sds-聚丙烯酰胺凝膠(編輯修改稿)
2025-06-03 18:13 本頁面
【文章內容簡介】 關系。 ? （二）緩沖系統(tǒng)的選擇 ? 一般情況下，在被分析的蛋白質穩(wěn)定的 pH范圍， ? 凡不與 SDS發(fā)生相互作用的緩沖液都可以使用，但 ? 緩沖液的選擇對蛋白質的分離和電泳的速度是非常 ? 關鍵的。 電泳緩沖液的種類： ： 比磷酸緩沖系統(tǒng)的導電性低，電泳速度比后者快一倍 . ： 適用分子量低于 15KD的蛋白樣品 . ： 使用最多的緩沖液 ： 測定糖蛋白的分子量 ? （三）凝膠濃度的選擇 ? 由于 SDS電泳分離并不取決于蛋白質的電荷密度， ? 只取決于分子解聚后 SDS蛋白質膠束的大小，因此 ? 凝膠濃度的選擇會直接影響分辨率。 ? *不同分子量范圍的蛋白質應選用不同的凝膠濃度 . （四）分子量測定 （ relative mobility ， Rf） Rf即用每個帶的遷移距離除以溴酚藍前沿的遷移距離得到的。 測量位置應在蛋白帶的中央。 蛋白帶遷移距離 R f= ———————— 溴酚藍遷移距離 ? ? 以已知蛋白質分子量的常用對數(shù)值為縱坐標， ? Rf為橫坐標繪圖 Rf值，便可在標準曲線上 ? 讀出他的分子量 * — . ? b. SDS凝膠電泳法測定分子量，每次測定樣品必須同時做 ? 標準曲線，而不得利用另一次電泳的標準曲線。 ? 三 .去污劑的選擇 無離子去污劑： Lubro W； Brij35， Tween Triton 陽離子去污劑： cetyltrimethyl ammonium bromide （ CTAB） cetylpyyridinium （ CPC） 陰離子去污劑 ： SDS deoxycholate 四 .方法 (1)根據對樣品的處理方式的不同 還原 SDS電泳 非還原 SDS電泳 帶有烷基化作用的還原 SDS電泳 ? （ 2）根據緩沖系統(tǒng)和凝膠孔徑的不同 連續(xù)電泳 不連續(xù)電泳 （ 3）根據電泳的形式 圓盤電泳 垂直電泳 平板電泳 水平電泳 ? 連續(xù)系統(tǒng)： ? 電泳體系中緩沖液 pH值及凝膠濃
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