【正文】 250mm）、容量瓶、移液管、燒杯、PH計(jì)。供試品對(duì)照組：取1:10供試液1ml，按試驗(yàn)組供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定其菌數(shù)。其中： ，限度：應(yīng)符合規(guī)定。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅴ D）試驗(yàn)，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按上表梯度進(jìn)行洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為261nm。取系統(tǒng)適用性溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質(zhì)Ⅲ、Ⅰ、沃諾拉贊、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ依次出峰，理論板數(shù)按沃諾拉贊峰計(jì)算應(yīng)不低于5000，且沃諾拉贊峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。限度：供試品溶液中沃諾拉贊峰與對(duì)照品溶液中沃諾拉贊峰保留時(shí)間應(yīng)一致。 鑒別 檢查方法：高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計(jì)。分別取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對(duì)照品各適量，精密稱定，作為雜質(zhì)對(duì)照品溶液。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）； 紫外檢測(cè)器（檢測(cè)波長(zhǎng)為261nm）； 流動(dòng)相：（）為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按下表梯度進(jìn)行洗脫； 溶劑：流動(dòng)相A； 流速：。具體試驗(yàn)操作：取本品，照溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄X C第二法），轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液適量濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)定量稀釋成每1ml中約含沃諾拉贊11μg的溶液，作為供試品溶液；另取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)照品適量，用溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊11μg的溶液，作為對(duì)照品溶液，精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各20μl，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，計(jì)算每片的溶出量。按外標(biāo)法以峰面積分別計(jì)算每片中沃諾拉贊的含量。直接接種法：取1:，分別加入1ml約含50～100cfu/m15株試驗(yàn)菌。觀察后，沿培養(yǎng)管的管壁加人數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽(yáng)性；呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。 分析方法的驗(yàn)證 按照《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過(guò)程技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》等以及《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄中有關(guān)的指導(dǎo)原則提供以下方法學(xué)驗(yàn)證資料。溶液穩(wěn)定性供試品溶液、對(duì)照溶液、雜質(zhì)對(duì)照品溶液室溫放置12小時(shí)內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。破壞性試驗(yàn) 破壞試驗(yàn)溶液的配制與處理：溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白→20ml無(wú)降解處理未破壞+→20ml無(wú)降解處理高溫破壞+→20ml水浴100℃加熱13小時(shí)高溫空白→20ml水浴100℃加熱13小時(shí)光照破壞+→20ml光照箱4500LX照射45小時(shí)光照空白→20ml光照箱4500LX照射45小時(shí)酸破壞+→20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時(shí)酸空白→20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時(shí)堿破壞+→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時(shí)堿空白→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時(shí)氧化破壞+→20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時(shí)氧化空白→20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時(shí)取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。將上述100片樣品置于研缽中研細(xì)，混勻，作為供試品粉末。 取重復(fù)性項(xiàng)下供試品，由不同試驗(yàn)人員分別在不同日期、不同儀器檢查其有關(guān)物質(zhì)。供試品溶液：取20140701批原料適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相A適量，使充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；按外標(biāo)法計(jì)算各已知雜質(zhì)的百分含量。（～75，制劑的質(zhì)量控制一第129~139頁(yè)）按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品溶液中各雜質(zhì)的量。（~102，制劑的質(zhì)量控制一第140~166頁(yè)） 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗(yàn)結(jié)果1耐用性研究項(xiàng)目方法及條件耐用范圍沃諾拉贊雜質(zhì)Ⅰ雜質(zhì)Ⅱ雜質(zhì)Ⅲ雜質(zhì)Ⅳ雜質(zhì)Ⅴ雜質(zhì)Ⅵ分離度分離度分離度分離度分離度分離度分離度色譜原條件 流速流動(dòng)相比例54465050pH值鹽濃度 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗(yàn)結(jié)果2耐用性研究項(xiàng)目方法及條件耐用范圍雜質(zhì)Ⅲ%雜質(zhì)Ⅰ%雜質(zhì)Ⅱ%雜質(zhì)Ⅳ%雜質(zhì)Ⅴ%雜質(zhì)Ⅵ%單雜%總雜%色譜原條件流速流動(dòng)相比例54465050pH值鹽濃度平均值（%）RSD（%）結(jié)論：此方法測(cè)定本品有關(guān)物質(zhì)耐用性良好。溶液穩(wěn)定性供試品溶液室溫放置8小時(shí)內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白→20ml無(wú)降解處理未破壞→20ml無(wú)降解處理高溫破壞→20ml水浴100℃加熱5小時(shí)高溫空白→20ml水浴100℃加熱5小時(shí)光照破壞→20ml光照箱4500LX照射40小時(shí)光照空白→20ml光照箱4500LX照射40小時(shí)酸破壞→20ml1mol/L鹽酸1ml，室溫放置10分鐘酸空白→20ml1mol/L鹽酸1ml，室溫放置10分鐘堿破壞→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，室溫放置1小時(shí)堿空白→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，室溫放置1小時(shí)氧化破壞→20ml30%雙氧水3ml，氧化空白→20ml30%雙氧水3ml，取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。將上述100片樣品置于研缽中研細(xì)，混勻，作為供試品粉末。 取重復(fù)性項(xiàng)下供試品，由不同試驗(yàn)人員分別在不同日期、不同儀器檢查。同法配制3份。 耐用性試驗(yàn) 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時(shí)的耐用性情況，通過(guò)改變流動(dòng)相比例、流動(dòng)相pH值、流動(dòng)相鹽濃度、流速、色譜柱廠家等色譜因素進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算含吡啶3磺酸的量。線性和范圍試驗(yàn) 同原料藥。 照含量測(cè)定的色譜條件，精密量取上述溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，同法測(cè)定6次，考察重復(fù)性。耐用性試驗(yàn) 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時(shí)的耐用性情況，通過(guò)改變色譜柱、流速和流動(dòng)相比例、鹽濃度、pH值等色譜因素進(jìn)行試驗(yàn)。準(zhǔn)確度%～%，%溶液穩(wěn)定性供試品溶液室溫放置10小時(shí)穩(wěn)定性良好。取本品與空白輔料片劑，照溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅹ C第二法），溫度為37℃177。 回收率試驗(yàn) 稱取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)照品（%）9份（），按處方比例分別加入輔料，分別置100ml容量瓶中，加溶出介質(zhì)充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液5ml，置50ml容量瓶中，加溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為回收率供試品溶液；另取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)照品約15mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。（~52，制劑的質(zhì)量控制二第233~248頁(yè)） 富馬酸沃諾拉贊片溶出度檢查精密度試驗(yàn)結(jié)果序號(hào)123456平均RSD%峰面積結(jié)論：此法測(cè)定本品溶出度精密度良好。精密量取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。批間一致性考察 根據(jù)上述不同溶出介質(zhì)中溶出曲線考察數(shù)據(jù)計(jì)算中試三批樣品溶出度的批間差異，考察三批樣品的一致性，、16。（~494，制劑的質(zhì)量控制三第139~274頁(yè)、四第9~144頁(yè)） 富馬酸沃諾拉贊片（規(guī)格：10mg）溶出均一性試驗(yàn)結(jié)果時(shí)間累積溶出度%平均RSD%123456201503012min3min5min10min30min201503022min3min5min10min30min201503032min3min5min10min30min上市制劑2min3min5min10min30min 富馬酸沃諾拉贊片（規(guī)格：20mg）溶出均一性試驗(yàn)結(jié)果批號(hào)時(shí)間累積溶出度%平均RSD%123456201503042min3min5min10min30min201503052min3min5min10min30min201503062min3min5min10min30min上市制劑2min3min5min10min30min結(jié)論：各批樣品溶出均一性良好。（~58，制劑的質(zhì)量控制二第249~254頁(yè)） 富馬酸沃諾拉贊片溶出度檢查穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果時(shí)間（h）0246810平均RSD%峰面積942022938275952109954516952910956562949399 結(jié)論：供試品溶液穩(wěn)定性良好。計(jì)算回收率。精密量取供試品溶液、溶出介質(zhì)、輔料溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。精密度%，該方法精密度良好。（~210，制劑的質(zhì)量控制二第117~196頁(yè)） 富馬酸沃諾拉贊片含量測(cè)定耐用性試驗(yàn)結(jié)果耐用性研究項(xiàng)目方法及條件耐用范圍測(cè)得含量%標(biāo)準(zhǔn)原條件色譜柱C18柱，品牌島津流速（ml/min）流動(dòng)相鹽濃度（mol/l）PH值流動(dòng)相比例50:5054:46平均值（%）RSD（%）結(jié)論：此方法測(cè)定富馬酸沃諾拉贊片含量耐用性良好。 照重復(fù)性試驗(yàn)的色譜條件，由2個(gè)不同試驗(yàn)人員在不同日期、不同儀器對(duì)本品進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)測(cè)定6次，考察精密度。 定量限 同原料藥。取重復(fù)性項(xiàng)下供試品（約含沃諾拉贊10mg）適量，置20ml量瓶中，加流動(dòng)相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。同法配制3份。 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品溶液：取重復(fù)性項(xiàng)下供試品（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg）適量，精密稱定，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相A適量，振搖，使沃諾拉贊充分溶解，加流動(dòng)相A稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。，取雜質(zhì)Ⅶ，混合均勻，作為供試品。定量限試驗(yàn) 同原料藥。 吡啶3磺酸檢查方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容儀器設(shè)備島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A二極管陣列檢測(cè)器島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A紫外檢測(cè)器色譜條件選擇及溶液配制 同原料藥采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為261nm；。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質(zhì)與相鄰雜質(zhì)分離良好，理論板數(shù)符合要求。 耐用性試驗(yàn) 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時(shí)的耐用性情況，通過(guò)改變流動(dòng)相比例、流動(dòng)相pH值、流動(dòng)相鹽濃度、流速等色譜因素進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算含雜質(zhì)的量