Ⅲ 類啟動子。 ? Ⅲ 類啟動子位于轉(zhuǎn)錄起始點下游，稱下游啟動子或內(nèi)部啟動子。 ? Ⅲ 類啟動子包括： A盒、 B盒 A盒靠近 5′方向； B盒 靠近 3 ′方向 。 ? Ⅲ 類啟動子需要的轉(zhuǎn)錄因子包括： TF Ⅲ C、 TF Ⅲ B、 TF Ⅲ A，前兩者是共同 的，后者為 5S rRNA基因轉(zhuǎn)錄所需。 三、原核生物和真核生物轉(zhuǎn)錄起始位點的結(jié)構(gòu)差異 原核生物 真核生物 帽子結(jié)構(gòu) 沒有 有 起始核苷酸 嘌呤或嘧啶 嘌呤（ A為主） 啟動區(qū)范圍 較小 (＋ 1～－ 70) 較大 (＋ 1～－ 110) 上游序列 TTGACA CAAT、 GC、增強(qiáng)子 圖 54 P155頁 原核生物與真核生物啟動子比較 原核生物和真核生物轉(zhuǎn)錄及抑制劑 第 四 節(jié) ? 原核生物轉(zhuǎn)錄的起始 ? 原核生物轉(zhuǎn)錄的延長 ? 原核生物轉(zhuǎn)錄的終止與新合成 RNA鏈的釋放 ? 真核生物的轉(zhuǎn)錄 ? RNA生物合成抑制劑 轉(zhuǎn)錄起始需解決兩個問題： 1. DNA雙鏈解開，使其中的一條鏈作為轉(zhuǎn)錄的模板。 2. RNA聚合酶必須準(zhǔn)確地結(jié)合在轉(zhuǎn)錄模板的起始區(qū)域。 一、原核生物轉(zhuǎn)錄的起始 4. 當(dāng)三元復(fù)合物中 RNA長 6～ 9個核苷酸時， ?因子從全酶解離下來，進(jìn)入延長階段。 2. RNA聚合酶向－ 10區(qū)轉(zhuǎn)移，并與之牢固結(jié)合。－ 10區(qū) DNA雙鏈解開 12～ 17bp，形成開放的二 元啟動子復(fù)合物（模板－酶）。 ? 轉(zhuǎn)錄起始過程 1. ?因子辨認(rèn)轉(zhuǎn)錄起始點（ 35區(qū)的TTGACA序列） ， RNA聚合酶全酶(?2????)與模板－ 35序列結(jié)合，形成閉合的二元閉合啟動子復(fù)合物。 3. 在 RNA聚合酶 β亞基催化下形成第一個磷酸二酯鍵，形成三元復(fù)合物（模板－酶－ RNA）。轉(zhuǎn)錄復(fù)合物： RNApol (?2????) DNA pppGpN OH 3? 二、原核生物轉(zhuǎn)錄的延長 1. ?亞基脫落， RNA– pol聚合酶核心酶變構(gòu)，與模板結(jié)合松弛，沿著 DNA模板前移； 2. 在核心酶作用下，以模板鏈作指導(dǎo)，按照堿基配對原則： AU， TA， GC； NTP不斷聚合， RNA鏈不斷延長。 (NMP) n + NTP ?? (NMP) n+1 + PPi ?延長中的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物也叫轉(zhuǎn)錄空泡。 隨著 RNA聚合酶前移，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 RNA不斷移出轉(zhuǎn)錄空泡，已轉(zhuǎn)錄完畢的 DNA雙鏈又重新復(fù)合而不再打開。 ?原核生物的轉(zhuǎn)錄和翻譯偶聯(lián)進(jìn)行 。 轉(zhuǎn)錄空泡 (transcription bubble)： RNApol （核心酶） DNA RNA 5? 3? DNA 原核生物轉(zhuǎn)錄過程中的羽毛狀現(xiàn)象 核糖體 RNA RNA聚合酶 三、原核生物轉(zhuǎn)錄的終止和新生 RNA鏈的釋放 指 RNA聚合酶在 DNA模板上停頓下來不再前進(jìn) ， 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 RNA鏈從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物上脫落下來 。 分類： ? 不依賴 Rho (ρ) 因子的轉(zhuǎn)錄終止 ? 依賴 Rho (ρ) 因子的轉(zhuǎn)錄終止 （一） 依賴 ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止 ? 1969年， Roberts發(fā)現(xiàn)了能控制轉(zhuǎn)錄終止的蛋白質(zhì)，即 ρ因子。由相同的 6個亞基組成六聚體，分子量 200kD。 ? ρ因子具有 NTP酶活性和解螺旋酶活性，是促使轉(zhuǎn)錄三元復(fù)合物解離的根本原因。 ρ因子的 NTP酶活性依賴于單鏈 RNA的結(jié)構(gòu)。 ? ρ因子依賴性終止子含有一個反向重復(fù)序列，使 RNA末端形成一個發(fā)夾結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄延宕， ρ因子得以發(fā)揮作用，終止轉(zhuǎn)錄。 水解各種核甘三磷酸促使新生 RNA鏈從三元轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中解離出來，從而終止轉(zhuǎn)錄。 （二） 非依賴 ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止 ? DNA模板接近轉(zhuǎn)錄終止的區(qū)域內(nèi)，有較密集 的 AT配對區(qū)或 GC配對區(qū)，且 GC配對為回 文結(jié)構(gòu)。 ? 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 RNA的 3180。末端有若干個連續(xù)的 U。 ? 連續(xù) U區(qū)的 5180。端前方堿基形成 莖環(huán)結(jié)構(gòu) 或 發(fā) 夾結(jié)構(gòu) 。這種二級結(jié)構(gòu)是阻止轉(zhuǎn)錄繼續(xù)向下 游推進(jìn)的關(guān)鍵。 莖環(huán)結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄終止的機(jī)理 ? 使 RNA聚合酶變構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停頓； ? 密集 AU 配對使轉(zhuǎn)錄復(fù)合物趨于解離， 釋放 RNA。 ? 終止效率與二重對稱序列和寡聚 U的長短有關(guān)。 四、真核生物的轉(zhuǎn)錄 （一）轉(zhuǎn)錄起始 真核生物的轉(zhuǎn)錄起始上游區(qū)段比原核生物多樣化 。 轉(zhuǎn)錄起始時 ， RNApol不直接結(jié)合模板 ， 而需依靠眾多的 轉(zhuǎn)錄因子 ， 與模板結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物 ， 其起始過程比原核生物復(fù)雜得多 。 真核生物 RNA聚合酶 II所形成的轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物 轉(zhuǎn)錄因子 轉(zhuǎn)錄復(fù)合體 TBP TAFs TFIIA TFIIB TFIIF Pol II TFIIE 、 ● 真核生物轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物 PIC組裝完成， TFⅡ H使 CTD磷酸化 （二）轉(zhuǎn)錄延長 真核生物轉(zhuǎn)錄延長過程與原核生物大致相似，但因有核膜相隔，沒有轉(zhuǎn)錄與翻譯同步的現(xiàn)象。 RNApol前移處處都遇上核小體。 轉(zhuǎn)錄延長過程中可以觀察到核小體移位和解聚現(xiàn)象。 RNAPol RNAPol RNAPol 核小體 轉(zhuǎn)錄延長中的核小體移位 轉(zhuǎn)錄方向 （三）轉(zhuǎn)錄終止 RNA聚合酶 Ⅰ 轉(zhuǎn)錄出 rRNA前體 3′末端后， 繼續(xù)向下游轉(zhuǎn)錄超過 1000個 bp時，存在一個 18bp的終止序列。 RNA聚合酶 Ⅲ 轉(zhuǎn)錄模板的下游存在一個 終止子，是位于 GC豐富序列之中的 TTTT。 RNA聚合酶 Ⅲ 有內(nèi)原性的轉(zhuǎn)錄終止功能。 RNA聚合酶 Ⅱ 的轉(zhuǎn)錄沒有明確的終止信號 。 五、 RNA生物合成抑制劑 概念： 能阻斷、抑制或者干擾核酸的代謝 過程，最終抑制轉(zhuǎn)錄的一類化合物，稱 RNA生物合成抑制劑。 ? 分三類： 嘌呤和嘧啶類似物，抑制核酸前體的合成； 通過與 DNA結(jié)合而改變模板的功能； 與 RNA聚合酶結(jié)合而影響其活力。 （一）利福霉素及利福平 作用 ：抗結(jié)核藥物，特異地抑制細(xì)菌 RNA聚合酶