血清蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳(編輯修改稿)
2025-02-02 09:06 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺通過(guò)化學(xué)催化劑（過(guò)硫酸銨），四甲基乙二胺（ TEMED）作為加速劑或光催化聚合作用形成的三維空間的高聚物。聚合后的聚丙烯酰胺凝膠形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。具有 濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng) 。血清蛋白在聚丙烯酰胺凝膠電泳一般可分成 12～ 25個(gè)組分。因此適用于不同相對(duì)分子質(zhì)量物質(zhì)的分離，且分離效果好。 根據(jù)有無(wú)濃縮效應(yīng)可分為：連續(xù)系統(tǒng)與不連續(xù)系統(tǒng)，其中 不連續(xù)系統(tǒng)因具有濃縮效應(yīng)，分離條帶清晰度及分辨率較佳應(yīng)用更為廣泛，本次試驗(yàn)應(yīng)用的為不連續(xù)系統(tǒng)。 ? 三大效應(yīng) 濃縮效應(yīng)： 濃縮膠的濃度小于分離膠的濃度，因凝膠孔徑的不連續(xù)使樣品遷移受阻而壓縮成很窄的區(qū)域，從而 提高分離效果 。緩沖液離子成分、 PH的不連續(xù)性也能造成濃縮效應(yīng)：電極緩沖液通常為 Tris甘氨酸緩沖液，樣品及凝膠（濃縮膠）中緩沖液為 TrisHCL緩沖液。電極緩沖液的pH=，甘氨酸的電離小，有效遷移率小，稱為慢離子；濃縮膠中的氯離子完全電離，有效遷移率大，稱為快離子； 蛋白質(zhì)在濃縮膠中介于二者之間 。電泳開(kāi)始后，氯離子跑得最快，留下一段低電導(dǎo)區(qū)，產(chǎn)生高電位梯度（電位與電導(dǎo)率成反比），使甘氨酸離子追趕氯離子，蛋白質(zhì)夾在中間而被壓縮。1cm厚樣品層可以壓縮 。 分子篩效應(yīng)： 分子量或分子大小和形狀不同的蛋白質(zhì)通過(guò)一定孔徑分離膠時(shí)，受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率，這就是分子篩效應(yīng)。當(dāng)樣品進(jìn)入分離膠，凝膠孔徑變小， 分子量小，阻力小，移動(dòng)快；分子量大，阻力大，移動(dòng)慢。 電荷效應(yīng)： 電荷量不同，遷移率不同。 電荷越多遷移越快 不連續(xù)系統(tǒng) 成分 pH值 孔徑 電泳緩沖液 甘氨酸 (慢離子 ) 樣品 蛋白質(zhì) 濃縮膠 Cl(快離子 ) 大 分離膠 Cl(快離子 ) 小 有效遷移率 = 遷移率 ? 解離度 氯離子 蛋白質(zhì)陰離子 甘氨酸陰離子 垂直板電泳的優(yōu)點(diǎn)： 1. 表面積大而薄，便
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