α-淀粉酶菌株搖瓶發(fā)酵初篩及酶活力測(cè)定(編輯修改稿)
2025-06-21 23:05 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 式 150轉(zhuǎn) /分鐘） 14~16hr。 上課當(dāng)天上午 8： 00~8： 30將上述搖瓶培養(yǎng)好的菌種，用 1mL無(wú)菌吸管吸取 1mL接種于 50mL種子培養(yǎng)基中（裝于250mL三角瓶）， 37 ℃ 搖瓶培養(yǎng)（旋轉(zhuǎn)式 150轉(zhuǎn) /分鐘） 8~10hr。 所選菌株產(chǎn) α淀粉酶搖瓶發(fā)酵復(fù)篩試驗(yàn)的安排 當(dāng)天上課時(shí)間制備發(fā)酵培養(yǎng)基， 3~5瓶 /株菌（ 100mL/瓶），滅菌。 將搖瓶培養(yǎng)好的菌種，用 2mL無(wú)菌吸管吸取 2mL接種于 100mL發(fā)酵培養(yǎng)基中（裝于 500mL三角瓶）， 37 ℃ 搖瓶培養(yǎng)（旋往復(fù)式 110轉(zhuǎn) /分鐘） 2天。 2天后小漏斗脫脂棉花過(guò)濾發(fā)酵液。 測(cè)定發(fā)酵液中 α淀粉酶酶活力單位（碘比色法）。 根據(jù)結(jié)果可以判斷所選菌株產(chǎn)酶能力是否穩(wěn)定。 實(shí)驗(yàn) α淀粉酶活力測(cè)定方法介紹 酶活力測(cè)定的方法 碘比色法（有相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)） 在一定反應(yīng)條件下， 1小時(shí)轉(zhuǎn)化 1g淀粉變?yōu)楹拿噶慷x為 1個(gè)酶活力單位 3， 5二硝基水楊酸比色法（ DNS法） 在一定反應(yīng)條件下， 1分鐘反應(yīng)生成 1mg麥芽糖的酶量定義為 1個(gè)酶活力單位 注意：去除 β淀粉酶的干擾 醫(yī)學(xué)上的一些測(cè)定方法（專(zhuān)用試劑盒，通過(guò)生化儀器反應(yīng)測(cè)定，需要微量快速） α淀粉酶酶活力測(cè)定的原理 底物（反應(yīng)物）為淀粉 產(chǎn)物為麥芽糖、糊精等 酶活力測(cè)定（碘比色法 —— 目視） 酶活力定義：在 60℃ 下 1小時(shí)內(nèi)將 1克淀粉轉(zhuǎn)化為糊精的酶量稱一個(gè)酶活力單位（ 5~10分鐘反應(yīng)完成）。 淀粉及糊精檢測(cè)原理：碘檢測(cè) 淀粉（紫藍(lán)色， 30分子以上） → 紅色糊精（紅棕色， 730分子） → 無(wú)色糊精， 7分子以下） → 麥芽糖（不顯色） → 葡萄糖（不顯色） 計(jì)算公式：
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