過氧化物酶(pod)同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳(存儲版)
【正文】 畢后,小心取出梳子,兩拇指和食指捏住梳子的柄,其余三指頂住制膠框兩側,勻速地拔出梳子,然后向電泳槽中倒入預冷的電極緩沖液（原液要稀釋10倍）,緩沖液要沒過低板。同時，清洗玻璃板不容許用強酸、強堿以及酒精溶液，一般用清水加一點洗滌劑進行清洗，然后用去離子水或蒸餾水潤洗。、膠皮、電泳槽。取適量(2g)的馬鈴薯于研缽中,加1mL的PBS(磷酸緩沖液,),于冰上研磨至勻漿狀,在臺式離心機中以8000rpm離心5min，取上清,即為粗酶提取液,其中含有所需的POD。四、實驗步驟：（教師演示，學生安裝）注意事項：在整個過程中要輕拿輕放，以免將玻璃板弄碎。在植物生長發(fā)育過程中它的活性不斷發(fā)生變化，測定這種酶的活性或其同工酶，可以反映某一時期植物體內(nèi)代謝的變化。當酶蛋白和慢離子都進入分離膠后，甘氨酸解離度劇增，遷移率迅速加大，從而趕上并超過所有酶蛋白分子?！?％的甘氨酸（pI = ）遷移率最低，跑在最后邊，成為慢離子（尾隨離子）。這種效應與凝膠過濾過程中的情況不同。分離膠又分為均一膠和梯度膠。 1104～4104表1 凝 膠 濃 度 選 用 表物網(wǎng)狀結構還能限制蛋白質(zhì)等樣品的擴散運動，使凝膠具有良好的抗對流作用。,N39。聚丙烯酰胺凝膠聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為載體的一種區(qū)帶電泳。這些特點，使得聚丙烯酰胺凝膠適合作區(qū)帶電泳的支持介質(zhì)。并選用一定pH的緩沖液。了解過氧化物酶同工酶電泳過程。帶電離子在電場中的泳動速度（1）和遷移率（泳動度）（2）V=E另外，遷移率還受電滲現(xiàn)象的影響。同時可使被分離的帶電離子對電流貢獻最大從而加快電泳速度。Methylena Bisacrylamide，簡寫為Bis）在催化劑的作用下聚合而成的。冷卻可使聚合速度變慢；一些金屬抑制聚合；分子氧阻止鏈的延長，防礙聚合作用。每100mL凝膠溶液中含有的單體（Acr）和交聯(lián)劑（Bis）總克數(shù)稱為凝膠濃度，用T％表示。 質(zhì)分 子 量 范 圍適用的凝膠濃度(%)蛋 白 質(zhì) ＞5105 2～5核 104～105 5～10上層為大孔徑的濃縮膠，下層為小孔徑的分離膠。（3）在電場中形成不連續(xù)的電位梯度。使得在該界面處的待分離酶蛋白區(qū)帶變窄，濃度升高。由于快離子快速向前移動，在其原來停留的那部分地區(qū)成了低離子濃度區(qū)，即低電導區(qū)。與連續(xù)系統(tǒng)相比，不連續(xù)系統(tǒng)的分辨率大大提高，因此已成為目前廣泛使用的分離分析手段。同工酶染色：根據(jù)酶的生物化學反應，通過染色方法顯示出酶的不同區(qū)帶。(%)濃縮膠配方(%): TrisHCl溶液: mL 濃縮膠PAG溶液: 40%蔗糖溶液:
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