實驗一蘇云金芽孢桿菌icp基因的檢測(編輯修改稿)
2025-06-20 01:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ,雙雙混合感染限制性宿主進行互補實驗，全部 rII突變型可以區(qū)分為 rIIA和 rIIB兩個互補群，同屬于 rIIA或 rIIB的兩個突變型在混合感染中沒有互補作用，任何一個 rIIA突變型和任何一個 rIIB突變型在混合感染中都有互補作用，使表型恢復正常。一系列 rIIA突變型在染色體上所占的區(qū)域稱為順反子 A，一系列 rIIB突變型在染色體上所占的區(qū)域稱為順反子 B，由于 rII突變型均為點突變，故實驗中必須要有檢測回復突變的對照。 三、實驗材料和用具 ? 菌種： C(受納性寄主 )和 K（限制性菌株）過夜培養(yǎng)物 ? T4 rII突變型 26， 28， 29：點樣濃度為1x108/ml,倒平板濃度為 1x109/ml ? HA平板 9塊（效價測定用 5塊） ? HSA試管 3mL x 9只 ? 20?l、 200?l移液器各一支， Tip ? 48 oC水浴 四．實驗方法和內(nèi)容 （一）噬菌體 T4裂解液的制備 ? 1．雙層平板法制備裂解液 ? （ 1）將 C接種 3mL HB中， 37℃ 震蕩培養(yǎng) 5— 6小時。 ? （ 2）制備 HA平板，待凝固后置 50℃ 烘 30分鐘備用。 ? （ 3）取小試管一只，加 ，加 105～106的 T4儲存液，再加入 3mL 50℃ 左右的 HSA（軟瓊脂培養(yǎng)基），混合均勻后倒在 HA平板上層，凝固后 37℃ 培養(yǎng)過夜。 ? （ 4）用涂棒 將 HA平板上層軟瓊脂刮入離心管，加入 3mL HB，靜置 30分鐘，加
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