【文章內(nèi)容簡介】 中微量或痕量目標(biāo)化合物的提取 ， 又可用于目標(biāo)化合物凈化與富集 ， 是目前殘留分析中樣品前處理的主流技術(shù)之一 。 ? 目前國內(nèi)主要應(yīng)用在水中多環(huán)芳烴 〔 PAHs〕 和多氯聯(lián)苯 〔 PCBs〕等有機(jī)物質(zhì)分析 ， 水果 、 蔬菜及食品中農(nóng)藥和除草劑殘留分析 ， 抗生素分析 ， 臨床藥物分析等方面 。 第五十四頁，共一百二十九頁。 樣品預(yù)處理技術(shù)的革命 —— 固相微萃取〔 SPME〕技術(shù) ?克服了以前傳統(tǒng)的樣品預(yù)處理技術(shù)的缺陷 ， 它無需溶劑和復(fù)雜裝置 ， 它能直接從液體或氣體樣品中采集揮發(fā)和非揮發(fā)性的化合物 ， 可以直接在 GC， GC/MS和 HPLC上分析 。 ?能與任何型號的氣相和液相色譜連用 ， 有手動(dòng)和自動(dòng)進(jìn)樣兩種 。 第五十五頁，共一百二十九頁。 商品化的固相萃取吸附材料的缺點(diǎn) ? 傳統(tǒng)固相萃取的目標(biāo)物與吸附劑之間的作用力是非特異性的 , 通常需對萃取和洗脫條件進(jìn)行仔細(xì)選擇 , 而且對不同基質(zhì)的別離與分析物需要選擇不同的柱填料 , 從而限制了固相萃取的進(jìn)一步開展。為了提高柱效與重現(xiàn)性、擴(kuò)大其應(yīng)用領(lǐng)域 ,開發(fā)研制高選擇性的固相吸附材料是非常重要的。 第五十六頁，共一百二十九頁。 分子印跡聚合物獨(dú)特的選擇性和親和力正適應(yīng)了這一開展要求 。 由于分子印跡聚合物可以根據(jù)分析目標(biāo)物的需要而制備 ， 所以能廣泛應(yīng)用于物質(zhì)的別離與分析過程 , 它對于目標(biāo)物質(zhì)的高度選擇性也是普通固相萃取無法比較的 。 利用分子印跡技術(shù)制備對食品污染物具有高選擇性的分子印跡聚合物并用于食品污染物的去除和分析是一個(gè)很有意義的研究領(lǐng)域 。 第五十七頁，共一百二十九頁。 分子印跡技術(shù) 分子印跡技術(shù) 〔 Molecular Imprinting Technique , MIT〕 的開展起源于免疫學(xué)〔 Immunology〕 。 1949 年 , Dickey首先提出了 “分子印跡 〞 這一概念 , 但在很長一段時(shí)間內(nèi)沒有引起人們的重視 。 直到 1972 年由 Wulff 研究小組首次報(bào)道了人工合成的有機(jī)分子印跡聚合物 〔 Molecularly Imprinted Polymers , MIPs〕 之后 , 這項(xiàng)技術(shù)才逐漸為人們所認(rèn)識 。 特別是 1993 年 Mosbach 等在 ?Nature?上發(fā)表了有關(guān)茶堿分子 MIPs的報(bào)道后 , 這一技術(shù)開始飛速開展 , 每年發(fā)表的有關(guān)分子印跡技術(shù)的理論 、 MIPs 的合成及應(yīng)用的論文數(shù)直線上升 。 迄今 , 在印跡機(jī)理 、 制備方法以及在各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用研究都取得了很大的進(jìn)展 。 第五十八頁，共一百二十九頁。 分子印跡技術(shù)的根本原理 分子印跡技術(shù)是當(dāng)前開展高選擇性材料的主要方法之一，就是仿照抗體的形成機(jī)理，在模板分子周圍形成一個(gè)高度交聯(lián)的剛性高分子，除去模板分子后在聚合物的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中留下了與模板分子大小和形狀相匹配的立體孔穴，同時(shí)孔穴中含有識別模板分子的結(jié)合位點(diǎn)，對模板客體分子表現(xiàn)高度的選擇識別性能。 第五十九頁，共一百二十九頁。 分子印跡技術(shù)的根本原理 分子印跡聚合物的制備：首先，模板分子與功能單體通過共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵結(jié)合產(chǎn)生功能團(tuán)和空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)的相互作用，形成配合物；第二，在過量交聯(lián)劑的存在下，引發(fā)聚合，使模板分子 功能單體配合物周圍發(fā)生聚合反響，形成高度交聯(lián)的具有一定機(jī)械性能的高分子聚合物；第三，通過適當(dāng)?shù)姆椒ǔツ０宸肿?，得到功能團(tuán)和空間結(jié)構(gòu)與模板分子互補(bǔ)的分子印跡聚合物。 第六十頁，共一百二十九頁。 基質(zhì)固相分散萃取 (Matrix SolidPhase Dispersion Extraction , MSPDE) ? 基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)是 1989 年由美國 Louisiana 州立大學(xué)的 Staren Barke教授首次提出 ， 用于動(dòng)物組織樣品中抗生素藥物的提取和凈化 。 根本原理 : 是將涂漬有 C18 鍵合相或其它聚合物的擔(dān)體作固相萃取材料與樣品 (固態(tài)或液態(tài) ) 一起研磨 ,得到半干狀態(tài)的混合物并將其作為填料裝柱 ,然后用不同的溶劑淋洗柱子 ,將待測物洗脫下來 。 ? 一般情況下 ， 萃取液可直接進(jìn)行分析檢測 。 ? 目前國內(nèi)外 MSPDE 在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用研究取得了較大進(jìn)展 。 第六十一頁，共一百二十九頁。 基質(zhì)固相分散萃取的優(yōu)點(diǎn) MSPDE是在 SPE 根底上改進(jìn)后的樣品前處理方法，與 SPE相比較，其優(yōu)點(diǎn)在于 : MSPDE 依靠機(jī)械剪切力和 C18 鍵合相的去垢效應(yīng)及巨大的外表積使樣品結(jié)構(gòu)破碎并且在填料外表均勻分散，簡化了傳統(tǒng)樣品前處理中所需的樣品勻漿、組織細(xì)胞裂解、提取、凈化等過程，防止了樣品勻漿、轉(zhuǎn)溶、乳化、濃縮等造成的待測物損失，提高了凈化效率。 第六十二頁，共一百二十九頁。 凝膠滲透色譜 ( Gel Permeation Chromatography , GPC) ? 凝膠滲透色譜：是基于物質(zhì)分子大小和形狀不同 ， 通過具有分子篩性質(zhì)的固定相 〔 凝膠 〕 將物質(zhì)進(jìn)行別離 。 ? GPC 是多農(nóng)藥殘留分析中一種常用有效的提純方法 ， 由于具有自動(dòng)化程度高 、 凈化效率較好及回收率較高 ， 被廣泛用于純化含類酯的復(fù)雜基體組分 。 第六十三頁，共一百二十九頁。 三 . 食品中農(nóng)藥殘留分析檢測技術(shù) ? 1. 薄層色譜法〔 TLC〕 ? 2. 氣相色譜法〔 GC〕 ? 3. 氣相色譜 質(zhì)譜法〔 GCMS〕 ? 4. 液相色譜法〔 HPLC〕 ? 5. 液相色譜 質(zhì)譜法〔 LCMS〕 ? 6. 超臨界流體色譜〔 SFC〕 ? 7. 毛細(xì)管電泳〔 CE〕 ? 8. 免疫分析〔 IA〕 第六十四頁，共一百二十九頁。 1. 薄層色譜法〔 TLC〕 ? 薄層色譜法：是以固體吸附劑〔如硅膠、氧化鋁等〕為擔(dān)體，水為固定相溶劑，流動(dòng)相一般為有機(jī)溶劑所組合的分配型層析別離分析方法。 ? 優(yōu)點(diǎn)：薄層色譜法不需要特殊設(shè)備和試劑，簡便易行，快速、直觀、靈活，可同時(shí)用于分析多個(gè)樣品。 ? 缺點(diǎn)：靈敏度不高。近年來較少使用，多用于復(fù)雜混合物的別離和篩選。 ? TLC 除用特殊的顯色劑觀察斑點(diǎn)顏色和用 Rf值定性外，與其它技術(shù)聯(lián)用不僅可以定性，而且可對樣品中被別離的 1 種或多種成分進(jìn)行定量分析。 ? 20 世紀(jì) 80 年代開展起來的高效薄層色譜 ( HPTLC) 與掃描技術(shù)結(jié)合，是一種易于建立和掌握的半定量技術(shù)。 第六十五頁，共一百二十九頁。 薄層電動(dòng)涂敷器 第六十六頁，共一百二十九頁。 全自動(dòng)點(diǎn)樣儀 點(diǎn)樣方式：點(diǎn)狀，條帶狀噴霧式點(diǎn)樣。 點(diǎn)樣加熱平臺： 溫度 0200℃ 數(shù)碼自動(dòng)控溫。 點(diǎn)樣機(jī)頭移動(dòng)：步進(jìn)電機(jī)控制點(diǎn)樣帶長度： 0〔點(diǎn)狀點(diǎn)樣〕 180mm〔用于半制備色譜〕 點(diǎn)樣針驅(qū)動(dòng)：步進(jìn)電機(jī)控制，上下行程自動(dòng)保 點(diǎn)樣針規(guī)格：配 100ul進(jìn)樣針 點(diǎn)樣重現(xiàn)性：優(yōu)于 % 第六十七頁，共一百二十九頁。 薄層色譜掃描儀 掃描方式 : 線性掃描 ,線性 飛點(diǎn)掃描； 掃描速度： 20mm/s〔分辨率；50um)； 10mm/s(分辨率：25um)， 檢測波長： 190900nm 檢測方式：吸收法、反射法、熒光 法、透射法 燈源： 氘燈、鹵鎢燈、汞燈。 軟件操作 ,簡明方便，很好的重現(xiàn)性 第六十八頁，共一百二十九頁。 全自動(dòng)展開儀 展開溶劑消耗： 每次展開約 10mL 第六十九頁，共一百二十九頁。 2. 氣相色譜法 (GC) ? 氣相色譜法是一種經(jīng)典的分析方法。 ? 利用試樣中各組分在氣相和固定液 液相間的分配系數(shù)不同 ,當(dāng)汽化后的試樣被載氣帶入色譜柱中運(yùn)行時(shí) ,組分就在其中的兩相間進(jìn)行反復(fù)屢次分配 ,經(jīng)過一定的柱長后 ,便彼此別離 ,按順序離開色譜柱進(jìn)入檢測器 ,產(chǎn)生的離子流訊號經(jīng)放大后 ,在記錄器上描繪出各組分的色譜峰。 第七十頁，共一百二十九頁。 氣相色譜儀 第七十一頁，共一百二十九頁。 氣相色譜流程 高壓鋼瓶 減壓閥 載氣凈化枯燥管 針形閥 流量劑 壓力表 進(jìn)樣器 色譜柱 檢測器 記錄儀 第七十二頁，共一百二十九頁。 氣相色譜流出曲線 第七十三頁，共一百二十九頁。 氣相色譜檢測器 檢測器：將色譜柱別離后的各組分按其特性及含量轉(zhuǎn)換為相應(yīng) 的電訊號。 檢測器分為：濃度型檢測器 〔 concentration sensitive detector〕 質(zhì)量型檢測器 〔 mass flow rate sensitive detector〕 第七十四頁，共一百二十九頁。 氣相色譜檢測器 濃度型檢測器： 測量的是載氣中某組分濃度瞬間的變化，即檢測器的 響應(yīng)值和組分濃度成正比 。 質(zhì)量型檢測器： 測量的是載氣中某組分進(jìn)入檢測器的速度變化，即 檢測器的響應(yīng)值和單位時(shí)間內(nèi)進(jìn)入檢測器某組分的質(zhì)量成正比 。 第七十五頁，共一百二十九頁。 氫火焰離子化檢測器 〔 flame ionization detector〕 FID 對含碳有機(jī)化合物有很高的靈敏度。適用于痕量有機(jī)物的分析。 特點(diǎn)： 結(jié)構(gòu)簡單、靈敏度高、響應(yīng)塊、穩(wěn)定性好、死體積小、線性范圍寬。 第七十六頁，共一百二十九頁。 電子捕獲檢測器 〔 electron capture detector〕 ECD 它是一種具有選擇性，高靈敏度的濃度型檢測器。 它對具有電負(fù)性的物質(zhì)〔鹵素、硫、磷、氮、氧〕有響應(yīng)，電負(fù)性越強(qiáng)，靈敏度越高。 能檢測 1014gmL1物質(zhì)。 第七十七頁，共一百二十九頁。 別離效能高。 靈敏度高。 分析速度快。 應(yīng)用范圍廣泛。 裝置簡單，操作方便。 缺點(diǎn)：在缺乏標(biāo)準(zhǔn)樣品的情況下，定性分析較困難， 對于高沸點(diǎn)，不能氣化和熱不穩(wěn)定的物質(zhì)不能 用氣相色譜法別