20xx年唾液淀粉酶活性的觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文(編輯修改稿)
2025-01-26 00:43 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 β淀粉酶是其中最主要的兩種，存在于禾谷類的種子中。β淀粉酶存在于休眠的種子中，而α淀粉酶是在種子萌發(fā)過(guò)程中形成的。
α淀粉酶活性是衡量小麥穗發(fā)芽的一個(gè)生理指標(biāo),α淀粉酶活性低的品種抗穗發(fā)芽,反之則易穗發(fā)芽。目前,關(guān)于α淀粉酶活性的測(cè)定方法很多種,活力單位的定義也各不相同,國(guó)內(nèi)外測(cè)定α淀粉酶活性的方法常用的有凝膠擴(kuò)散法、3 ,5二硝基水楊酸比色法和降落值法 。這3 種方法所用的材料分別是新鮮種子、萌動(dòng)種子和面粉,獲得的α淀粉酶活性應(yīng)該分別是延
二、實(shí)驗(yàn)原理
萌發(fā)的種子中存在兩種淀粉酶，分別是α淀粉酶和β淀粉酶，β淀粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化，而α淀粉酶不耐酸。本實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)利用β淀粉酶不耐熱的特性，在高溫下（70℃）下處理使得β淀粉酶鈍化而測(cè)定α淀粉酶的酶活性。
酶活性的測(cè)定是通過(guò)測(cè)定一定量的酶在一定時(shí)間內(nèi)催化得到的麥芽糖的量來(lái)實(shí)現(xiàn)的，淀粉酶水解淀粉生成的麥芽糖，可用3,5二硝基水楊酸試劑測(cè)定，由于麥芽糖能將后者還原生成硝基氨基水楊酸的顯色基團(tuán)，將其顏色的深淺與糖的含量成正比，故可求出麥芽糖的含量。常用單位時(shí)間內(nèi)生成麥芽糖的毫克數(shù)表示淀粉酶活性的大小。然后利用同樣的原理測(cè)得兩種淀粉酶的總活性。實(shí)驗(yàn)中為了消除非酶促反應(yīng)引起的麥芽糖的生成帶來(lái)的誤差，每組實(shí)驗(yàn)都做了相應(yīng)的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，在最終計(jì)算酶的活性時(shí)以測(cè)量組的值減去對(duì)照組的值加以校正。
在實(shí)驗(yàn)中要嚴(yán)格控制溫度及時(shí)間，以減小誤差。并且在酶的作用過(guò)程中，四支測(cè)定管及空白管不要混淆。
三、材料、試劑與儀器
實(shí)驗(yàn)材料：
萌發(fā)的小麥種子（芽長(zhǎng)1厘米左右） 儀器：
722光柵分光光度計(jì)(編號(hào)990695)
DKS24型電熱恒溫水浴鍋(編號(hào)L304056)離心機(jī)(TDL40B)
容量瓶：50ml1，100ml1 小臺(tái)秤 研缽
具塞刻度試管：15ml6 試管：8支 移液器 燒杯 試劑：
① 1%淀粉溶液（稱取1克可溶性淀粉，加入80ml蒸餾水，加熱熔解，冷卻后定容至100ml）； ② ：
A液（，溶解后定容至1L） B液（，溶解后定容至1L）
?。?br /> ?、?3，5二硝基水楊酸溶液（稱取3，溶于20ml 1M氫氧化鈉中，加入50ml蒸餾水，再加入30克酒石酸鈉，待溶解后，用蒸餾水稀釋至100ml，蓋緊瓶蓋保存）；
?、?麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)液（，溶于少量蒸餾水中，小心移入100ml容量瓶中定容）；
?、? NaOH
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 酶液的制備
稱取2克萌發(fā)的小麥種子與研缽中，加少量石英砂，研磨至勻漿，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中用蒸餾水定容至刻度，混勻后在室溫下放置，每隔數(shù)分鐘振蕩一次，提取1520分鐘，于3500轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取上清液備用。
?、?取4支管，注明2支為對(duì)照管，另2支為測(cè)定管
?、?于每管中各加酶提取液液1ml，在70℃恒溫水浴中（水浴溫度的變化不應(yīng)超過(guò)177。℃）準(zhǔn)確加熱15min，在此期間β淀粉酶鈍化，取出后迅速在冰浴中徹底冷卻。
?、?在試管中各加入1ml檸檬酸緩沖液
?、?向兩支對(duì)照管中各加入4ml NaOH，
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