【精品文檔】端粒和端粒酶(編輯修改稿)
2025-01-04 06:46 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 重組無(wú)力解釋的 . Elizabeth Blackburn 和 Carol Greider 的實(shí)驗(yàn) 四膜蟲在接合細(xì)胞的大核發(fā)育過(guò)程中 ,大核產(chǎn)生了非常豐富的小染色體 ,每一個(gè)小染色體都在末端加上了端粒 ,可以推測(cè) :如果 “酶 ” 的假說(shuō)成立 ,此時(shí)細(xì)胞內(nèi)的酶活性應(yīng)該是非常高的 . 用四膜蟲的核抽提液與體外的端粒 DNA進(jìn)行溫育 ,試圖在體外檢測(cè)到這個(gè)酶的活性 ,看到端粒的延伸 . Elizabeth Blackburn 和 Carol Greider 的實(shí)驗(yàn) 經(jīng)過(guò)不斷優(yōu)化條件 ,尤其是把底物換成體外合成的高濃度的端粒 DNA后 ,Carol通過(guò)曝光 x光片 ,清楚地看到了“酶 ” 的活性 :在測(cè)序膠的同位素曝光片上 ,端粒底物明顯被重新加上了 DNA堿基 ,而且每六個(gè)堿基形成一條很深的帶 ,與四膜蟲端粒重復(fù)基本單位為六個(gè)堿基正好吻合 . Elizabeth Blackburn 和 Carol Greider 的實(shí)驗(yàn) 這種酶活性不依賴于 DNA模板 ,只對(duì)四膜蟲和酵母的端粒 DNA進(jìn)行延伸 ,而對(duì)隨即序列的 DNA底物不延伸 。并且該活性不依賴于 DNA聚合酶 . 而同源重組對(duì)序列沒(méi)有特異性要求 ,并且依賴于 DNA聚合酶的活性 . 至此 ,她們澄清了這兩種假說(shuō) ,證明了有一種酶來(lái)延伸端粒 DNA,即端粒酶 (telomerase) Elizabeth Blackburn 和 Carol Greider 的實(shí)驗(yàn) Nobel Prize in Medicine Awarded for Creaking DNA Puzzle 端粒酶亞基 Liz實(shí)驗(yàn)室與 Tom Cech合作 ,對(duì)端粒酶活性進(jìn)一步定性 . 用 RNA酶處理樣品 ,降解樣品的 RNA→ 酶活性消失 用蛋白酶消化 → 酶活性消失 RNA亞基有一段 RNA序列正好和四膜蟲的端粒 DNA序列互補(bǔ) ,端粒酶正式利用 RNA亞基的這段序列作為模板重復(fù)復(fù)制出端粒 DNA 端粒酶 RNA亞基的發(fā)現(xiàn)
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