【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 基因異常表達(dá)與膠質(zhì)細(xì)胞活化的關(guān)系 。 4. 完成各種 NMS 相關(guān)問卷的準(zhǔn)備工作，并完成在社區(qū)人群和 PD隊(duì)列中環(huán)境因素分組與基因分型，了解 PD 患者各種 NMS 分布及其關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)基因、環(huán)境暴露、疾病進(jìn)展和藥物療效反應(yīng)的關(guān)系；完成建模體系。 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 抑制劑的治療作用；在 PD 模型中觀察中藥療效； 完善 iPS 細(xì)胞的誘導(dǎo)、增殖、向神經(jīng)干細(xì)胞分化、神經(jīng)干細(xì)胞分選和體外擴(kuò)增的方法體系 。 5. 按照 SFDA 放射性新藥申報(bào)要求完成 99mTcTrodat1 和[18F]AV133 的 各項(xiàng)試驗(yàn) ；明確GSK3α /β Ser21/9 磷酸化與 PD發(fā)生的關(guān)系及 GSK3β多肽抑制劑對(duì) PD 動(dòng)物的治療 作用；明確藥物在多種 PD 模型中的療效；確定藥物抗炎、抗氧化神經(jīng)保護(hù)機(jī)制；建立穩(wěn)定的 iPS 細(xì)胞的誘導(dǎo)、增殖、向神經(jīng)干細(xì)胞分化、神經(jīng)干細(xì)胞分選和體外擴(kuò)增的方法體系。 第 二 年 1. 進(jìn)一步收集 PD 家系，利用已建立的 PD 致病基因突變檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)對(duì)收集的家系進(jìn)行已知致病基因的突變篩查，鑒定新的與 PD相關(guān)的基因和基因突變；比較攜帶不同風(fēng)險(xiǎn)基因 PD 患者的臨床表型、疾病進(jìn)展和藥物療效反應(yīng)的影響；分析 PD 致病基因α Syn的磷酸化和硝基化以及 LRRK2 磷酸化對(duì)衰老過程中線粒體功能的影響。 2. 研究 HSP22 的作用機(jī)理；研究 vav在 DA 神經(jīng)元的表達(dá)和水平的差異對(duì)其易感性的影響； Omi、Parkin 和 PINK 對(duì)自噬的調(diào)控作用；鐵代謝相關(guān)蛋白在神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)異同；小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)其他膠質(zhì)細(xì)胞以及 DA 神經(jīng)元鐵代謝功能的影響。 3. 應(yīng)用 敲除鼠，研究 PD 時(shí)腦內(nèi)神經(jīng)再生的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制；應(yīng)用星形膠質(zhì)細(xì)胞 條1. 發(fā)現(xiàn) 1 個(gè)新的與 PD 相關(guān)的基因和基因突變；得出攜帶不同風(fēng)險(xiǎn)基因?qū)?PD 患者臨床表型、疾病進(jìn)展和藥物療效反應(yīng)的影響的相關(guān)數(shù)據(jù)；闡明 PD 致病基因編碼蛋白的修飾對(duì)線粒體功能影響的機(jī)制。 2. 獲得 HSP22 的作用機(jī)理；確定 vav在 DA 神經(jīng)元易感性中的可能的作用；獲得自噬相關(guān)的的表達(dá)載體以及建立 EFGPLC3 穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，和自噬調(diào)控蛋白EGFPHax1 、 EGFPBclxl 及EGFPBeclin1 的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株；明確 Omi、 Parkin 和 PINK 對(duì)損傷線粒體的自 噬清除與否以及其對(duì)自噬相關(guān)蛋白的影響；小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鐵的水平影響其活化與功能。 3. 闡明 質(zhì)細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)及其與 PD 的相關(guān)性；明確 PD 時(shí)黑質(zhì) 紋狀體 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 件敲除鼠，制備 MPTPPD 模型；分別應(yīng)用內(nèi)外源性神經(jīng)毒素MPTP/6OHDA/LPS 建立炎癥和氧化應(yīng)激 PD 動(dòng)物模型；研究星形膠質(zhì)細(xì)胞的 BDNF 等神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子合成分泌、 DA 能神經(jīng)元和 DA前體細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)、 p75Trk 介導(dǎo)途徑、及其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制 ； 檢測(cè) Bcl2 上游分子 PP2A 或JNK 對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞的活化的影響 。 4. 通過前瞻性研究，對(duì)社區(qū)老年人群進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分層，并對(duì)具有相關(guān)因素風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體進(jìn)行 NMS 相關(guān)隨訪并進(jìn)行大規(guī)?；蚨鄳B(tài)性研究，分析其遺傳特點(diǎn)；對(duì)建模后的動(dòng)物進(jìn)行病理標(biāo)記物與行為學(xué)觀察。 5. 顯像探針的臨床前藥理藥效學(xué)研究；建立新探針的生物評(píng)價(jià)方法與篩選方法；評(píng)價(jià) calpain 切割GSK3β這一事件在 PD 發(fā)生中的作用； 體外建立神經(jīng)元 膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系，觀察藥物對(duì)神經(jīng)元的營(yíng)養(yǎng)、對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞激活的作用 ；定向誘導(dǎo) iPS細(xì)胞定向分化為 DA 能神經(jīng)元。 系統(tǒng)中小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活和分布，及其激活與神經(jīng)元損傷的先后時(shí)間關(guān)系及相互作用；明確 PD 腦內(nèi)免疫異常和氧化應(yīng)激水平的改變；闡明活化星形膠質(zhì)細(xì)胞通過其釋放 BDNF等神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、激活 p75Trk途徑和下游細(xì)胞內(nèi)信號(hào)、發(fā)揮其DA 能神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)機(jī)制 ； 明確 PINK1 和 α Syn 對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞活化的信號(hào)通路 。 4. 明確 NMS 老年人群 中 ， NMS 與環(huán)境、遺傳交互作用的規(guī)律和特點(diǎn)；確定其在 PD 早期預(yù)警和早期診斷中的作用和意義；發(fā)現(xiàn)不同風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)的社區(qū)老年人群；建立不同年齡段動(dòng)物模型的病理組織庫。 5. 按照 SFDA 放射性新藥申報(bào)要求完成顯像探針的藥理藥效學(xué)研究；篩選所合成的新探針； . 明確 calpain 切割 GSK3β這一事件在 PD 發(fā)生中的作用并獲得 PD 治療短肽；闡明藥物的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制是否與抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活、放大星形膠質(zhì)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)作用有關(guān)，初步明確藥物作用的靶細(xì)胞類型；穩(wěn)定獲得 iPS細(xì)胞定向分化來的 DA 能神經(jīng)元。 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 三 年 1. 篩 選、隨訪追蹤社區(qū)人群中攜帶易感基因或暴露環(huán)境危險(xiǎn)因素的個(gè)體；進(jìn)一步收集 PD 家系，利用已建立的 PD 致病基因突變檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)對(duì)收集的家系進(jìn)行已知致病基因的突變篩查 并 鑒定；在不同年齡模型猴研究環(huán)境毒素（ MPTP、魚藤酮）對(duì) PD 致病基因及編碼蛋白表達(dá)以及化學(xué)修飾的影響，研究上述蛋白與環(huán)境毒素相互作用對(duì)線粒體功能的影響及其機(jī)制。 2. 研究 vav 在 DA 神經(jīng)元選擇性變性中的作用和機(jī)理；進(jìn)一步深入探討 Omi、 Parkin 和 PINK 調(diào)控的保護(hù)作用的信號(hào)通路；應(yīng)用細(xì)胞和動(dòng)物模型研究環(huán)境因素（農(nóng)藥及藥物）對(duì) Omi、 Parkin 和 PINK作用的影響；星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)神經(jīng)元鐵代謝的影響。 3. 繼續(xù)研究 敲除對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放 DSerine/ATP/Glu 等膠質(zhì)遞質(zhì)傳遞的影響及其與 PD 的相關(guān)性；應(yīng)用小膠質(zhì)細(xì)胞 敲除鼠，制備 MPTPPD 模型；分析調(diào)控 PHOX/MMP9 表達(dá)和功能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制；研究活化小膠質(zhì)細(xì)胞的 proNGF、 proBDNF 等神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子前體分子的合成分泌、誘導(dǎo) DA 能神經(jīng)元凋亡作用、p75sortilin 途徑、及其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制 ；通過 檢測(cè) LC3II 的水平，確定自噬水平與膠質(zhì)細(xì)胞活化的 關(guān)系 。 4. 對(duì)風(fēng)險(xiǎn)人群進(jìn)行進(jìn)一步隨訪；對(duì)建模動(dòng)物進(jìn)一步觀察；以不同齡動(dòng)物（食蟹猴和轉(zhuǎn)基因鼠）為模型，分析嗅球、腦干相關(guān)神經(jīng)核團(tuán)、腸道及心臟自主神經(jīng)中αSyn 等關(guān)鍵基因的改變，及其與NMS 的變化關(guān)系。 1. 初步完成對(duì)選定社區(qū)人群易感基因和環(huán)境危險(xiǎn)因素暴露的調(diào)查情況，掌握易感或高危人群；爭(zhēng)取發(fā)現(xiàn) 12個(gè)與 PD相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)基因或多態(tài)性；證明環(huán)境毒素如何在衰老基礎(chǔ)上加重 PD 致病基因編碼蛋白的修飾和對(duì)線粒體功能的影響與機(jī)制。 2. 力爭(zhēng)在 hsp22 研究中取得成果發(fā)表論文；發(fā)表可從信號(hào)通路角度闡述 Omi、 Parkin 和 PINK 的作用機(jī)制，明確激酶信號(hào)通路；闡述環(huán)境因素對(duì) PD 相關(guān)蛋白引起的多巴胺能神經(jīng)元的損傷的影響機(jī)制；星形膠質(zhì)細(xì)胞通過神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 BDNF 影響神經(jīng)元鐵代謝。 3. 闡明 質(zhì)釋放及其膠質(zhì)傳遞的調(diào)節(jié)在PD 發(fā)生發(fā)展中的作用；闡明介導(dǎo)的免疫炎癥的調(diào)節(jié)及其與PD 發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性；確定 PD時(shí) PHOX/MMP9 的表達(dá)以及在黑質(zhì) 紋狀體系統(tǒng)中的分布是否與小膠質(zhì)細(xì)胞激活程度一致；闡明PHOX/MMP9 受 MAPKs/NFkB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控的機(jī)制；闡明活化小膠質(zhì)細(xì)胞釋放 proNGF、proBDNF 等 前 體分 子、 激 活p75sortilin 途徑和相關(guān)下游信號(hào)、誘導(dǎo) DA 能神經(jīng)元凋亡的作用 ； 明確 αSyn 和 PINK1 引起氧化應(yīng)激和自噬與膠質(zhì)細(xì)胞活化的關(guān)系 。 4. 初步分析不同風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)人群出現(xiàn)NMS 及 PD 的情況；初步分析建模動(dòng)物病理變化與 NMS 之間的相關(guān)性；研究α Syn 等關(guān)鍵基因與年齡、以及 NMS 三者之間的關(guān)系。 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 四 年 1. 繼續(xù)篩選、隨訪追蹤社區(qū)人群中攜帶易感基因或暴露環(huán)境危險(xiǎn)因素的個(gè)體；進(jìn)一步收集 PD 家系，利用已建立的 PD 致病基因突變檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)對(duì)收集的家系進(jìn)行已知致病基因的突 變篩查 并鑒定 ；研究上述基因編碼蛋白在外周血的增齡性變化以及與 PD 病理進(jìn)展之間的關(guān)系；進(jìn)一步在環(huán)境毒素所致 PD 模型猴研究 中 判定上述蛋白在外周表達(dá)的變化作為 PD 早期診斷標(biāo)志物的可能性。 2. 開展 GSTO1與選擇性退變機(jī)理的研究；建立 DJ1 的 SUMO 化位點(diǎn)突變動(dòng)物 /細(xì)胞模型，明確作用靶位，在此基礎(chǔ)上篩選促進(jìn)損傷線粒體清除的化合物； iNOS 的激活對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞參與神經(jīng)元鐵代謝的影響。 3. 繼續(xù)研究 敲除對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化、致炎因子生成與釋放的影響及其與 DA 能神經(jīng)元損傷的相關(guān)性；應(yīng)用神經(jīng)干細(xì)胞 條件敲除鼠，研 究 通道對(duì) PD 時(shí)腦內(nèi)神經(jīng)再生的調(diào)節(jié)及其相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制；在PHOX/MMP9 基因敲除鼠中觀察MPTP/6OHDA/LPS 對(duì) DA 能神經(jīng)元損傷、 DA 含量和動(dòng)物行為學(xué)的影響 ,檢測(cè)膠質(zhì)細(xì)胞激活、炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激水平的變化；研究干預(yù) p75Trk、 p75sortilin 途徑作為神經(jīng)保護(hù)治療新靶點(diǎn)的價(jià)值、及其相關(guān)的表達(dá)調(diào)控因素和激活機(jī)制 ； 檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)自噬的信號(hào)通路 Beclin1， mTor 的變化與膠質(zhì)細(xì)胞活化的時(shí)相關(guān)系 。 4. 對(duì)風(fēng)險(xiǎn)人群進(jìn)行 NMS 和 PD 終點(diǎn)隨訪對(duì)建模動(dòng)物進(jìn)行終點(diǎn)觀察；利用α Syn 基因轉(zhuǎn)基因鼠及毒素暴露鼠模型研究α SYN 與環(huán)境毒素（百草枯或魚藤酮）的相互1. 對(duì)社區(qū)人群中存在危 險(xiǎn)遺傳基因和環(huán)境暴露個(gè)體進(jìn)行檢查和確診；爭(zhēng)取發(fā)現(xiàn) 12 個(gè)與 PD 相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)基因或多態(tài)性；證明 PD 致病基因編碼蛋白在外周血的變化作為 PD 早期診斷標(biāo)志物的可能性。 2. 力爭(zhēng)在 vav 研究中取得成果發(fā)表論文；闡述翻譯后修飾對(duì) PD 相關(guān)蛋白的功能影響以及其在疾病發(fā)生中的作用；初步獲得具有保護(hù)作用的化合物；膠質(zhì)細(xì)胞通過iNOS 的激活參與神經(jīng)元鐵代謝。 3. 闡明 細(xì)胞功能（增殖、分化、遷移和生存）的調(diào)節(jié)作用及其與 PD 神經(jīng)損傷與修復(fù)的關(guān)系；明確PHOX/MMP9 與小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫炎癥和氧化應(yīng)激的關(guān) 系，及其在 DA 能神經(jīng)元損傷和 PD發(fā)生發(fā)展中的作用；初步闡明p75Trk、 p75sortilin 分子表達(dá)和激活的相關(guān)調(diào)控機(jī)制、及其作為促進(jìn) DA 能神經(jīng)元生存和抑制凋亡的神經(jīng)保護(hù)治療新靶點(diǎn)的意義 ； 明確 α Syn 和 PINK1 引起自噬活化膠質(zhì)細(xì)胞的信號(hào)通路 。 4. 闡明α Syn 基因與環(huán)境毒素的相互作用對(duì)黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元損傷及 NMS 的作用機(jī)制；初步描繪αSYN 與環(huán)境毒素機(jī)制線路；預(yù)期隨訪到 200 例新發(fā) PD 與 400 例出現(xiàn) NMS 的個(gè)體；預(yù)期建立不同年齡段各動(dòng)物模型不同部位組織樣本庫。 5. 確定顯像探針自動(dòng)合成工藝；明確藥物有 效劑量的毒性范圍，藥物的半衰期、藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，為進(jìn)一步的藥物開發(fā)奠定基礎(chǔ)；初步明確 PD 細(xì)胞變性死亡機(jī)制并篩選出抗 PD 藥物。 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 作用關(guān)系對(duì) NMS 的影響，在原代細(xì)胞及動(dòng)物水平上研究其作用機(jī)制。 5. 顯像探針自動(dòng)化合成標(biāo)記 SOP 的完善和應(yīng)用研究；新探針的放射性標(biāo)記方法研究與應(yīng)用； 闡明 GSK3α /β調(diào)控 Bim 穩(wěn)定性的機(jī)制及其在神經(jīng)元死亡 /PD 發(fā)生中的作用；在急性和長(zhǎng)期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，檢測(cè)藥物有效劑量對(duì)重要組織器官的毒性作用，并系統(tǒng)進(jìn)行藥物毒性、藥代動(dòng)力學(xué)研究；建立攜帶特定基因突變 PD 患者的 iPS 細(xì)胞模型，研究細(xì)胞變性死亡機(jī)制和篩選抗 PD 藥物。 第 五 年 1. 繼續(xù)篩選、隨訪追蹤社區(qū)人群中攜帶易感基因或暴露環(huán)境危險(xiǎn)因素的個(gè)體；研究候選神經(jīng)保護(hù)劑（如 EGCG、姜黃素等）對(duì)上述基因及其編碼蛋白在外周和中樞表達(dá)的影響，分析其保護(hù) DA 神經(jīng)元的機(jī)制，找出其神經(jīng)保護(hù)作用的靶點(diǎn)。 2. 對(duì)前一年獲得的保護(hù)作用的化合物的保護(hù)作用在動(dòng)物模型上進(jìn)一步鑒定，并探討其作用機(jī)制；調(diào)節(jié)腦內(nèi)高鐵的藥物在腦鐵過量聚積選擇性損傷多巴胺能神經(jīng)元致帕金森病的中的作 用及其生物學(xué)機(jī)制。 3. 研究 MPP+/LPS 對(duì) 各種混合 培養(yǎng)體系中 DA 能神經(jīng)元損傷的影響及其機(jī)制；長(zhǎng)時(shí)程實(shí)時(shí)觀察經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)作用；體外建立PHOX/MMP9 基因敲除鼠黑質(zhì)神經(jīng)元 膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系，觀察MPP+/6OHDA/LPS 對(duì)神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響 ， 分析相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；應(yīng)用生物信息學(xué)、蛋白功能域分析鑒定和單克隆抗體封