【文章內(nèi)容簡介】 總是皺縮，也可能是切片角度不對，慢慢調(diào)試，一旦有最佳磨刀角度和切片角度后不要隨意改變。 ⑦ 切片厚薄不勻或空片，可能是刀未固定緊或蠟塊未夾緊，也可能是切片機(jī)有問題。 ⑧ 烤片時間與溫度有關(guān)，一般時間寧長勿短，否則會造成脫片。 62℃ 6h 以上，90℃ 15min 以上。 ⑨ 連續(xù)切片放入熱水漂片時，不要撈取第一、二張蠟片，因?yàn)榍?2張蠟片厚、組織有空洞（鏡下可見）。 ⑩ 如遇硬脂酸石蠟處理的蠟 塊時，切的蠟片不能直接入熱水漂片，否則蠟片會散碎而應(yīng)先入冷水，然后再慢慢加熱水。為了不影響切片、特殊染色及免疫組化的效果，目前，不用硬脂酸石蠟來代替二甲苯、石蠟。 （七） HE 染色 1 原理 HE 染色也稱蘇木精 伊紅染色，它是常規(guī)染色。 蘇木精是一種天然染料，它本身并不能染色，在經(jīng)氧化后變成蘇木紅才是真正的染料，蘇木對細(xì)胞核的親和力并不強(qiáng)，而在媒染劑的幫助下才能較好顯示細(xì)胞核，此時細(xì)胞核呈紅色，只有在堿性環(huán)境中，蘇木才變成藍(lán)色。 伊紅 Y 是人工全盛染料，它可能是通過滲透或彌散作用完成染色的，因此和組織萬分結(jié)合是不 牢固的。它對細(xì)胞質(zhì)著色。 2 染色程序 ① 脫蠟 a. 二甲苯Ⅰ 5~10min b. 二四苯Ⅱ 5~10min c. 100%乙醇 1~2min d. 95%乙醇 1~2min 11 e. 自來水洗 ② 染色 a. 蘇木精浸染 5min b. 自來水洗 c. 1％鹽酸乙醇分化數(shù)秒 d. 自來水洗 e. 藍(lán)化（ 50℃左右溫水）數(shù)分鐘 f. 伊紅浸染數(shù)秒 g. 自來水洗 ③ 脫水、透明、封片 a. 95％乙醇 1min b. 100%乙醇Ⅰ 1min c. 100%乙醇Ⅱ 1min d. 100%乙醇Ⅲ 1min e. 二甲苯 石碳酸液（ 3： 1） 1min f. 二甲苯Ⅰ 1min g. 二甲苯Ⅱ 1min h. 滴中性樹膠，蓋蓋玻片 3 注意事項(xiàng) ① 二甲苯脫蠟時間冬季長些 ，夏季可短些，為防止脫蠟不凈影響染色，脫蠟時間寧長勿短。 ② 鹽酸乙相離分化時間靈活掌握，可以在切片藍(lán)化后鏡下觀察。 ③ 染色后的脫水透明也很重要，若脫水不完全，切會會模糊不清，脫水的乙醇要保持純度，切片在進(jìn)入脫水乙醇前盡量把水多去掉。 ④ 若用 Harris 蘇木精液時，染色前要先用一張紙把液體表面的結(jié)晶撈去，否則會污染切片。 ⑤ 在脫水透明時，二甲苯一石碳酸的作用利于透明，此步故也可省去。 ⑥ HE 染色雖是常規(guī)染色，但是要制出一張完美的 HE 切片并不是易事，如兩種顏色的深淺對比、與染液的濃度、染液的新舊、染色時間有關(guān)，需每位操作 者靈活運(yùn)用。 4 染色液的配制 ① Gill改良蘇木精液 蘇木精 2g，無水乙醇 250ml，硫酸鋁 ，蒸餾水 750ml，碘酸鈉 ，冰醋酸20ml。先將蘇木精溶于無水乙醇，硫酸鋁溶于蒸餾水，再將兩液混合后加碘酸納，最后加入冰醋酸。此配方為半氧化蘇木精液，碘酸納為氧化劑，硫酸鋁為媒染劑，此液不會產(chǎn)生沉淀并很少有氧化膜。 ② 沉淀酸化伊紅丫乙醇液 伊紅丫 20g，蒸餾水 500ml，濃鹽酸 10ml。將伊紅與蒸餾水混合溶解后加入濃鹽酸，攪拌，過夜。過濾、濾液不要，用蒸餾水多次沖洗濾紙中的沉淀，然后將沉淀物連同濾紙一 起入溫箱中干燥，用 95％乙醇 1000ml配成飽和液。使用前取飽和液 1份， 95％乙醇 2~3份，配成染色液。在用此液染色前最好將切片先在 95％乙醇中過一下，以保護(hù)染色液。 ③ 鹽酸乙醇分化液 \ 70％乙醇 99ml加濃鹽酸 1ml。 八、 快速石蠟切片操作 12 （一） 應(yīng)用范圍 （ 1） 替代冷凍切片，在沒有條件制作冷凍切片的單位，用作術(shù)中診斷； （ 2） 快速診斷：適用于門診外地患者， 1 天可取報(bào)告。 （二） 切片制作 （ 1） 將送檢的各類組織按 《規(guī)范》（一） 編號登記、眼觀、描述記錄后，用大頭針和羊皮紙包好，投入配制好的固定液燒杯內(nèi) 5~10min(固定液配制： 95％乙醉 85ml，甲醛 10ml，冰醋酸 5ml)；若組織較厚，可在預(yù)固定后修薄，重復(fù)固定； （ 2） 無水乙醇、丙酮脫水 3~5min； （ 3） 浸蠟 5min； （ 4） 常規(guī)石蠟包埋，或封固于預(yù)制好的蠟塊內(nèi)； （ 5） 常規(guī) HE 加溫染色。 （三） 注意事項(xiàng) （ 1） 制作快速石蠟切片全過程過程均加溫在 65~72℃范圍內(nèi)操作，可用快速組織處理儀、或在恒溫水浴鍋或恒溫箱內(nèi)完成； （ 2） 替代冷凍切片可隨到即做，一般在 30min 內(nèi)完成；若成批操作，則可根據(jù)標(biāo)本的數(shù)量多少，酌情延長時間； （ 3） 制作快速石蠟切片，操作人員必須經(jīng)過一段時間的訓(xùn)練和摸索，在取得一定經(jīng)驗(yàn)、技術(shù)較熟練能保證切片質(zhì)量后， 方可受理對外服務(wù)，以把好質(zhì)量關(guān)。 九、 冷凍切片操作 冷凍切片的方法是一種最省時最快速的制片方法。因此主要用于臨床手術(shù)中的病理診斷上。其原理很簡單：冷凍使組織變硬，以代替石蠟做浸蠟。組織中的水分起著浸蠟的作用，用 OCT 做包埋劑，將組織固定在冷凍頭上，在短時間內(nèi)凍好，可以立即在冷凍機(jī)上進(jìn)行切片，不需要經(jīng)過脫蠟，可隨時染色，節(jié)省了時間。另外，在冷凍切片的過程中，沒有一個步驟使組織接觸到任何有機(jī)溶劑或其他試劑能溶解或破壞組織中的脂肪、酶以及抗體。因此，冷凍切片也常用于：①顯示組織中的脂質(zhì)和中性脂肪；②顯示酶的活性；③神 經(jīng)組織的染色；④免疫熒光技術(shù)。 冷凍切片種類很多，以前有氯乙烷法、二氧化碳法、半導(dǎo)體冷凍法等。這些方法在使用過程中都存在著一定的難度和不方便，制做出的切片質(zhì)量也不好，直接影響到診斷。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以上方法已淘汰，現(xiàn)在使用的冷凍切片機(jī)（恒冷切片機(jī)），從根本上解決了不利于切片的難題。能更快、更方便地切出較好的切片，而且人為的缺陷也少。 冷凍切片目前最廣泛應(yīng)用于臨床手術(shù)中的病理診斷，手術(shù)醫(yī)生根據(jù)病理診斷結(jié)果決定手術(shù)范圍，因此做出一些高質(zhì)量的冷凍切片至關(guān)重要。 冷凍切片操作程序： 1. 冷凍切片機(jī)要始終處于運(yùn)行狀態(tài) ，即使在不做冷凍切片時也要開著致冷，不能時開時關(guān)，以免影響機(jī)器壽命。 2. 手術(shù)取下的新鮮組織不要固定，因固定過的組織不利于切片，而且還會影響染色。 3. 用 OCT 做包埋劑，起到支撐的作用。先將 OCT 標(biāo)在固定頭上再將組織放在OCT 上， OCT 不要太多，以免流到固定頭外，組織表面露在 OCT 外。 4. 外固定頭放在冷凍機(jī)內(nèi)的速冷臺上，在 25℃左右，凍 10min，視組織不同而時間略有差異，組織較大或脂肪組織時間可長一些，一般情況下 10min 左右即可。如果冷凍不足，則切片可呈粥糜狀或切不下來；如果冷凍過分，則切片呈碎悄狀或切片上呈條 痕狀，都得不到良好的切片。 13 5. 高速刀的角度，固定好，切片刀要快。 6. 把凍好的凍頭夾到切片機(jī)上，用精調(diào)修平組織，使其暴露最大切面，將微調(diào)刻度調(diào)在 5μ m，放下抗卷板開始切片，得到滿意切片后，打開抗卷板，將組織貼在載玻片上。載玻片要放平。動作要穩(wěn)，一次完成，這樣才能將切片完整的貼在載玻片上。 7. 切片晾干后用 95％乙醇固定 10s，水洗后進(jìn)行常規(guī)染色。 8. 冷凍切片完成后取下凍頭組織，固定后做常規(guī)切片。將冷凍機(jī)內(nèi)的組織碎屑清掃干凈，定期打開紫外線消毒。 第三章 病理解剖及尸檢規(guī)范【規(guī)范（三）】 （一） 病理解剖的方法和記錄 1．肉眼 觀察與記錄 正確的肉眼觀察（識別）和描述送檢標(biāo)本的形態(tài)是確立病理診斷的重要環(huán)節(jié)之一，病理醫(yī)師必須參加此項(xiàng)工作。觀察標(biāo)本首先要借助解剖學(xué)知識判定是何器官或組織，然后再根據(jù)該器官或組織的形態(tài)特點(diǎn)依序觀察。一般要注意標(biāo)本的大?。ㄒ?mm、 cm 記錄，有時可用擬物化比較，如花生米大、鴿蛋大）、形狀、表面和切面的顏色、質(zhì)地以及病變部位、形態(tài)特點(diǎn)和病變與周圍組織的關(guān)系。描述應(yīng)先描述主要病變，后描述次要病變?，F(xiàn)將常見器官組織的觀察與描述舉例如下： （ 1） 胃、腸及肝、膽 ① 胃粘膜活檢 標(biāo)本的塊數(shù)及體積大??；標(biāo)本的色澤、質(zhì)地以及有無水腫 、壞死；如同時送檢不同部位的幾件標(biāo)本，應(yīng)分別編寫小序號。 ② 胃潰瘍 沿大彎剪開標(biāo)本，如病變在大彎，則沿小彎剪開；識別并記錄切除標(biāo)本的手術(shù)類型，大彎及小彎的長度以及十二指腸長度、直徑或周徑；觀察潰瘍的數(shù)目、位置、大小、外形以及其邊緣粘膜皺襞是否集中，切面潰瘍深度，潰瘍底部有無瘢痕，潰瘍邊緣的粘膜肌層和肌層是否粘合以及漿膜情況；如影像學(xué)診斷為胃潰瘍，但肉眼檢查未發(fā)現(xiàn)潰瘍，應(yīng)與外科聯(lián)系了解是否為潰瘍曠置術(shù)；非潰瘍區(qū)，尤其是邊緣粘膜形態(tài)，有無萎縮、肥大、水腫、糜爛和出血。 ③ 胃癌 記錄切除標(biāo)本手術(shù)類型，大小彎長度及十二 指腸長度直徑或周徑；沿大彎剪開標(biāo)本，解剖胃區(qū)淋巴結(jié)并移開大網(wǎng)膜，如同時行脾切除，應(yīng)測量脾大小并解剖脾門淋巴結(jié)；觀察腫瘤的位置、大小、外形及邊緣粘膜形態(tài)，切面浸潤深度、漿膜及大網(wǎng)膜有無累及，十二指腸、食管是否累及，兩端切緣與腫瘤的距離，有無累及鄰近器官；非腫瘤區(qū)粘膜形態(tài)，有無糜爛、潰瘍、疣狀突起、息肉等病變。 （ 2） 結(jié)腸 ① 非腫瘤性病變 識別并記錄切除標(biāo)本的解剖部位，腸管長度，擴(kuò)張和狹窄腸管的直徑及腸系膜體積；腸粘膜的病變、范圍，有無潰瘍、潰瘍形態(tài)及其深度，有無息肉樣增生、出血；腸壁有無局限性或彌漫性增厚、萎縮，有無 纖維化、壞死、穿孔及瘺管；漿膜有無纖維素性滲出、膿苔及與腸系膜等粘連及可疑結(jié)節(jié)狀病灶；憩室部位，數(shù)量、大小、與結(jié)腸帶的部位關(guān)系，內(nèi)容物及其性狀，有無炎癥、出血或穿孔。 ② 息肉及腺瘤 息肉或腺瘤的部位及數(shù)目；息肉或腺瘤的體積，其頭部的直徑和蒂的長度（多個息肉或腺瘤，至少應(yīng)測量最大及最小者）；息肉或腺瘤有無蒂、潰瘍，表面形狀，切面有無囊腫及蒂基底部情況。 ③ 結(jié)腸癌 手術(shù)術(shù)式，切除標(biāo)本部位，腸管長度及腸系膜體積；觀察腫瘤大小、形態(tài)，浸潤腸管周徑及范圍，累及腸壁深度，漿膜有無浸潤、有無出血、壞死及衛(wèi)星結(jié)節(jié)或侵犯血管與鄰 近器官；分別測量不同部位腫瘤與每一切緣的距離；如結(jié)腸癌合并息 14 肉、潰瘍等其它病變時，應(yīng)根據(jù)病變的正面觀繪制草圖，并對每個病灶編號分別描述；記錄各組淋巴結(jié)數(shù)目，最大及最小淋巴結(jié)直徑及淋巴結(jié)眼觀有無累及等情況。 （ 3）肝及膽囊 ①肝切取活檢及肝腫瘤 分辨標(biāo)本切取類別與部位（肝小塊切除、部分切除、肝葉或半肝切除），測量標(biāo)本體積、重量；觀察表面有無炎性滲出、纖維粘連、不規(guī)則隆起或結(jié)節(jié)形成（結(jié)節(jié)大小、色澤），包膜有無緊張、皺縮、增厚，有無質(zhì)地堅(jiān)實(shí)或囊變區(qū)；觀察切面肝小葉結(jié)構(gòu)是否清晰，有無淤膽、膽管擴(kuò)張及結(jié)石，有無慢性淤 血（檳榔肝），有無結(jié)節(jié)性病變，如有，應(yīng)注意其大小、數(shù)目、色澤、質(zhì)地、境界、與周圍組織關(guān)系以及與肝切緣距離；有無膿腫，門靜脈與肝靜內(nèi)有無血栓或瘤栓。 ②膽囊切除標(biāo)本 測量膽囊長度與最大直徑；切開膽囊（沿膽囊縱軸自底至膽囊頸），觀察粘膜色澤、外形，有無增生、息肉；囊壁是否增厚，有無出血；漿膜有無纖維粘連或纖維素性滲出；有無膽汁，膽汁容積、色澤與性狀；有無結(jié)石，結(jié)石數(shù)目、形態(tài)、大小，切面色澤與外形，結(jié)石類型；如為腫瘤，應(yīng)注意其部位、離膽囊底及頸的距離、大小、形狀、漿膜是否累及。 （ 4）子宮頸、子宮體及卵巢 A、子 宮頸 ① 定位送檢標(biāo)本（如 3點(diǎn)、 6 點(diǎn)、 9 點(diǎn)、及 12 點(diǎn)）應(yīng)分別觀察描述其形態(tài)、大小、色澤。由于標(biāo)本小，一般不作剖面檢查。 ② 子宮頸切取體積較大標(biāo)本（如前唇或后唇）應(yīng)觀察有無粘膜上皮存在，粘膜上皮有無糜爛、潰瘍及不規(guī)則增厚或形成息肉；有無腫瘤和囊腫。 ③ 子宮頸錐形切除標(biāo)本 應(yīng)記錄標(biāo)本大?。òㄖ睆?、深度）、外形；觀察子宮頸外口、頸和及移行區(qū)的色澤、質(zhì)地、糜爛、撕裂、不規(guī)則增生、息肉、潰瘍、腫塊（大小、形狀、部位及浸潤深度）、囊腫及原做過活檢的部位。 ④ 子宮頸癌根治手術(shù)標(biāo)本 觀察子宮頸：粘膜上皮色澤，有無不規(guī)則增生、糜爛、撕裂、腫瘤大體類型、大小、部位以及浸潤深度，囊腫及曾做過活檢的部位；觀察子宮體：內(nèi)膜、肌壁、漿膜；如標(biāo)本帶有輸卵管和卵巢，應(yīng)觀察輸卵管長度及最大管徑、漿膜、管壁、管腔以及粘膜與傘端；卵巢大小、色澤、光滑度以及有無結(jié)節(jié)或囊腫，切面皮髓質(zhì)和卵巢門特征以及有無囊腫、黃體、鈣化和出血；子宮旁組織；淋巴結(jié)：數(shù)量、最大和最小淋巴結(jié)直徑。 B、子宮體 ① 刮宮活檢的子宮內(nèi)膜標(biāo)本 測量標(biāo)本總體積；觀察標(biāo)本色澤、質(zhì)地，血塊與標(biāo)本的比例以及有無壞死與絨毛（注意絨毛的形態(tài)，尤其要注意有無水泡狀胎塊樣絨毛），有無孕囊和大而堅(jiān)實(shí)的組織。 ② 子宮切除標(biāo)本 識別并記錄子宮切除術(shù)的類型：包括全切除子宮、子宮癌根治術(shù)；測量子宮大小，并從子宮頸經(jīng)兩側(cè)壁至子宮角剪開子宮或作 Y形剪開；觀察子宮外形、漿膜（有無粘連、凸起腫塊）、肌壁（有無增厚、結(jié)節(jié)及出血壞死）、子宮內(nèi)膜（有無增厚、息肉、囊腫、出血及壞死）及子宮頸（外口、移行區(qū)及頸管改變）；如有肌瘤，應(yīng)觀察肌瘤的數(shù)量、部位（內(nèi)膜下、肌壁間、漿膜下）、大小、有無蒂以及繼發(fā)病變（出血、壞死、鈣化）。 C、卵巢 ① 測量大小，觀察卵巢被膜有無增厚、粘連、破裂和出血；切面皮髓質(zhì)和卵巢門特征，有無囊腫（大小、內(nèi)容物）、黃 體、鈣化和出血。 ② 如有病變，應(yīng)描述病變大小、特征與卵巢門及殘留卵巢的關(guān)系。 ③