固定化酶和細(xì)胞ppt課件(編輯修改稿)
2025-01-04 03:49 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 el (lattic) entrapment） 又稱凝膠包埋法 凝膠 包埋條件 酶活性 強度 天然凝膠 瓊脂、海藻酸鈣、角叉菜膠、明膠 溫和 不變 差 合成凝膠 聚丙烯酰胺、光交聯(lián)樹脂 聚合反應(yīng) 部分失活 高 使用的多孔載體及其特點 海藻酸鈣凝膠包埋法： 滴至 海藻酸鈉溶液＋ E (or cell) CaCl2 溶液中 IE(or IC) 角叉菜膠包埋法： 滴至 角叉菜膠＋ E (or cell) KCl 溶液中 IE (or IC) 聚丙烯酰胺凝膠包埋法： AP Acr+ Bis+E (or cell) IE (or IC) TEMED 2）微囊型包埋法 （ microencapsulation） 又稱半透膜包埋法 將一定量酶液包在半透性的高分子微孔膜內(nèi) 。半透膜：直徑幾十微米到幾百微米，厚約 25nm。 半透膜孔徑 酶分子孔徑，小于半透膜孔徑的小分子底物和產(chǎn)物可以自由進出，被稱為 “ 人工細(xì)胞 ” 。 與網(wǎng)格型包埋法相比，微囊型包埋法的優(yōu)點 ： 1）固定化酶顆粒小，有利于底物和產(chǎn)物擴散。 2）半透膜能阻止蛋白質(zhì)分子滲漏和進入，注入體內(nèi)既可避免引起免疫過敏反應(yīng)，也可使酶免遭蛋白水解酶的降解，具有較大的醫(yī)學(xué)價值。 缺點： 反應(yīng)條件要求高 ,制備成本也較高 。 包埋法是目前應(yīng)用最多的一種較理想的方法，與其它固定化方法相比： ?優(yōu)點： 不與酶蛋白氨基酸殘基反應(yīng)，很少改變酶的高級結(jié)構(gòu)，酶活回收率高。 ?缺點： 只適合作用于小分子底物和產(chǎn)物的酶。 吸附法 結(jié)合法 交聯(lián)法 包埋法 酶的四種固定化方法 固定化方法 吸附法 包埋法 結(jié)合法 交聯(lián)法 制備難易 易 較難 難 較難 結(jié)合程度 弱 強 強 強 活力回收 高，酶易流失 高 低 中等 再生 可能 不能 不能 不能 費用 低 低 高 中等 底物專一性 不變 不變 可變 可變 各種固定化方法的優(yōu)缺點比較 分類方式 固定化細(xì)胞 分類方式 固定化細(xì)胞 細(xì)胞類型 微生物 植物 動物 生理狀態(tài) 死細(xì)胞 :完整細(xì)胞 ,細(xì)胞碎片 , 細(xì)胞器 活細(xì)胞 :增殖細(xì)胞 ,靜止細(xì)胞 , 饑餓細(xì)胞 （二）細(xì)胞的固定化方法 1) 直接固定法 不使用載體，借助物理（如加熱、冰凍）、化學(xué)方法（如檸檬酸、各種絮凝劑）將細(xì)胞直接固定。 一般只用于單酶或少數(shù)幾種酶催化的反應(yīng)。 2)吸附法 3)包埋法 2. 固定化方法 例如：葡萄糖異構(gòu)酶 (白色鏈霉菌 )，是一種胞內(nèi)酶。在 5080℃ 加熱 10分鐘，使菌體自溶作用的酶失活，而葡萄糖異構(gòu)酶仍然保持活性，長期使用酶活力不減少。 實驗： %左右的卡拉膠 ， 70 ℃ 溶解 , 再冷卻到 42℃ , +10%左右的細(xì)菌菌體 (預(yù)熱到 42℃ ） 迅速混合均勻 4 ℃ 冰箱放置大約 30min 取出后切成 3 3mm的小顆粒 一般采用網(wǎng)格包埋法（即凝膠包埋法）。常用凝膠：瓊脂凝膠，海藻酸鈣凝膠，角叉菜膠和光交聯(lián)樹脂。 注意：一般要加滲透壓穩(wěn)定劑，以防止原生質(zhì)體破裂。 （三）原生質(zhì)體的固定化方法 第二節(jié) 固定化酶和固定化細(xì)胞 的性質(zhì)與表征 一、固定化酶的性質(zhì) 影響酶催化活性的因素 1. 構(gòu)象改變或立體屏蔽以及微擾 2. 分配效應(yīng)和擴散限制
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