【文章內容簡介】 A。由此可見， TBHQ 的抗氧化效果是很強的。 2020級食品科學與工程畢業(yè)論文 6 2 材料與方法 實驗 儀器 表 21 主要實驗儀器 儀器名稱 生產廠家 SP6800A 氣相色譜儀 島津企業(yè)管理（中國）有限公司 數(shù)顯恒溫水浴鍋 金壇市晶波實驗儀器廠 分析天平 上海民橋精密科學儀器有限公司 電子天平 上海民橋精密科學儀器有限公司 實驗材料與試劑 表 22 實驗材料與方法 材料與試劑名稱 生產廠家 TBHQ 標準樣品 國藥集團化學試劑有限公司 甲醇（分析純） 國藥集團化學試劑有限公司 乙腈（分析純） 國藥集團化學試劑有限公司 95%乙醇（ 分析純） 國藥集團化學試劑有限公司 無水乙醇（分析純） 國藥集團化學試劑有限公司 二硫化碳（分析純） 國藥集團化學試劑有限公司 金龍魚菜籽油 購于肥東華聯(lián)超市 實驗方法（國標方法 GB/） 實驗操作流程 樣品 預處理 分離提取 氣相色譜自動進樣測定 2020級食品科學與工程畢業(yè)論文 7 實驗操作預處理 TBHQ 標準品預處理 利用分析天平準確稱取叔丁基對苯二酚（ TBHQ） 于燒杯中，用 1mL 的無水乙 醇溶解 TBHQ 晶體后，加入少量的二硫化碳混合，混合液倒入 100mL 棕色容量瓶中。再用 1mL 的無水乙醇洗滌燒杯后，加入少量的二硫化碳，清洗液一并倒入容量瓶中，最后用二硫化碳稀釋至 100mL。此標準溶液濃度為 1mg/mL，置于 4℃ 冰箱中保存待用。 樣品預處理 準確稱取菜籽油試樣 25mL 比色管中，加入 5mLL80%的乙醇溶液，振搖 1min，靜止片刻，放在 90℃ 左右的水浴鍋中加熱 30s，促其分層。分層后，將上清液用移液管轉移到 60mL 的瓷蒸發(fā)皿中（勿將油滴帶入），再用 5mL 的 80%的乙 醇溶液重復提取兩次，提取液一并倒入蒸發(fā)皿中，將蒸發(fā)皿放在 60℃ 的水浴鍋上通風揮發(fā)近干（切勿蒸干）。 在蒸發(fā)皿中加入二硫化碳，用小玻璃棒少量多次洗滌蒸發(fā)皿中殘留物，轉移到 2mL容量瓶中，試液作為試樣測定液。 色譜柱條件 [14] 色譜柱：玻璃柱，內徑 3mm,長 3m，內裝涂有 2%OV1 固定液的酸洗硅烷化處理的白色硅藻土載體（ Chromosorb W AW DMCS） ,粒度 80100 目。 檢測器溫度： 250℃ ，汽化室溫度： 160℃ ，柱溫： 250℃ 。 氮氣 （ N2） ： 30mL/min，氫氣 （ H2）： 50mL/min，空氣： 600mL/min。 標準曲線的建立 標準品儲備液的配制 準確稱取上述 處理的 TBHQ 標準儲備液 （ 1mg/mL） ，用二硫化碳定容，分別稀釋成濃度分別為 、 50ug/mL、 ug/mL、 150 ug/mL、 200 ug/mL、 250 ug/mL 的標準溶液，用一次性吸管將上述不同濃度的標準儲備液裝入樣品瓶中，放入氣相色譜的滑槽中，準備進樣。 標品進樣檢測 打開電源總開關，打開氣閥設置氣壓，氫氣 （ H2）： ，氮氣 （ N2）： ，2020級食品科學與工程畢業(yè)論文 8 空氣： 。打開氣相色譜儀開關，并打開軟件工作站，聯(lián)機進行開始進樣。開始進樣前若玻璃柱長久未用，一定要將柱子進行老化。老化的方法多采用氣體流動法 ,將柱入口與進樣室相連 ,出口勿接檢測器 ,通小流量 (一般為 510mL/min)的載氣 ,以 (24)℃ /min 程序升溫至低于固定液最高使用溫度 2030℃ ,老化 1224h,獲得平穩(wěn)基線 ,待基線穩(wěn)定后，便可以開始進樣。根據(jù)保留時間進行定性，根據(jù)峰面積進行定量。根據(jù)不同濃度的標品即可繪制標準曲線。 樣品含量測定 根據(jù)上述樣品的 處理方法，利用一次性吸管將用二硫化碳定容的樣品溶液裝入樣品瓶中，氣相自動進樣。根據(jù)上述的標準曲線，再根據(jù)出峰的保留時間和出峰的面積，即可得出樣品中 TBHQ 的含量。 樣品預處理優(yōu)化實驗 本實驗依國標方法 （ GB/）中的測定油脂中 TBHQ（叔丁基對苯二酚）的方法的基礎之上對菜籽油中 TBHQ 測定方法進行改進研究，主要是對油脂預處理方面進行改變處理，獲得最佳的檢測效果的預處理條件，最后對該方法的檢測結果與國標方法的檢測結果在準確度和精密度方 面進行對照比較，驗證該方法的可行性。 提取溶劑選擇 本實驗是在國標方法中采用乙醇作為提取溶劑的基礎上，研究再采用有機溶劑甲醇、乙腈分別對植物油中的 TBHQ 進行提取，并采用加標回收的方法確定三種溶劑對植物油的提取效果。具體操作步驟： 吸取 2mL 的菜籽油，分別加入 100ug/mL 的標準品 2mL，分別吸取 5mL 的甲醇、乙醇和乙腈對菜籽油進行提取，按照 的方 法對樣品進行處理，每個樣品平行做五次，然后用氣相色譜進行自動進樣測定，計算比較計算結果，回收率較好者為最佳。 提取條件優(yōu)化 在上述得出最佳的提取溶劑后，在本實驗可能影響到抗氧化劑的因素有提取溶劑的總體積、混勻時間、溶劑提取次數(shù)和水浴溫度，采用加標回收的方法，均在樣品中加入100ug/mL 的 TBHQ 標準品 2mL。 2020級食品科學與工程畢業(yè)論文 9 單因素實驗 （ 1）提取溶劑體積 選取提取溶劑分別為 2mL、 4mL 和 6mL 和 8mL 的乙醇溶液對樣品進行提取三次，按照 方法，其他條件不變，測定其回收率 （ 2） 混合時間 分別選取混合時間分別為 1min、 3min 和 5min，其他條件不變，測定其回收率。 （ 3） 提取 次數(shù) 分別選取提取次數(shù)為 2 和 3，其他條件不變，測定其回收率。 （ 4） 水浴溫度 分別選取水浴溫度為 60℃、 70℃、 80℃、 90℃和 100℃ ，其他條件不變，測定其回收率。 （ 5） 水浴時間 分別選取水浴時間為 10s、 20s、 30s 和 40s，其他條件不變，測定其回收率。 正交試驗 在單因素實驗的基礎上，選取提取溶劑的體積、混合時間、提取次數(shù)和水浴溫度四個因素水平進行正交優(yōu)化實驗，采取加標回收的方法得出最佳的溶劑提取條件，使樣品預處理條件為最優(yōu)。本實驗采用 L9(34 )進行正交優(yōu)化實驗 [15]見下表： 表 23 L9(34)正交試驗因素水平編碼表 水平 試驗因素 溶劑體積 /mL A 混合時間 /min B 提取次數(shù) C 水浴溫度 /℃ D 1 2 1 1 100 2 4 2 2 80 3 6 3 3 60 2020級食品科學與工程畢業(yè)論文 10 實驗結果評定 精密度測定 精密度： 指在相同條件下 N 次重復測定結果彼此相符合的程度。精密度大小用偏差表示，偏差越小，精密度越高。 本實驗直接采用標準樣品的精密度對其方法進行判定。其操作步驟如下： 采用國標方法精密度測定 吸取 TBHQ 標準品濃度分別為 50ug/mL、 100 ug/mL、 200 ug/mL 的溶液 2mL 于 25mL比色管中，加入 5mL 80%乙醇溶液，振搖 1min，靜置片刻，放入 90℃ 的水浴中加熱 30s，促其分層。分層后，將上清液用移液管轉移到 60mL 的瓷蒸發(fā)皿中，再用 5mL 的 80%的乙醇溶液重復提取兩次，提取液一并倒入蒸發(fā)皿中，將蒸發(fā)皿放在 60℃ 的水浴鍋上通風揮發(fā)近干（切勿蒸干）。在蒸發(fā)皿中加入二硫化碳， 用小玻璃棒少量多次洗滌蒸發(fā)皿中殘留物，轉移到 2mL 容量瓶中，試液作為試樣測定液。按照 的色譜條件進行自動進樣，每個組每個濃度平行做七次，測定其濃度含量，計算其平均值、標準差和相對標準偏差。 采用優(yōu)化后方法精密度測定 吸取 TBHQ 標準品濃度分別為 50ug/mL、 100 ug/mL、 200 ug/mL 的溶液 2mL 于 25mL比色管中，采用優(yōu)化后的條件，即加入 6mL 80%的乙醇溶液，振搖 2min，然后再用 6mL的乙醇溶液提取一次，放入 80℃ 的水浴鍋中水浴 30s，其它條件與國標方法相同。按 照 的色譜條件進行自動進樣，每個組每個濃度平行做七次，測定其濃度含量，計算其平均值、標準差和相對標準偏差。 將兩者測定的結果進行比較對照，確定哪種方法更為準確。 回收率測定 本實驗采用加標回收的方法測定回收率 [16] 采用國標方法測定回收率 用移液管分別取 TBHQ標準儲備液 100mg/mL、 150 mg/mL、 250 mg/mL 各 2mL于 25mL的比色管中，并在比色管中加入 2mL 的樣品（即菜籽油）溶液，加入 5mL 的 80%乙醇溶2020級食品科學與工程畢業(yè)論文 11 液（ 80%乙醇是將 95%乙醇 80mL 和 15mL 蒸餾水混合配置而成）。振搖 1min，靜置片刻，放入 90℃ 左右的水浴中加熱 30s，待其分層。分層后，將上層澄清提取液用吸管轉移到蒸發(fā)皿中（切勿將油滴帶入）。再用 5mL 的 80%乙醇溶液重復提取兩次。提取液一并加入到蒸發(fā)皿中。將蒸發(fā)皿放入 60℃ 的水浴上通風揮發(fā)或自然揮發(fā)至近干（切勿蒸干）并同時做空白實驗 [17]。 在蒸發(fā)皿中加入二硫化碳，用小玻璃棒少量多次洗滌蒸發(fā)皿中殘留物，轉移到 2mL 容量瓶中，試液作為試樣測定液。每個加標濃度做六次平行試驗，利用標準曲線查出樣品加標回收的濃度，取平均值并計算回收率 [18]。 采用優(yōu)化處理方法測定回收率 用移液管分別吸取 TBHQ 標準儲備液 100mg/mL、 150 mg/mL、 250 mg/mL 各 2mL 于25mL 的比色管中，并在比色管中加入 2mL 的樣品（即菜籽油）溶液，采用優(yōu)化后的條件，即加入 6mL 80%的乙醇溶液，振搖 2min，然后再用 6mL 的乙醇溶液提取一次，放入 80℃的水浴鍋中水浴 30s，其它條件與國標方法相同。每個加標濃度也是平行做六次，計算回收率。將兩種方法測定的回收率進行比較對照。 3 結果與分析 氣相色譜法繪制叔丁基對苯二酚（ TBHQ）的標準曲線 采用國標方法，將標準樣品稀釋成濃度為 50ug/mL、 100ug/mL、 150ug/mL、 200ug/mL、250ug/mL 的標準液，采用氣相自動進樣，測得結果以濃度 （ ug/mL） 為橫坐標，以峰面積（ UV*S） 為縱坐標繪制標準曲線，其結果見表 31和圖 31。 表 31 標準品濃度與峰面積表 濃度 (ug/mL) 峰面積 （ UV*S） 69094 127370 193676 240462 319013 2020級食品科學與工程畢業(yè)論文 12 0 25000 50000 75000 100000 125000 150000 175000 202000 225000 250000 275000 300000 峰面積0 . 0 00 . 2 50 . 5 00 . 7 51 . 0 01 . 2 5