【文章內(nèi)容簡介】 基因異常表達與膠質(zhì)細胞活化的關(guān)系 。 4. 完成各種 NMS 相關(guān)問卷的準備工作，并完成在社區(qū)人群和 PD隊列中環(huán)境因素分組與基因分型，了解 PD 患者各種 NMS 分布及其關(guān)鍵風(fēng)險基因、環(huán)境暴露、疾病進展和藥物療效反應(yīng)的關(guān)系；完成建模體系。 研究內(nèi)容 預(yù)期目標 抑制劑的治療作用；在 PD 模型中觀察中藥療效； 完善 iPS 細胞的誘導(dǎo)、增殖、向神經(jīng)干細胞分化、神經(jīng)干細胞分選和體外擴增的方法體系 。 5. 按照 SFDA 放射性新藥申報要求完成 99mTcTrodat1 和[18F]AV133 的 各項試驗 ；明確GSK3α /β Ser21/9 磷酸化與 PD發(fā)生的關(guān)系及 GSK3β多肽抑制劑對 PD 動物的治療 作用；明確藥物在多種 PD 模型中的療效；確定藥物抗炎、抗氧化神經(jīng)保護機制；建立穩(wěn)定的 iPS 細胞的誘導(dǎo)、增殖、向神經(jīng)干細胞分化、神經(jīng)干細胞分選和體外擴增的方法體系。 第 二 年 1. 進一步收集 PD 家系，利用已建立的 PD 致病基因突變檢測技術(shù)平臺對收集的家系進行已知致病基因的突變篩查，鑒定新的與 PD相關(guān)的基因和基因突變；比較攜帶不同風(fēng)險基因 PD 患者的臨床表型、疾病進展和藥物療效反應(yīng)的影響；分析 PD 致病基因α Syn的磷酸化和硝基化以及 LRRK2 磷酸化對衰老過程中線粒體功能的影響。 2. 研究 HSP22 的作用機理；研究 vav在 DA 神經(jīng)元的表達和水平的差異對其易感性的影響； Omi、Parkin 和 PINK 對自噬的調(diào)控作用；鐵代謝相關(guān)蛋白在神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞中的表達異同；小膠質(zhì)細胞對其他膠質(zhì)細胞以及 DA 神經(jīng)元鐵代謝功能的影響。 3. 應(yīng)用 敲除鼠，研究 PD 時腦內(nèi)神經(jīng)再生的調(diào)節(jié)作用及其機制；應(yīng)用星形膠質(zhì)細胞 條1. 發(fā)現(xiàn) 1 個新的與 PD 相關(guān)的基因和基因突變；得出攜帶不同風(fēng)險基因?qū)?PD 患者臨床表型、疾病進展和藥物療效反應(yīng)的影響的相關(guān)數(shù)據(jù)；闡明 PD 致病基因編碼蛋白的修飾對線粒體功能影響的機制。 2. 獲得 HSP22 的作用機理；確定 vav在 DA 神經(jīng)元易感性中的可能的作用；獲得自噬相關(guān)的的表達載體以及建立 EFGPLC3 穩(wěn)定表達細胞株，和自噬調(diào)控蛋白EGFPHax1 、 EGFPBclxl 及EGFPBeclin1 的穩(wěn)定表達細胞株；明確 Omi、 Parkin 和 PINK 對損傷線粒體的自 噬清除與否以及其對自噬相關(guān)蛋白的影響；小膠質(zhì)細胞內(nèi)鐵的水平影響其活化與功能。 3. 闡明 質(zhì)細胞的功能調(diào)節(jié)及其與 PD 的相關(guān)性；明確 PD 時黑質(zhì) 紋狀體 研究內(nèi)容 預(yù)期目標 件敲除鼠，制備 MPTPPD 模型；分別應(yīng)用內(nèi)外源性神經(jīng)毒素MPTP/6OHDA/LPS 建立炎癥和氧化應(yīng)激 PD 動物模型；研究星形膠質(zhì)細胞的 BDNF 等神經(jīng)營養(yǎng)因子合成分泌、 DA 能神經(jīng)元和 DA前體細胞的保護效應(yīng)、 p75Trk 介導(dǎo)途徑、及其細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制 ； 檢測 Bcl2 上游分子 PP2A 或JNK 對膠質(zhì)細胞的活化的影響 。 4. 通過前瞻性研究，對社區(qū)老年人群進行風(fēng)險分層，并對具有相關(guān)因素風(fēng)險的個體進行 NMS 相關(guān)隨訪并進行大規(guī)?；蚨鄳B(tài)性研究，分析其遺傳特點；對建模后的動物進行病理標記物與行為學(xué)觀察。 5. 顯像探針的臨床前藥理藥效學(xué)研究；建立新探針的生物評價方法與篩選方法；評價 calpain 切割GSK3β這一事件在 PD 發(fā)生中的作用； 體外建立神經(jīng)元 膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)體系，觀察藥物對神經(jīng)元的營養(yǎng)、對小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞激活的作用 ；定向誘導(dǎo) iPS細胞定向分化為 DA 能神經(jīng)元。 系統(tǒng)中小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞的激活和分布，及其激活與神經(jīng)元損傷的先后時間關(guān)系及相互作用；明確 PD 腦內(nèi)免疫異常和氧化應(yīng)激水平的改變；闡明活化星形膠質(zhì)細胞通過其釋放 BDNF等神經(jīng)營養(yǎng)因子、激活 p75Trk途徑和下游細胞內(nèi)信號、發(fā)揮其DA 能神經(jīng)元的神經(jīng)保護效應(yīng)機制 ； 明確 PINK1 和 α Syn 對膠質(zhì)細胞活化的信號通路 。 4. 明確 NMS 老年人群 中 ， NMS 與環(huán)境、遺傳交互作用的規(guī)律和特點；確定其在 PD 早期預(yù)警和早期診斷中的作用和意義；發(fā)現(xiàn)不同風(fēng)險等級的社區(qū)老年人群；建立不同年齡段動物模型的病理組織庫。 5. 按照 SFDA 放射性新藥申報要求完成顯像探針的藥理藥效學(xué)研究；篩選所合成的新探針； . 明確 calpain 切割 GSK3β這一事件在 PD 發(fā)生中的作用并獲得 PD 治療短肽；闡明藥物的神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)保護作用機制是否與抑制小膠質(zhì)細胞激活、放大星形膠質(zhì)細胞營養(yǎng)作用有關(guān)，初步明確藥物作用的靶細胞類型；穩(wěn)定獲得 iPS細胞定向分化來的 DA 能神經(jīng)元。 研究內(nèi)容 預(yù)期目標 第 三 年 1. 篩 選、隨訪追蹤社區(qū)人群中攜帶易感基因或暴露環(huán)境危險因素的個體；進一步收集 PD 家系，利用已建立的 PD 致病基因突變檢測技術(shù)平臺對收集的家系進行已知致病基因的突變篩查 并 鑒定；在不同年齡模型猴研究環(huán)境毒素（ MPTP、魚藤酮）對 PD 致病基因及編碼蛋白表達以及化學(xué)修飾的影響，研究上述蛋白與環(huán)境毒素相互作用對線粒體功能的影響及其機制。 2. 研究 vav 在 DA 神經(jīng)元選擇性變性中的作用和機理；進一步深入探討 Omi、 Parkin 和 PINK 調(diào)控的保護作用的信號通路；應(yīng)用細胞和動物模型研究環(huán)境因素（農(nóng)藥及藥物）對 Omi、 Parkin 和 PINK作用的影響；星形膠質(zhì)細胞釋放的神經(jīng)營養(yǎng)因子對神經(jīng)元鐵代謝的影響。 3. 繼續(xù)研究 敲除對星形膠質(zhì)細胞釋放 DSerine/ATP/Glu 等膠質(zhì)遞質(zhì)傳遞的影響及其與 PD 的相關(guān)性；應(yīng)用小膠質(zhì)細胞 敲除鼠，制備 MPTPPD 模型；分析調(diào)控 PHOX/MMP9 表達和功能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制；研究活化小膠質(zhì)細胞的 proNGF、 proBDNF 等神經(jīng)營養(yǎng)因子前體分子的合成分泌、誘導(dǎo) DA 能神經(jīng)元凋亡作用、p75sortilin 途徑、及其細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制 ；通過 檢測 LC3II 的水平，確定自噬水平與膠質(zhì)細胞活化的 關(guān)系 。 4. 對風(fēng)險人群進行進一步隨訪；對建模動物進一步觀察；以不同齡動物（食蟹猴和轉(zhuǎn)基因鼠）為模型，分析嗅球、腦干相關(guān)神經(jīng)核團、腸道及心臟自主神經(jīng)中αSyn 等關(guān)鍵基因的改變，及其與NMS 的變化關(guān)系。 1. 初步完成對選定社區(qū)人群易感基因和環(huán)境危險因素暴露的調(diào)查情況，掌握易感或高危人群；爭取發(fā)現(xiàn) 12個與 PD相關(guān)的風(fēng)險基因或多態(tài)性；證明環(huán)境毒素如何在衰老基礎(chǔ)上加重 PD 致病基因編碼蛋白的修飾和對線粒體功能的影響與機制。 2. 力爭在 hsp22 研究中取得成果發(fā)表論文；發(fā)表可從信號通路角度闡述 Omi、 Parkin 和 PINK 的作用機制，明確激酶信號通路；闡述環(huán)境因素對 PD 相關(guān)蛋白引起的多巴胺能神經(jīng)元的損傷的影響機制；星形膠質(zhì)細胞通過神經(jīng)營養(yǎng)因子 BDNF 影響神經(jīng)元鐵代謝。 3. 闡明 質(zhì)釋放及其膠質(zhì)傳遞的調(diào)節(jié)在PD 發(fā)生發(fā)展中的作用；闡明介導(dǎo)的免疫炎癥的調(diào)節(jié)及其與PD 發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性；確定 PD時 PHOX/MMP9 的表達以及在黑質(zhì) 紋狀體系統(tǒng)中的分布是否與小膠質(zhì)細胞激活程度一致；闡明PHOX/MMP9 受 MAPKs/NFkB 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控的機制；闡明活化小膠質(zhì)細胞釋放 proNGF、proBDNF 等 前 體分 子、 激 活p75sortilin 途徑和相關(guān)下游信號、誘導(dǎo) DA 能神經(jīng)元凋亡的作用 ； 明確 αSyn 和 PINK1 引起氧化應(yīng)激和自噬與膠質(zhì)細胞活化的關(guān)系 。 4. 初步分析不同風(fēng)險等級人群出現(xiàn)NMS 及 PD 的情況；初步分析建模動物病理變化與 NMS 之間的相關(guān)性；研究α Syn 等關(guān)鍵基因與年齡、以及 NMS 三者之間的關(guān)系。 研究內(nèi)容 預(yù)期目標 第 四 年 1. 繼續(xù)篩選、隨訪追蹤社區(qū)人群中攜帶易感基因或暴露環(huán)境危險因素的個體；進一步收集 PD 家系，利用已建立的 PD 致病基因突變檢測技術(shù)平臺對收集的家系進行已知致病基因的突 變篩查 并鑒定 ；研究上述基因編碼蛋白在外周血的增齡性變化以及與 PD 病理進展之間的關(guān)系；進一步在環(huán)境毒素所致 PD 模型猴研究 中 判定上述蛋白在外周表達的變化作為 PD 早期診斷標志物的可能性。 2. 開展 GSTO1與選擇性退變機理的研究；建立 DJ1 的 SUMO 化位點突變動物 /細胞模型，明確作用靶位，在此基礎(chǔ)上篩選促進損傷線粒體清除的化合物； iNOS 的激活對膠質(zhì)細胞參與神經(jīng)元鐵代謝的影響。 3. 繼續(xù)研究 敲除對小膠質(zhì)細胞活化、致炎因子生成與釋放的影響及其與 DA 能神經(jīng)元損傷的相關(guān)性；應(yīng)用神經(jīng)干細胞 條件敲除鼠，研 究 通道對 PD 時腦內(nèi)神經(jīng)再生的調(diào)節(jié)及其相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制；在PHOX/MMP9 基因敲除鼠中觀察MPTP/6OHDA/LPS 對 DA 能神經(jīng)元損傷、 DA 含量和動物行為學(xué)的影響 ,檢測膠質(zhì)細胞激活、炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激水平的變化；研究干預(yù) p75Trk、 p75sortilin 途徑作為神經(jīng)保護治療新靶點的價值、及其相關(guān)的表達調(diào)控因素和激活機制 ； 檢測不同時間點自噬的信號通路 Beclin1， mTor 的變化與膠質(zhì)細胞活化的時相關(guān)系 。 4. 對風(fēng)險人群進行 NMS 和 PD 終點隨訪對建模動物進行終點觀察；利用α Syn 基因轉(zhuǎn)基因鼠及毒素暴露鼠模型研究α SYN 與環(huán)境毒素（百草枯或魚藤酮）的相互1. 對社區(qū)人群中存在危 險遺傳基因和環(huán)境暴露個體進行檢查和確診；爭取發(fā)現(xiàn) 12 個與 PD 相關(guān)的風(fēng)險基因或多態(tài)性；證明 PD 致病基因編碼蛋白在外周血的變化作為 PD 早期診斷標志物的可能性。 2. 力爭在 vav 研究中取得成果發(fā)表論文；闡述翻譯后修飾對 PD 相關(guān)蛋白的功能影響以及其在疾病發(fā)生中的作用；初步獲得具有保護作用的化合物；膠質(zhì)細胞通過iNOS 的激活參與神經(jīng)元鐵代謝。 3. 闡明 細胞功能（增殖、分化、遷移和生存）的調(diào)節(jié)作用及其與 PD 神經(jīng)損傷與修復(fù)的關(guān)系；明確PHOX/MMP9 與小膠質(zhì)細胞介導(dǎo)的免疫炎癥和氧化應(yīng)激的關(guān) 系，及其在 DA 能神經(jīng)元損傷和 PD發(fā)生發(fā)展中的作用；初步闡明p75Trk、 p75sortilin 分子表達和激活的相關(guān)調(diào)控機制、及其作為促進 DA 能神經(jīng)元生存和抑制凋亡的神經(jīng)保護治療新靶點的意義 ； 明確 α Syn 和 PINK1 引起自噬活化膠質(zhì)細胞的信號通路 。 4. 闡明α Syn 基因與環(huán)境毒素的相互作用對黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元損傷及 NMS 的作用機制；初步描繪αSYN 與環(huán)境毒素機制線路；預(yù)期隨訪到 200 例新發(fā) PD 與 400 例出現(xiàn) NMS 的個體；預(yù)期建立不同年齡段各動物模型不同部位組織樣本庫。 5. 確定顯像探針自動合成工藝；明確藥物有 效劑量的毒性范圍，藥物的半衰期、藥代動力學(xué)特點，為進一步的藥物開發(fā)奠定基礎(chǔ)；初步明確 PD 細胞變性死亡機制并篩選出抗 PD 藥物。 研究內(nèi)容 預(yù)期目標 作用關(guān)系對 NMS 的影響，在原代細胞及動物水平上研究其作用機制。 5. 顯像探針自動化合成標記 SOP 的完善和應(yīng)用研究；新探針的放射性標記方法研究與應(yīng)用； 闡明 GSK3α /β調(diào)控 Bim 穩(wěn)定性的機制及其在神經(jīng)元死亡 /PD 發(fā)生中的作用；在急性和長期動物實驗中，檢測藥物有效劑量對重要組織器官的毒性作用，并系統(tǒng)進行藥物毒性、藥代動力學(xué)研究；建立攜帶特定基因突變 PD 患者的 iPS 細胞模型，研究細胞變性死亡機制和篩選抗 PD 藥物。 第 五 年 1. 繼續(xù)篩選、隨訪追蹤社區(qū)人群中攜帶易感基因或暴露環(huán)境危險因素的個體；研究候選神經(jīng)保護劑（如 EGCG、姜黃素等）對上述基因及其編碼蛋白在外周和中樞表達的影響，分析其保護 DA 神經(jīng)元的機制，找出其神經(jīng)保護作用的靶點。 2. 對前一年獲得的保護作用的化合物的保護作用在動物模型上進一步鑒定，并探討其作用機制；調(diào)節(jié)腦內(nèi)高鐵的藥物在腦鐵過量聚積選擇性損傷多巴胺能神經(jīng)元致帕金森病的中的作 用及其生物學(xué)機制。 3. 研究 MPP+/LPS 對 各種混合 培養(yǎng)體系中 DA 能神經(jīng)元損傷的影響及其機制；長時程實時觀察經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)作用；體外建立PHOX/MMP9 基因敲除鼠黑質(zhì)神經(jīng)元 膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)體系，觀察MPP+/6OHDA/LPS 對神經(jīng)元、小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞的影響 ， 分析相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；應(yīng)用生物信息學(xué)、蛋白功能域分析鑒定和單克隆抗體封