【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 3: 健康人 M4: 健康人 M5: 腫瘤患者 M1: 腫瘤患者 M2: 腫瘤患者 M3: 腫瘤患者 M4: 腫瘤患者 M5: 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 與結(jié)果分析 ： 表 1 正常男性淋巴細(xì)胞周期 /腫瘤患者淋巴細(xì)胞周期 （ M1M2M3） 比率和 PRI 組別 分析細(xì)胞數(shù) M1(%) M2(%) M3(%) PRI正常組 1000 27 腫瘤組 1000 正常人與腫瘤患者M(jìn)1，M2，M3期0102030405060M1 M2 M3正常人腫瘤患者 結(jié)果分析：從表 1 可以看出腫瘤組中 M2 期細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)低于正常組，而第三周期的細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)高于正常組，說(shuō)明腫瘤患者的淋巴細(xì)胞 增殖周期交正常人短。 結(jié)果討論 ： SCE表示在染色體復(fù)制過(guò)程中 DNA鏈的等位點(diǎn)發(fā)生了交換，標(biāo)志染色體在 DNA水平上存在不穩(wěn)定性和損傷，如果某一個(gè)體的 SCE 有明顯增高，說(shuō)明染色體收到環(huán)境中一定因素的影響，或者是受到遺傳 缺陷的內(nèi)在制約因素所致。本研究結(jié)果顯示，腫瘤患者 SCE 明顯高于正常組，說(shuō)明其染色體不穩(wěn)定。在正常情況下，人類外周血中淋巴細(xì)胞不再分裂， 幾乎都處于 G0 期。但當(dāng)加入植物血凝素 (PHA) 后，在這種有絲分裂原作用下，能使原來(lái)處于 G0 期的小淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成大的能夠進(jìn)行有絲分裂的大淋巴細(xì) 胞。由于 Brdu 在 DNA 復(fù)制中可被作為核苷酸前體摻入到新合成的 DNA 中，取代胸腺嘧啶核苷，細(xì)胞在含有 Brdu 的培養(yǎng)基中經(jīng)歷 2個(gè)周期后，中期染色體兩條單體的 DNA 雙鏈在化學(xué)組成上就有了差別，利用此方法可明顯地區(qū)分培養(yǎng)細(xì)胞的分裂周期。 5 結(jié)論與心得 1 結(jié)論 ：本文結(jié)果表明：在同等條件下， 體外同時(shí)培養(yǎng)了腫瘤患者和健康人的淋巴細(xì)胞，結(jié)果顯示腫瘤患者的淋巴細(xì)胞增殖周期較健康人短。 SCE 頻率較健康人高。 2 心得 ： 在實(shí)驗(yàn)中要嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)要求， 不能大意馬虎。對(duì)于有溫度要求的操作步驟，一 定要等到溫度達(dá)到要求時(shí)方可操作，否則會(huì)影響反應(yīng)效果，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。 俗話說(shuō)萬(wàn)事開(kāi)頭難，做試驗(yàn)一定要敢做敢問(wèn)，不要怕做錯(cuò)或者最后做失敗了，只要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟一步一步操作，加上嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度，總會(huì)得到預(yù)期的結(jié)果的。如果做失敗了一次，就要反思哪些步驟出現(xiàn)了問(wèn)題，哪些不當(dāng)操作影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果，找出問(wèn)題所在之后再去重新做一邊，操作中就會(huì)胸有成竹，也順手的多。 試驗(yàn)中 團(tuán)隊(duì)合作 也是很重要的一環(huán)， 有時(shí)候比較復(fù)雜的操作就需要他人的幫助才能順利完成，如果實(shí)驗(yàn)失敗了自己想不出來(lái)問(wèn)題所在，也可以向周?chē)瑢W(xué)請(qǐng)教，一個(gè)人一條思路，說(shuō)不定你 會(huì)從同學(xué)那里得到很大的幫助。 致謝 幾個(gè)月的畢業(yè)設(shè)計(jì)讓我結(jié)識(shí)了良師益友，從開(kāi)始的開(kāi)題報(bào)告到最后的論文寫(xiě)作，李老師都給了我很大的幫助，我不懂的地方，她會(huì)很耐心的給我講，同時(shí)幫我收集了很多 附錄 ：常用溶液配置 (一 )1/15mol/L PBS(磷酸緩沖液 Phosphate Buffer Solution， PBS) 甲液： 1/15mol/L Na2HPO4溶液 Na2HPO4 蒸餾水 加至 1000ml 乙液： l/15mol/L KH2PO4溶液 KH2P04 蒸餾水 加至 1000m1 分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于 4℃冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需 pH 的緩沖液 ,見(jiàn)下表 : pH 甲液 ml 乙液 mI pH 甲液 ml 乙液 mI (二 )10μ g／ ml 秋水仙素 秋水仙素 lOmg 生理鹽水 100ml 裝入茶色瓶中，為貯備液， 4℃冰箱中保存。甩時(shí)取貯備液 1ml 加生理鹽水9ml 即可。 (三 )Giemsa 染液 1．貯備液 Giemsa 粉 1g 純甘油 66ml 甲醇 66ml 先將 Giemsa 粉置于研缽中加少量甘油，充分研磨，呈無(wú)顆粒的糊狀。再將全部甘油加入，放入 56℃溫箱中 2 小時(shí)，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般兩周后使用為好。 (四 )BrdU 溶液 (200ug/m1) 用無(wú)菌青霉素瓶，在室溫下稱取 ，在無(wú)菌條件下加入滅菌生理鹽水，溶解，混勻，用黑紙包嚴(yán)，避光置冰箱冰格中保存。最好用時(shí)現(xiàn)配。 (十 )2 SSC 溶液 用分析天平稱取氯化鈉 克，檸檬酸鈉 克溶于蒸餾水中，加蒸餾水至 1000 毫升。 參考文獻(xiàn)： 〔 1〕 謝雄等譯 1981 化學(xué) 物質(zhì)致突變性檢測(cè)法 ,人民衛(wèi)生 出版社 〔 2〕 黑木登志夫 1981 國(guó)外醫(yī)學(xué) 衛(wèi)生學(xué)分冊(cè) 8： 148. 〔 3〕 White et al. 1980 . 69:283 〔 4〕 Madle 1981 . 85:347 〔 5〕 Speit 1982 . 105:261 〔 6〕 Hartwell LH． Kastan MB Cell cycle rol and cancer [J]. :182l— 1828． 〔 7〕 吳昊， 王秀琴 科學(xué)通報(bào) 1980； 25： 239. 〔 8〕 陳勇夫 ,等中華老年醫(yī)學(xué)雜志 1986； 1 44. 〔 9〕 羅立華 ,等中華老年醫(yī)學(xué)雜志 1986； 4： 44. 〔 10〕 王毓鑾 ,等山西醫(yī)藥雜志 1984； 5： 263 〔 11〕 金霈，等 .腫瘤防治研究 1985； 8： 132. 〔 12〕 呂寶忠，等 .遺傳學(xué)報(bào) 1981； 12： 1. 〔 13〕 Heerma NA,et al. 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