【文章內(nèi)容簡介】 書的基本要求 （三）對驗證殘留檢測標準操作程序（ SOP）作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 應(yīng)盡量提供的參數(shù) 1. 判斷限 (CCα) 2. 檢測能力 (CCβ) 3. 耐用性 4. 穩(wěn)定性－ (溶液和基質(zhì) ) 5. 不確定度 (1)特異性－ Specificity 基質(zhì) : 具有典型性基質(zhì)空白 ?在分析物出峰時間段判斷基質(zhì)干擾 (信號，色譜峰，離子流 ) ?對于驗證基質(zhì)，應(yīng)分類別分別驗證，例如肌肉、肝臟、腎臟、脂肪、皮膚、奶、蛋、魚、蝦、蜂蜜、蜂王漿、腸衣等，并在驗證報告中具體寫明驗證所采用的具體基質(zhì)，例如雞肝還是鴨肝 （三）對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 (1)特異性－ Specificity 分析物 : 與分析物相近化合物 ?如異構(gòu)體 , 代謝物 , 降解產(chǎn)物 :將異構(gòu)體 , 代謝物 , 降解產(chǎn)物添加到基質(zhì)中，進行評估 ?研究 : ? 錯誤判斷 ? ? 干擾物 ? ? 折中的定量方法 （三）對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書 的基本要求 1 非儀器分析目視法 用已知濃度的被測物試驗出能被可靠地檢測出最低濃度或量 . (2)檢 測 限 2 儀器分析信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法 . 以 3倍信噪比（ S/N=3)相對應(yīng)濃度確定檢測限量 . 對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 （ 2）檢 測 限 (Limit of Detection ,LOQ) （ 3）定量限 (limit of quantitation ,LOQ) 指樣品中被測物能被定量測定的最低量 .（應(yīng)具有一定的準確度和精密度） (3)定 量 限 確定方法 : 1 儀器分析 S/N=10 2 非儀器分析目視法 （三）對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 (4).回收率 ? 使用有證物質(zhì)或者空白添加 添加濃度 : ? 和 2 x MRPL, ? 、 1和 x MRL, ? n ≥ 6 ? 計算 : ?回收率 % = 100 x (測得的濃度 /添加的濃度 ) （三）對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書 的基本要求 (5).準確度 確證方法 –準確度：重復(fù)分析標準物質(zhì)，測定的含量（經(jīng)回收率校正后）平均值與真值的偏差指導(dǎo)范圍如下： 真實濃度（ 181。g/kg） 范圍 小于等于 1 50%120% 1 10 70%110% 大于 10 80%110% （三）對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 沒有標準物質(zhì) (CRM)時，準確度可以通過 測定空白基質(zhì)中加入已知量分析物的回收率獲得 ? 重復(fù)性 是指在重復(fù)性條件下的精密度 室內(nèi)精密度 ； 重復(fù)性條件 是指在同一實驗室，由同一人操作，使用相同的設(shè)備，用同樣方法獲得獨立測量結(jié)果的條件。 ? 重現(xiàn)性 是指在重現(xiàn)性條件下的精密度 室間 精密度 ； 重現(xiàn)性條件 是指在不同實驗室，由不同的人員操作，使用不同的設(shè)備，用同樣方法獲得測量結(jié)果的條件 。 (三 )對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫 作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 (6).精密度 (變異系數(shù) ) (6).精密度 (變異系數(shù) ) 在重現(xiàn)性條件下，對參考標準或加標樣重復(fù)分析的實驗室間變異系數(shù)（ CV），不得超出 Horwita方程計算的水平。該方程如下： ? CV=2xE() 質(zhì)量分數(shù) 重現(xiàn)性 %CV 1 181。g/kg 45* 10 181。g/kg 32* 100 181。g/kg 23 1 000 181。g/kg 16 在重復(fù)性條件下，實驗室內(nèi) CV通常在上述數(shù)值的一半到三份之二之間。在實驗室內(nèi)重現(xiàn)性條件下進行的分析，其實驗室內(nèi) CV不應(yīng)大于上述重現(xiàn)性 CV。質(zhì)量分數(shù)低于 100 μg/kg 時，用 Horwitz方程給出無法接受的高值。因此，濃度低于 100 μg/kg 的 CV應(yīng)盡可能低 (三 )對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 重現(xiàn)性 ? 與其他實驗室進行比對 ?或者進行協(xié)同實驗（按照 ISO 57252） ? 實驗室內(nèi)重現(xiàn)性 ?不同分析員 對同一批樣品進行分析（盡可能使用不同試劑、不同儀器） (三 )對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 (6).精密度 (變異系數(shù) ) （ 7）標準曲線 ? 至少 5個水平 (包括原點 ) ?即 0, , , , , 倍 MRL / MRPL 可接受范圍 ?線性回歸方程 y =kx + b ?相關(guān)系數(shù) : R2 ( 或更好 , 理想的為 ) (三 )對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 分析技術(shù) 96/23/EC附錄 I的物質(zhì) 局限性 LC或 GC/MS A組和 B組 僅在在線或脫機色譜分離時適用 僅適用于使用全掃描技術(shù)，或使用不記錄全質(zhì)譜圖但至少使用 3（ B組）或 4（ A組）識別點時 LC或 GC/IR A組和 B組 被測物需有紅外光譜吸收 液相 全掃描DAD B組 需要有 UV光譜吸收 液相 熒光 B組 僅適用于有天然熒光，及轉(zhuǎn)變或衍生后有熒光的分子 2D TLC全掃描UV/VIS B組 必須使用二維 HPTLC和共色譜法 GC電子捕獲檢測 B組 僅在兩根柱子極性不同時適用 LC酶免 B組 僅適用于使用至少兩個不同的色譜系統(tǒng)或使用第二種獨立的檢測方法時 LCUV/VIS（單波長） B組 僅適用于使用至少兩個不同的色譜系統(tǒng)或使用第二種獨立的檢測方法時 (三 )對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 確證方法的要求 (三 )對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 確證方法的要求 ? 一般性能標準 – 確證方法應(yīng)提供分析物的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息。 – 當(dāng)方法采用內(nèi)標時，在提取步驟開始時就應(yīng)將適當(dāng)?shù)膬?nèi)標加入到測試部分中去。 – 如果沒有合適的內(nèi)標可用，可以用共色譜法對分析物進行定性。在這種情況下 , 只應(yīng)有一個色譜峰，且峰高（或峰面積）的增加相當(dāng)于加入分析物的量。用 GC或 LC時，半峰寬應(yīng)在原來峰寬的 90110%以內(nèi)，保留時間的變化應(yīng)在 5%以內(nèi)。 – 分析物含量等于或接近容許限或判斷限的標樣或加標樣（陽性控制樣品），以及陰性控制樣和試劑空白都應(yīng)在對每批樣品進行分析時同時執(zhí)行整個分析過程。在分析儀器上的進樣順序是：試劑空白、陰性控制樣、要確證的樣品、陰性控制樣品再進樣，最后是陽性控制樣品。順序的任何調(diào)整都應(yīng)有充分理由證明其合理性。 確證方法的要求 ? 全掃描：當(dāng)用單級質(zhì)譜記錄全掃描圖譜時，至少要有四種離子的相對豐度大于等于基峰的 10%。如果分子離子峰在參考圖譜中的相對豐度 ≥10%，則必須包括在內(nèi)。 ? 選擇離子監(jiān)測 質(zhì)譜方法時 要求 : ?96/23/EC指令附錄 I A組 4識別點 ?96/23/EC指令附錄 I B組 3識別點 (三 )對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 確證方法的要求 (三 )對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 MS技術(shù) 每種離子的識別點 低分辨質(zhì)譜 LRMSn母離子 LRMSn子離子 HRMS HRMSn母離子 HRMSn子離子 質(zhì)量碎片類型和識別點的關(guān)系 確證方法的要求 ? 對于每個診斷離子，信噪比 3:1 ?測定至少一對離子豐度比 ?相對離子豐度最大容許偏差 不能超過下表 (三 )對殘留檢測標準操作程序（ SOP）編寫作業(yè)指導(dǎo)書的基本要求 相對豐度 （ %基峰） EIGCMS （相對） CIGCMS、 GCMSn LCMS、 LCMSn （相對） 50% 177。 10% 177。 20% 20%到 50% 177。 15% 177。 25% 10%到 20% 177。 20% 177。 30% ≤10% 177。 50% 177。 50% 確證方法的要求 (三 )對殘留檢測標