乙肝病毒cccdna檢測(編輯修改稿)
2025-02-01 23:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 copy Hepatology 1996。23:405413 血清 HBV rcDNA超過 108copy/ml， 進行熒光 PCR可能會出現(xiàn)檢測結(jié)果假陽性 “選擇性 ” PCR：并非萬無一失 與定性法比較增加了一個熒光探針 ， 探針位于擴增片段區(qū) （ 負鏈缺口下游 ） ， 與 cccDNA的負鏈互補 。 選擇性實時熒光定量 PCR檢測 cccDNA rcDNA不能被擴增 無熒光信號 EcoR I 5‘ + P1 P2 3200(1) 5‘ 3‘ 1590 3‘ 1820 P1 1820 1590 + 3200（ 1） EcoR I P2 cccDNA能被擴增 檢測到熒光信號 選擇性實時熒光定量 PCR檢測 cccDNA 實時熒光定量 PCR的原理 實時熒光定量 PCR的原理 實時熒光定量 PCR的原理 ? 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 YCt= ? 相關(guān)指數(shù)： R2= ? 靈敏度至少可以達到 103copy/ml 結(jié)果 ： 選擇性實時熒光定量 PCR檢測 cccDNA 同樣存在 PCR產(chǎn)物自身退火引起的 rcDNA 非特異性擴增的問題 由于靈敏度較普通 PCR高 ， 假陽性率比普 通 PCR更高 缺陷： 選擇性實時熒光定量 PCR檢測 cccDNA 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品 107copy/ml 108copy/ml攜帶者血清 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品 105copy/ml 105~107copy/ml攜帶者血清 選擇性實時熒光定量 PCR檢測 cccDNA 解決方案 ? 特異性抽提分離 cccDNA與其它形式的病毒 DNA 采用沉淀法或質(zhì)粒抽提試劑盒抽提法 ? 酶切純化 cccDNA 采用綠豆核酸酶或 ATP依賴的 p
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1