sds-聚丙烯酰胺凝膠(存儲(chǔ)版)
【正文】 ? ? : ? 由丙烯酰胺單體 (Acr)和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺 (Bis) ? 在催化劑過硫酸銨 (AP) 或核黃素 ,以及加速劑四甲基乙 ? 二胺 (TEMED)作用下聚合交聯(lián)而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)凝 ? 膠 . ? 形成的凝膠具有穩(wěn)定的親水性 ,無電離基團(tuán) ,不帶電荷 , ? 幾乎無吸附和電滲作用 .凝膠孔徑可控制 . ? *凝膠機(jī)械性能和孔徑大小 : ? 由總濃度 T% 控制 . ? 即 100ml凝膠溶液中含有 Acr、 Bis的總克數(shù) . ? T%越大 ,平均孔徑越小 ,機(jī)械強(qiáng)度大 . ? 交聯(lián)度 C%: ? Acr和 Bis的比例 . ? 即交聯(lián)劑 Bis占單體 Acr與 Bis總量的百分?jǐn)?shù) . ? * 分子量范圍 適用的凝膠濃度 (%) 蛋 白 質(zhì) ?104 2030 14 104 1520 15 1041 105 1015 1 105 510 ?5 105 25 核酸 ?104 15–20 104–105 510 1052 106 ? : ? 十二烷基磺硫酸鈉 (sodium dodecyl sulfate,SDS) ? 陰離子去污劑在水溶液中以單體（ monomer）和分 ? 子團(tuán)（ micellae）的混合形式存在 . ? 破壞蛋白質(zhì)分子之間以及其他物質(zhì)分子之間的非 ? 共價(jià)鍵，使蛋白質(zhì)變性 (denature)而改變?cè)械臉?gòu)象， ? 保證蛋白質(zhì)分子與 SDS充分結(jié)合而形成帶負(fù)電荷的蛋 ? 白質(zhì) SDS復(fù)合物。 ? （二）緩沖系統(tǒng)的選擇 ? 一般情況下，在被分析的蛋白質(zhì)穩(wěn)定的 pH范圍， ? 凡不與 SDS發(fā)生相互作用的緩沖液都可以使用，但 ? 緩沖液的選擇對(duì)蛋白質(zhì)的分離和電泳的速度是非常 ? 關(guān)鍵的。 (5) 固定 (6) 染色 考馬斯亮藍(lán)（ coomassie brilliant blue） ① R250 三苯基甲烷，紅藍(lán)色，每個(gè)分子含有兩個(gè) SO3H基團(tuán)，偏酸性，和氨基黑一樣也是結(jié)合在蛋白質(zhì)的堿性基團(tuán)上 。 ? 步驟 : ? :蛋白質(zhì)行 SDSPAGE電泳并從聚丙烯酰胺凝
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