【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 提取分離 3 酸、亞油酸、油酸 ， 經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知還含有花生四烯酸、花生酸 [3]、二十碳 — 烯酸、二十碳烷酸。其主要成分及含量如表所示 ： 表 21紫蘇子油的脂肪酸組成 (%) 成分 亞麻酸 亞油酸 油酸 棕櫚酸 花生酸 硬脂酸 含量 （二） 氨基酸 紫蘇子約含有 18 種氨基酸 ，其中動(dòng)物必需氨基酸含量較高。例如，賴(lài)氨酸、含硫氨基酸 [4]等。這十八種氨基酸 分別為： 天門(mén)冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、胱氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、賴(lài)氨酸、組氨酸、精氨酸、色氨酸 。各主要成分及含量如表所示 ： 表 22 紫蘇子的氨基酸含量 (W/%) 氨基酸 含量 氨基酸 含量 氨基酸 含量 天門(mén)冬氨酸 丙氨酸 絡(luò)氨酸 蘇氨酸 胱 氨酸 苯丙氨酸 絲氨酸 纈氨酸 賴(lài)氨酸 谷氨酸 甲硫氨酸 組氨酸 甘氨酸 異亮氨酸 精氨酸 脯氨酸 亮氨酸 色氨酸 （三） 黃酮類(lèi)和多酚類(lèi)化合物 紫蘇子的醇提取物所得到的成分主要是黃酮和多酚類(lèi)化合物 ，且結(jié)果表示兩者含量較豐富 [5]。紫蘇子中 黃酮和多酚類(lèi)化合物的主要成分為咖啡酸、迷迭香酸、兒茶素、槲皮素、黃酮醇等 [6][7]。楊曉 靜等 [8]采用氣相色譜法和快速硅膠柱 色譜 法對(duì)紫蘇油中甾醇、4甲基甾醇和三甾醇等不皂化物的成分進(jìn)行分離和分析 ， 同時(shí)采用氣相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用確定 了 7種甾醇類(lèi)化合物 ， 分別為菜油甾醇 (Campesterol)、膽甾醇 (Cholesterol)、豆甾醇 (Stigmasterol)、 α 波菜甾醇 (αSpinasterol)、 β 谷甾醇 (βSitosterol)。 紫蘇子有效成分的提取分離 4 （四） 微量元素、礦質(zhì)元素 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)紫蘇子中含有鐵、鋅、銅、鉀、鈣、鎂、鈉、磷、猛、砷、汞、釩、鎳、硅、硼、鉻、鉛、銘等 18 種礦物質(zhì)元素，還可分離得到谷 維素、 β 胡蘿卜素、抗過(guò)敏的多元酚、 VB VB VE 等。 表 23 紫蘇子中的維生素、礦質(zhì)元素含量 (mg/kg) 維生素 含量 元素 含量 元素 含量 元素 含量 VB2 P Al Zn VB1 Ca Na Co VC K Mn Cr VE Mg Cu Pb β 胡蘿卜素 Fe Ni Hg （五） 其它 從紫蘇子中可以分離得到 %的谷維素、磷脂等 [9]。 二、 藥理活性的研究 （一） 降血脂 紫蘇子的脂肪油提取物具有明顯的降血脂作用。陳氏等 [10]研究發(fā)現(xiàn)大豆肽和紫蘇子油制成的制劑降脂肽可以顯著降低高血脂模型大鼠的血清中 TC及 TG濃度 ， 明顯升高HDLC水平 ， 停止灌胃 1周后 ,仍可使血清中 TG 維持在較低水平。譚氏等 [11]報(bào)道紫蘇子油對(duì)大鼠脂代謝紊亂有預(yù)防作用 ， 對(duì)兔實(shí)驗(yàn)性高脂血癥有改善作用。郭氏等 [12]的試驗(yàn)結(jié)果也表明紫蘇子油對(duì)高脂血癥大鼠均有一定的調(diào)整血脂的作用 ， 且作用優(yōu)于對(duì)照組。分析其 作用機(jī)制 ， 可能是紫蘇子富含 α 亞麻酸 (十八碳三烯酸 )是 ω 3 長(zhǎng)鏈多烯長(zhǎng)飽和脂肪酸 二十碳五烯酸 (EPA)和二十二碳六烯酸 (DHA)的前體物質(zhì)。在體內(nèi)酶的作用下 ，α 亞麻酸轉(zhuǎn)變?yōu)?EPA 和 DHA， 后者通過(guò)抑制 TC 合成酶的限速酶羥甲基戊二酸單酰鋪酶A 還原酶的活性而減少體內(nèi) TC的合成 ， 同時(shí) ω 3 脂肪酸能刺激 TC代謝為膽酸和中性固醇而從糞便排除 ， 從而降低血脂。 紫蘇子有效成分的提取分離 5 （二） 促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力 紫蘇子中的脂肪油提取物具有促進(jìn)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的作用。文獻(xiàn)報(bào)道從紫蘇子提取有脂肪油 ， 可減少小鼠跳臺(tái)錯(cuò)誤次數(shù) ， 能明顯提高小鼠水迷路測(cè) 驗(yàn)的正確百分率 ，縮短到達(dá)終點(diǎn)時(shí)間 ， 并能促進(jìn)小鼠腦內(nèi)核酸及蛋白質(zhì)的合成 ， 調(diào)節(jié)小鼠腦內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)水平 [13]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證明 ， 如果在食物中加入富含 α 亞麻酸飼料進(jìn)行子鼠二代培養(yǎng) ， 可提高子代小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力 ， 使子代小鼠視網(wǎng)膜中的 DHA 增加 ， 視網(wǎng)膜反射能增強(qiáng) [14]。以上研究表明紫蘇子促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力作用的機(jī)制可能是與其富含的 α 亞麻酸有關(guān)。 （三） 止咳、平喘作用 紫蘇子提取的脂肪油有明顯的止咳和平喘作用。王氏等 [15]報(bào)道小鼠腹腔注射5gkg 1 紫蘇子油后 ， 對(duì)噴霧組織胺和乙酰膽堿所致的支氣管哮喘 ， 能明顯 延長(zhǎng)出現(xiàn)喘息性抽搐的潛伏期 ， 與對(duì)照組比較有非常顯著差異 (P),其作用與 kg 1氦茶堿相似。小鼠灌服 5gkg 1和 kg 1紫蘇子油后 ， 咳嗽潛伏期顯著延長(zhǎng) ， 咳嗽次數(shù)顯著減少 ， 與對(duì)照組比較均有非常顯著差異 (P)， 其作用與 kg 1咳必清相似。 （四） 抗衰老作用 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為 ， 自由基是導(dǎo)致衰老的重要因素之一 ， 其代謝產(chǎn)物之一 MDA(過(guò)氧化產(chǎn)物 )的含量可反映細(xì)胞被氧化程度 ，而 SOD(過(guò)氧 6 化物歧化酶 )通過(guò)對(duì)氧離子起歧化作用合成 H2O2， 再由其他抗氧化酶連續(xù)代謝 變成水 ， 清除自由基 ,從而保護(hù)細(xì)胞不受毒性氧自由基的損害 ， 而達(dá)到減緩衰老的作用。韓氏等 [16]報(bào)道紫蘇油可明顯降低腦及肝中 MDA 含量 ， 對(duì)腦的作用優(yōu)于肝 ， 還可顯著提高紅細(xì)胞中 SOD 活力。因此認(rèn)為紫蘇油具有很好的抗衰老作用。 紫蘇子有效成分的提取分離 6 （五） 抗過(guò)敏作用 通過(guò)比較用紫蘇子油組 (富含亞麻酸 )和紅花油組 (富含亞油酸 )飼養(yǎng)的小鼠對(duì)抗原誘發(fā)的過(guò)敏性休克的死亡率 ， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)紫蘇子油組比紅花油組明顯降低。紫蘇子之所以具有抗過(guò)敏作用機(jī)理 ， 是因?yàn)槠渌械?α 亞麻酸在體內(nèi)代謝過(guò)程中 ,通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)酶系統(tǒng) ， 能抑制亞油酸向花生四烯酸 (AA)轉(zhuǎn)化 ,降低 體內(nèi) AA水平。同時(shí) α 亞麻酸轉(zhuǎn)化的 EPA和 DHA， 可直接抑制 AA 向二十碳物質(zhì) (致敏物質(zhì) )的代謝 [17]。 （六） 其它作用 還有文獻(xiàn)報(bào)道從紫蘇子中提取的紫蘇子油具有抑制結(jié)腸癌、腎臟腫瘤的作用 ， 其種皮具有防止油脂及其它食用物品氧化的作用 [18]。 第三章 紫蘇子有效成分的提取 紫蘇子屬于中藥產(chǎn)品， 中藥 所含的化學(xué)成份十分復(fù)雜，既含有多種有效成份，又有無(wú)效成份，也包含有毒成份。由 此可知 ，其有效成分的提取過(guò)程比較復(fù)雜。因此中藥有效成分的提取技術(shù)成為中藥研究領(lǐng)域中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。 中藥提取是應(yīng)用一些可行的技術(shù)對(duì)其有效成分進(jìn)行最大程度的提取，其提取過(guò)程使得中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)過(guò)程中非常重要的環(huán)節(jié) ， 提取的方法 、 流程 、 操作設(shè)備等都關(guān)系到中藥能否發(fā)揮它的最大或最好治療效果 ，這對(duì)于中藥的臨床應(yīng)用十分重要。 傳統(tǒng)的提取方法例如 ， 板框過(guò)濾法 、 離心法、樹(shù)脂吸附法 、 醇沉法等工藝對(duì)中藥提取液的澄清和提純精制等操作存在較多問(wèn)題 。除此之外， 過(guò)濾操作比較困難容易堵塞、樹(shù)脂孔堵塞、溶劑消耗大 、 生產(chǎn)提取的廢水量大、容易造 成環(huán)保負(fù)擔(dān)等問(wèn)題。 從中藥材中提取活性成分的方法有溶劑法、水蒸氣蒸餾法、及升華法等。由于水蒸氣蒸餾法及升華法的應(yīng)用范圍有限，所以常采用溶劑法對(duì)中藥有效成分進(jìn)行提取。溶劑提取法系根據(jù)藥材的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)娜軇⑵渲械幕瘜W(xué)成分從藥材中提取出來(lái)。一般情況下，藥材須經(jīng)干燥并適當(dāng)粉碎，這樣有利于增大藥材與溶劑的接觸面積，提高萃取效率。紫蘇子成分中脂肪油等油脂性化合物因?yàn)闃O性較小，易溶于氯仿、乙醚等親脂性溶劑中，因此在進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn)時(shí)選擇石油醚對(duì)其成分中的脂肪油進(jìn)行提??；而糖苷、氨基酸等類(lèi)成分則極性較大，易溶于水及含水醇中 ；酸性、堿性及兩性化合物，存在狀態(tài)隨紫蘇子有效成分的提取分離 7 溶液 PH 的改變而改變，故溶解度也隨 PH 的改變而改變。但是從藥材中提取活性成分時(shí)，由于存在多種成分間的相互助溶作用，情況要復(fù)雜得多。因此，從藥材中提取活性成分很難有一個(gè)固定的模式。通常需根據(jù)提取要求、目的成分及雜質(zhì)的性質(zhì)差別以及溶劑的溶解能力來(lái)確定。一般，可將固體藥材按提取用的溶劑的極性遞增方式，用不同溶劑，如石油醚或汽油（可提出油脂、蠟、葉綠素、揮發(fā)油、游離甾體及三萜類(lèi)化合物）、氯仿或乙酸乙酯（可提出游離生物堿、有機(jī)酸及黃酮、香豆素的苷元等中等極性化合物）、丙酮或乙醇、甲 醇（可提出苷類(lèi)、生物堿鹽以及鞣質(zhì)等極性化合物）及水（可提出氨基酸、糖類(lèi)、無(wú)機(jī)鹽等水溶性成分 ） 依次進(jìn)行提取。得到的各個(gè)部分經(jīng)活性測(cè)試確定有效部位后再做進(jìn)一步分離。本次試驗(yàn)主要從采用溶劑法提取中的回流提取法，下面依次介紹溶劑法提取的原理、回流提取法以及其他幾種溶劑提取法。 一、 溶劑提取法 溶劑提取法是中草藥提取操作過(guò)程中應(yīng)用最廣泛的方法，主要是根據(jù)中草藥中各種有效成分溶解度的差異，在提取過(guò)程中選用對(duì)所需成分的溶解度較大而對(duì)雜質(zhì)溶解度較小的溶劑對(duì)藥材有效成分進(jìn)行提取 。中草藥經(jīng)粉碎加入溶劑后 ，溶劑擴(kuò)散并滲入到藥材的細(xì)胞內(nèi)，將可溶性物質(zhì)進(jìn)行溶解，從而細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生濃度差，細(xì)胞內(nèi)的液體不斷向外擴(kuò)散，溶劑又不斷進(jìn)入藥材組織細(xì)胞中，最終細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡 ，溶液達(dá)到飽和。將飽和溶液過(guò)濾收集并加入新溶劑，從而把有效成分最大程度的提取出來(lái) 。 二、 溶劑提取法的原理 溶劑法提取的原理是“相似者相溶”。提取過(guò)程是根據(jù)藥材的性質(zhì)選擇合適的溶劑對(duì)其有效成分進(jìn)行提取。化合物親水性和親脂性程度的大小與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，一般來(lái)說(shuō)，兩種基本母核相同的成分，其分子中的官能團(tuán)的極性越大或極性官能團(tuán)數(shù)目越多，則整個(gè)分子的極性就越大，表現(xiàn)親水性越 強(qiáng)，而親脂性越弱。其分子非極性部分越大或碳鏈越長(zhǎng)，則極性越小，親脂性越強(qiáng)，而親水性越弱。紫蘇子成分中脂肪油等油脂性化合物因?yàn)闃O性較小，易溶于氯仿、乙醚等親脂性溶劑中，因此在進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn)時(shí)選擇石油醚對(duì)其成分中的脂肪油進(jìn)行提取；而糖苷、氨基酸等類(lèi)成分則極性較大，易溶于水及含水醇中；酸性、堿性及兩性化合物，存在狀態(tài)隨溶液 PH的改變而改變，故溶解度也隨 PH的改變而改變。常見(jiàn)溶劑的極性強(qiáng)弱順序可表示如下：石油醚（低沸點(diǎn) — 高沸點(diǎn)）紫蘇子有效成分的提取分離 8 ＜二硫化碳＜四氯化碳＜三氯乙烯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜水＜吡啶＜ 乙酸。 從藥材中提取活性成分時(shí)，由于存在多種成分間的相互助溶作用，情況要復(fù)雜得多。因此，從藥材中提取活性成分很難有一個(gè)固定的模式。 三、 提取實(shí)驗(yàn) （一） 回流提取法 回流提取法是用乙醇等易揮發(fā)的有機(jī)溶劑來(lái)將原料的的有效成分提取 ，提取過(guò)程中 將浸出液加熱蒸餾，則揮發(fā)性的有機(jī)溶劑會(huì)餾出 ， 后又被冷卻，重復(fù)此操作，直至有效成分被最大程度的回流提取的方法。 蒸餾過(guò)程時(shí)間較長(zhǎng)，故此方法不適用于受熱易遭破壞的原料成分的提取 。 有機(jī)溶劑加熱提取時(shí)，應(yīng)采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。如果是在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行小量操作，可用連有回流 冷凝管的圓底燒瓶。水浴加熱，浸取溶劑一般浸過(guò)藥材表面約 1～ 2cm，一般在沸騰狀態(tài)下回流約 1小時(shí)后放冷過(guò)濾，再在藥渣中加入溶劑，進(jìn)行第二次加熱回流，重復(fù)此操作，每次約半小時(shí)，直到有效成分基本全部被提取出來(lái)為止。此法提取效率較冷浸法高，但只適用于小量生產(chǎn)，且受熱易破壞的成分不宜用此法，且溶劑消耗量大，操作麻煩。 （二） 實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程 提?。喝?200g 紫蘇子藥材粉碎后用加入 10倍量的石油醚（ 6090℃）回流 3次，每次 2h,得到黃色透明溶液，合并，過(guò)濾，減壓濃縮蒸發(fā)至干，得到黃色油狀液體， g,(查文獻(xiàn) )即石油 醚提取物（主要成分為脂肪油）。將殘?jiān)栏珊?，加?10 倍量的 75%乙醇，回流 2次，每次 2h, 得到深黃色溶液，合并每次所得溶液，過(guò)濾，減壓濃縮至干，得浸膏 ，即紫蘇子醇提取物。（主要成分是黃酮）。 表 31 實(shí)驗(yàn)所用儀器與設(shè)備 儀器名稱(chēng) 生產(chǎn)廠家 RE52 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠 FA2204B 電子分析天平 上海精科公司 SHBB95A循環(huán)水真空水泵 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司 CLF06C 中藥粉碎機(jī) 浙江溫嶺市創(chuàng)立藥材器械廠 紫蘇子有效成分的提取分離 9 KQ500DE 型超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司 ZF20D 暗式紫外分析儀 上海顧村電光儀器廠 海利 AC09601 靜音水泵 中山市綠資園藝發(fā)展有限公司 表 32 原料與試劑 藥品名稱(chēng) 生產(chǎn)廠家 95%乙醇 (AR) 天津市富宇精細(xì)化工有限公司 石油醚 (AR) 天津市富宇精細(xì)化工有限公司 醋酸 (AR) 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 葡聚糖凝膠 (Sephadex LH20) 北京綠百草科技發(fā)展有限公司 丙酮 (AR) 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 正己烷 (AR) 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 乙酸乙酯 (AR) 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 甲苯 (AR) 天津市科密歐