【正文】 計算每片在不同時間點的累積溶出度，、10。精密量取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。濾膜吸附試驗濾膜對溶液沒有吸附作用，采用濾膜過濾不會影響溶出度的測定。（~70，制劑的質(zhì)量控制二第9~56頁） 富馬酸沃諾拉贊片含量測定重復(fù)性試驗結(jié)果序號123456平均值RSD%含量(%)結(jié)論：此方法測定富馬酸沃諾拉贊片含量重復(fù)性良好。取雜質(zhì)Ⅶ工作對照品適量，精密稱定，作為對照品溶液。（~49，制劑的質(zhì)量控制一第204~215頁） 富馬酸沃諾拉贊片吡啶3磺酸檢查中間精密度試驗結(jié)果序號123456平均值RSD%吡啶3磺酸%結(jié)論：此法檢查本品的有關(guān)物質(zhì)中間精密度良好。（～25，制劑的質(zhì)量控制一第179~191頁） 富馬酸沃諾拉贊片吡啶3磺酸檢查破壞試驗結(jié)果名稱吡啶3磺酸總峰面積主峰面積%吡啶3磺酸峰面積吡啶3磺酸面積%物料平衡%分離度峰純度未 破 壞合格129089360937/高溫破壞合格134946966205光照破壞合格131575089733酸 破 壞合格1351111139062堿 破 壞合格1370201153110氧化破壞合格132680297055計算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/（破壞前總峰面積/濃度）結(jié)論：溶劑及輔料均不干擾本品的測定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測定本品有關(guān)物質(zhì)的專屬性良好。 吡啶3磺酸方法學(xué)驗證試驗項目驗證結(jié)果條件選擇C18柱，（）為流動相A，甲醇為流動相B，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為261nm。 富馬酸沃諾拉贊各已知雜質(zhì)的測定結(jié)果名稱雜質(zhì)Ⅰ雜質(zhì)Ⅱ雜質(zhì)Ⅲ雜質(zhì)Ⅳ雜質(zhì)Ⅴ雜質(zhì)Ⅵ測得含量%未檢出未檢出未檢出未檢出回收率溶液：1）取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ，雜質(zhì)Ⅲ，雜質(zhì)Ⅳ，雜質(zhì)Ⅴ，雜質(zhì)Ⅵ，精密稱定，置200ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密稱定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（80%濃度）溶液。分別取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對照品各適量，精密稱定，作為雜質(zhì)對照品溶液。耐用性采用不同色譜柱，不同的流動相比例、pH、鹽濃度等檢查本品的有關(guān)物質(zhì)，各已知雜質(zhì)的分離度均符合要求。本底對照的MUG和靛基質(zhì)試驗應(yīng)為陰性。依法測定10片中沃諾拉贊的含量。梯度如下表：時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）01000710001090910901000201000 具體試驗操作：取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）甲醇（52：48）為流動相A，甲醇為流動相B，按上表梯度進(jìn)行洗脫，檢測波長為230nm。 含量均勻度檢查方法：含量均勻度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ E） 高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。菌液組測定試驗所加入試驗菌的菌數(shù)。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質(zhì)與相鄰雜質(zhì)分離良好，理論板數(shù)符合要求。定量限試驗 同原料藥。 溶液穩(wěn)定性試驗供試品溶液：取本品適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。 耐用性試驗 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時的耐用性情況，通過改變流動相比例、流動相pH值、流動相鹽濃度、流速等色譜因素進(jìn)行試驗，計算含雜質(zhì)的量。 吡啶3磺酸檢查方法學(xué)驗證內(nèi)容儀器設(shè)備島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A二極管陣列檢測器島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A紫外檢測器色譜條件選擇及溶液配制 同原料藥采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）為流動相A，甲醇為流動相B，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為261nm；。，取雜質(zhì)Ⅶ，混合均勻，作為供試品。同法配制3份。 定量限 同原料藥。（~210，制劑的質(zhì)量控制二第117~196頁） 富馬酸沃諾拉贊片含量測定耐用性試驗結(jié)果耐用性研究項目方法及條件耐用范圍測得含量%標(biāo)準(zhǔn)原條件色譜柱C18柱，品牌島津流速（ml/min）流動相鹽濃度（mol/l）PH值流動相比例50:5054:46平均值（%）RSD（%）結(jié)論：此方法測定富馬酸沃諾拉贊片含量耐用性良好。精密量取供試品溶液、溶出介質(zhì)、輔料溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。（~58，制劑的質(zhì)量控制二第249~254頁） 富馬酸沃諾拉贊片溶出度檢查穩(wěn)定性試驗結(jié)果時間（h）0246810平均RSD%峰面積942022938275952109954516952910956562949399 結(jié)論：供試品溶液穩(wěn)定性良好。批間一致性考察 根據(jù)上述不同溶出介質(zhì)中溶出曲線考察數(shù)據(jù)計算中試三批樣品溶出度的批間差異，考察三批樣品的一致性，、16。（~52，制劑的質(zhì)量控制二第233~248頁） 富馬酸沃諾拉贊片溶出度檢查精密度試驗結(jié)果序號123456平均RSD%峰面積結(jié)論：此法測定本品溶出度精密度良好。取本品與空白輔料片劑，照溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ C第二法），溫度為37℃177。耐用性試驗 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時的耐用性情況，通過改變色譜柱、流速和流動相比例、鹽濃度、pH值等色譜因素進(jìn)行試驗。線性和范圍試驗 同原料藥。同法配制3份。將上述100片樣品置于研缽中研細(xì)，混勻，作為供試品粉末。溶液穩(wěn)定性供試品溶液室溫放置8小時內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。（～75，制劑的質(zhì)量控制一第129~139頁）按外標(biāo)法以峰面積計算供試品溶液中各雜質(zhì)的量。 取重復(fù)性項下供試品，由不同試驗人員分別在不同日期、不同儀器檢查其有關(guān)物質(zhì)。破壞性試驗 破壞試驗溶液的配制與處理：溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白→20ml無降解處理未破壞+→20ml無降解處理高溫破壞+→20ml水浴100℃加熱13小時高溫空白→20ml水浴100℃加熱13小時光照破壞+→20ml光照箱4500LX照射45小時光照空白→20ml光照箱4500LX照射45小時酸破壞+→20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時酸空白→20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時堿破壞+→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時堿空白→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時氧化破壞+→20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時氧化空白→20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。 分析方法的驗證 按照《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》等以及《中國藥典》2010年版二部附錄中有關(guān)的指導(dǎo)原則提供以下方法學(xué)驗證資料。直接接種法：取1:，分別加入1ml約含50～100cfu/m15株試驗菌。具體試驗操作：取本品，照溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄X C第二法），轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時，取溶液適量濾過，精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)定量稀釋成每1ml中約含沃諾拉贊11μg的溶液，作為供試品溶液；另取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量，用溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊11μg的溶液，作為對照品溶液，精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μl，照含量測定項下的色譜條件測定，計算每片的溶出量。分別取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對照品各適量，精密稱定，作為雜質(zhì)對照品溶液。限度：供試品溶液中沃諾拉贊峰與對照品溶液中沃諾拉贊峰保留時間應(yīng)一致。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）為流動相A，甲醇為流動相B，按上表梯度進(jìn)行洗脫，檢測波長為261nm。其中： ，限度：應(yīng)符合規(guī)定。限度：細(xì)菌數(shù)不得過1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g 含量測定檢查方法：高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、容量瓶、移液管、燒杯、PH計。 有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)驗證內(nèi)容儀器設(shè)備島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A二極管陣列檢測器島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A紫外檢測器色譜條件選擇及溶液配制 同原料藥采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）甲醇（52:48）為流動相A，甲醇為流動相B，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為230nm；。取供試品適量，加流動相A充分溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，作為對照溶液。2）取雜質(zhì)Ⅰ、Ⅱ，雜質(zhì)Ⅲ，雜質(zhì)Ⅳ，雜質(zhì)Ⅴ，雜質(zhì)Ⅵ，精密稱定，置200ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密稱定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（100%濃度）溶液。專屬性酸、堿、高溫、氧化、光照降解雜質(zhì)均與主峰分離良好，各已知雜質(zhì)與相鄰峰分離良好，主峰及各已知雜質(zhì)峰純度均合格；輔料及其降解產(chǎn)物和梯度峰不干擾本品有關(guān)物質(zhì)的測定。 吡啶3磺酸定量限試驗結(jié)果1名稱稀釋步驟定量限/ng吡啶3磺酸→100ml 吡啶3磺酸定量限試驗結(jié)果2名稱123456平均RSD%峰面積830844842868904882 結(jié)論：此法靈敏度較高，在限度范圍內(nèi)可用于富馬酸沃諾拉贊及已知雜質(zhì)定量檢查。將上述溶液于室溫下放置8小時，分別于0、8小時，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積考察溶液穩(wěn)定性。精密量取上述溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算吡啶3磺酸的含量。（~118，制劑的質(zhì)量控制二第57~104頁） 富馬酸沃諾拉贊片含量測定中間精密度試驗結(jié)果序號試驗者123456平均值（%）RSD（%）第一天含量(%)（重復(fù)性）張瑜第二天含量(%)王萌結(jié)論：此方法測定富馬酸沃諾拉贊片含量中間精密度良好。耐用性考察沃諾拉贊片溶出度的溶出方法及測定方法的耐用性情況，溶出度的耐用性良好。（~36，制劑的質(zhì)量控制二第211~232頁）計算公式：回收率（%）= 式中 M測為沃諾拉贊的測得量，mg； M稱為加入對照品中沃諾拉贊的量，mg； P對為對照品富馬酸沃諾拉贊的含量。 不同溶出介質(zhì)中溶出曲線考察 取本品及上市制劑（10mg），采用不同的溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出度考察，比較溶出曲線差異，并計算F2因子。（~222，制劑的質(zhì)量控制三第43~138頁） 沃諾拉贊片溶出度的溶出方法耐用性試驗結(jié)果耐用性研究項目試驗方法及條件確認(rèn)的耐用性范圍溶出度%平均值（%）RSD（%）123456原條件C18島津轉(zhuǎn)速（轉(zhuǎn)/min）504852溶出溫度373638平均值（%）/RSD（%）/ 沃諾拉贊片溶出度的測定方法耐用性試驗結(jié)果耐用性研究項目試驗方法及條件確認(rèn)的耐用性范圍溶出度%平均值（%）RSD（%）123456測定色譜柱C18島津月旭平均值（%）/RSD（%）/