牛奶中酪蛋白的分離與鑒定(編輯修改稿)
2025-06-14 00:56 本頁面
【文章內容簡介】 提取酪蛋白的方法 ? 掌握一種檢測牛乳質量的方法 二 實驗原理 ? 酪蛋白是乳蛋白質中最豐富的一類蛋白質，占乳蛋白的 80%~82%，酪蛋白不是單一的蛋白質，是一類含磷的復合蛋白質混合物，以一磷酸酯鍵與蘇氨酸及絲氨酸的羥基相結合。它還含有胱氨酸和蛋氨酸這兩種含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量約為 35g/L，比較穩(wěn)定，利用這一性質可以檢測牛乳中是否摻假。 ? 酪蛋白在其等電點時由于靜電和為零，同種電荷間的排斥作用消失，溶解度很低，利用這一性質，將牛乳調到 ，酪蛋白就可從牛乳中分離出來。酪蛋白不溶于乙醇，這個性質被用來從酪蛋白粗制劑中將脂類雜志除去。 三 儀器、原料和試劑 ? 儀器：溫度計、布氏漏斗、 pH試紙、抽濾瓶、水浴鍋、燒杯、 量筒、表面皿、天平、離心機等 ? 原料：市售全脂牛奶 ? 試劑 ：無水乙醇、無水乙醚 乙醇、乙醚混合液：乙醇 :乙醚 =1:1（體積比） 四 實驗步驟 ? 酪蛋白等電點沉淀 將 100mL牛乳放到 500mL燒杯中，加熱到 40℃ ，加入到同樣 40℃的乙酸鈉緩沖液中，調 pH達 。此時有絮狀的蛋白質沉淀析出。將懸浮液冷卻至室溫，室溫放置分層 ， 3000r/min離心 15min，收集沉淀。 ? 水洗 將 醋酸鈉緩沖溶液用蒸餾水稀釋 10倍，洗滌粗制品三次，分別離心 10分鐘，得到沉淀蛋白。 ? 去脂 將粗制品中加入 10ml無水乙醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉移至布氏漏斗中，用乙醚 乙醇混合液洗滌沉淀兩次，最后用乙醚洗沉淀 2次，抽干。將沉淀從布氏漏斗中移去，在表面皿上攤開以除去乙醚，干燥 后得到的是酪蛋白純品。準確稱重后，計算出每 100mL牛乳所制備出的酪蛋白質量（ g/100mL），并與理論產量（ ）相比較，求出實際獲得百分率。 五 思考題 ?用乙醇、乙醇 乙醚和乙醚洗滌蛋白質的順序是否可以變換？為什么？ ?試設計一個利用蛋白質其他性質提取蛋白質的實驗 六 離心機的使用及注意事項 ? 離心機的工作原理 ：在離心力場的作用下，可加速懸浮液中固體顆粒沉降或漂浮的速度，從而將不同的物質分離。它是生化實驗中提取、 分離、純化的常用設備，操作的關鍵環(huán)節(jié)是平衡。 ? 注意事項 、外套管應完整不漏，洗凈離心管； 2/3； （含內、外套管）放在臺秤上平衡； ，將平衡好的離心管對稱的放在離心機中； ，打開電源開關，設置轉速與時間，開始離心。注意一定不能超過離心機的最大離心速度！離心結束后，待離心機停止運轉 后，再打開機蓋，取出離心管，不許用手強行使離心機停止轉 6．用完后，將內外套管洗凈，倒立
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