【正文】 ） 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定 型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 20 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗體篩查試驗（微柱凝膠法） ： 發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體 ,避免因 ABO 以外的血型不合引起的輸血反應(yīng) ,以 保證患者用血安全 ： 輸血前檢查 產(chǎn)前檢查 新生兒溶血癥（ HDN） ：輸血科主任負(fù)責(zé)對該標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 、科別、床號、編號完全一致。準(zhǔn)備樣本，標(biāo)記達(dá)亞美卡。即使自動化判讀機(jī)也很難將微弱的血細(xì)胞凝集與陰性反應(yīng)區(qū)別開來。 13. 參考文獻(xiàn) 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版） 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 23 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ07 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗血清效價測定 生效日期： 20210211 第 24 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗血清效價測定 抗體效價測定是一種半定量檢測抗體濃度的方法。同樣操作，再配制以上濃度 10支小試管，已作對照操作。 1份血清重復(fù)測定，結(jié)果可能不一樣，如果只有一個稀釋度的差別，是正常誤差范圍。 4 具體程序 ：抗 A抗 B 血清試劑要進(jìn)行抗體效價、特異性、親和 力的測定， ABO 紅細(xì)胞懸液要進(jìn)行特異性檢測。 ：每新一批次，同批次新開瓶時檢測效價；每日開始試驗時按常規(guī)操作檢測陰陽質(zhì)控。詳細(xì)操作見凝聚胺法交叉配血 SOP。 ：每次檢測出血型結(jié)果必須是一致并與質(zhì)控品原來血型一致，凝集強(qiáng)度正鑒定無誤差，否則為失控。 SOP常規(guī)操作 ：陽性質(zhì)控出現(xiàn)相應(yīng)的強(qiáng)度的凝集，陰性質(zhì)控不出現(xiàn)凝集，否則為失控。 Rh 血型系統(tǒng)有 5 種抗血清，即抗 C 、抗 C 、抗 D 、抗 E 、抗 e，可以檢出 18 種不同的型別，但由于臨床實驗室很難得到這 5 種抗血清，況且在 Rh抗原中，抗原性最強(qiáng)，出現(xiàn)頻率最高，臨床上影響最大的是 D 抗原，所以臨床上一般只作 D 抗原的鑒定，受檢者紅細(xì)胞能與抗 D 血清凝集者為 Rh 陽性，不凝集者為陰性。 . 標(biāo)本儲存 待測標(biāo)本在 28℃ 下的保存時間為 72 小時 ，已檢測標(biāo)本 28℃ 冰箱保存 7天。 記錄。 正反定型結(jié)果不一致原因 自身免疫性溶血性貧血引起的紅細(xì)胞被自身抗體包被； 紅細(xì)胞 A或 B抗原的弱化； 紅細(xì)胞懸液濃度過濃或過淡； 紅細(xì)胞抗原位點(diǎn)過少或抗原性減弱； 病人感染細(xì)菌或病毒后，細(xì)菌或病毒產(chǎn)生的酶使紅細(xì)胞上掩蔽的 T抗原暴露激活，由于正常人血漿中 都含有抗 T抗體，因此可于正常人血漿中產(chǎn)生凝集反應(yīng)，正定型實驗假陽性； 嚴(yán)重感染的病人，其血漿中白細(xì)胞過多，堵塞凝膠篩間隙，影響紅細(xì)胞的沉降，引起假陽性。 D抗原能夠在缺乏 D抗原的人體內(nèi)刺激產(chǎn)生抗 D抗體。 血標(biāo)本標(biāo)簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。 (一卡 1人 ) 用 10ul加樣槍在第 6管中分別加 10ulA1,B標(biāo)準(zhǔn)反定細(xì)胞； 用 40ul加樣槍，分別吸40ul病人血清加入第 6管。部分溶血時，有可能出現(xiàn)（或不出現(xiàn)）凝集。 10. 臨床意義 ： ABO、 Rh血型鑒定不合出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ11 版本 /修訂號 ： A/0 主題內(nèi)容 疑難配血操作程序 生效日期： 20210808 第 37 頁 共 2 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 疑難配血操作程序 ： 規(guī)范疑難配血操作流程 ,保證配血安全 . ： 適合血庫所有工作人員及值班人員 . ：輸血科主任負(fù)責(zé)對該標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 標(biāo)本儲存 待測標(biāo)本在 28℃ 下的保存時間為 72小時 ，已檢測標(biāo)本 28℃ 冰箱保存 7天。 ，應(yīng)事先采取血標(biāo)本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核對。 13 方法局限性： 變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的陰或陽性結(jié)果； 因為儲運(yùn)不當(dāng)?shù)脑颍袝r會發(fā)現(xiàn)在微管的頂部存有小水珠或在膠泡，在使用類似的玻珠 卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn)有管內(nèi) 夜體 量不足或干裂，請不要 使用 ； 如果所用的紅血球的懸液濃度與建議使用的濃度不符，可能會引起錯誤結(jié)果； 使用非原廠的稀釋液來配制紅血球懸液可能會導(dǎo)致不良結(jié)果； 質(zhì)控結(jié)果必須 是 陰性，如果是陽性，檢測無效，用生理鹽水清洗紅細(xì)胞并重新配制懸液重新檢測，如果得到陰性質(zhì)控結(jié)果，則可以判讀結(jié)果； 為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，實驗在室溫 25℃ 中進(jìn)行。柱的底部也可看到一些紅細(xì)胞 +反應(yīng) 大部分凝集的紅細(xì)胞穿過玻璃珠的縫隙，在微柱的底部形成一個粗糙（而非平整）到紅細(xì)胞聚集帶。用戶需要進(jìn)一步檢查以確定質(zhì)控反應(yīng)性的血清學(xué)基礎(chǔ)。 6. 試劑 試劑名稱： ORTho BioVue血型診斷試劑 卡、 （ 3 %） 試劑生產(chǎn)廠家： ORThoClinical Diagnostics,Inc。 5 標(biāo)本 ：新抽取的抗凝血 ： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 3ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于 3500轉(zhuǎn) /分，時間必須大于 15分鐘 標(biāo)本采集要求 采血時，一定要認(rèn)真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。紅細(xì)胞中缺少 A 和 /或 B 血型抗原的正常成人個體，通常在其血清中含有相應(yīng)的抗體。 12. 超出范圍結(jié)果處理 紅細(xì)胞自凝：冷凝集素增高是最為常見的原因。 在 DiaMed離心機(jī)中離心 10min。 采血者要在申請單和標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。 4 原理 ABO血型系統(tǒng)的紅細(xì)胞遺傳表型是根據(jù)每個人紅細(xì)胞上是否存在 A和 /或 B抗原以及血清中相應(yīng)的抗體來決定的，將人分為四種血型： A型、 B型、 AB型和 O型。否則為失控。陽性結(jié)果均為 4+）。 ： IgG 類抗體陽性質(zhì)控：標(biāo)化后的 IgG 抗 D 與 O 型 RhD 陽性紅細(xì)胞進(jìn)行合血； IgG類抗體陰性質(zhì)控： AB型血清（經(jīng)確認(rèn)無不規(guī)則抗體）與 O型 RhD陽性紅細(xì)胞進(jìn)行合血。效價：抗 A血清效價≥ 256,抗 B血清效價 ≥ ：凝集開始時間15s,3min凝集塊 1mm2,外觀合格，并在有效期內(nèi)才合格，否則失控。 2 范圍 適用于本院輸血科工作人員室內(nèi)質(zhì)量控制。 5 結(jié)果判斷 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ07 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗血清效價測定 生效日期： 20210211 第 25 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ，或置室溫 1小時觀察結(jié)果。 10支小試管，用加樣器每管中加生理鹽水 ，在第一管中加入 A或抗 B血清，混勻后吸取 ，以此類推，至第 10管，最 后棄去 。 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。 11. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 結(jié)果判斷客觀性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高 ,陰性、陽性、弱陽性的結(jié)果判斷都有明確的界定，不依操作者與實驗室的不同而變化。 。 5 標(biāo)本 ：新抽取的抗凝血 標(biāo)本要求： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 5ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于 3500轉(zhuǎn) /分，時間必須大于 15分鐘 ，一定要認(rèn)真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。 結(jié)果判斷客觀性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高 陰性、陽性、弱陽性的結(jié)果判斷都有明確的界定，不依操作者與實驗室的不同而變化。 標(biāo)本運(yùn)輸 室溫 運(yùn)輸 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血 ： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 5ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于 3500轉(zhuǎn) /分，時間必須大于 15分鐘 標(biāo)本采集要求 采血時，一定要認(rèn)真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。 ，若患者血液標(biāo) 本中含有肝素，需多加幾滴凝聚胺溶液以中和肝素。如反應(yīng)可疑，可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。 2支小試管，標(biāo)明主側(cè)和次側(cè)，主側(cè)管加患者血清（血漿） 2滴，加供著 5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液（洗滌或不洗滌均可） 1滴，次側(cè)管反之。 采血者要在申請單和標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。 ： 所有申請輸用全血及紅細(xì)胞懸液的標(biāo)本。 溫度效正：定時對水箱溫度進(jìn)行檢測，如發(fā)現(xiàn)實測溫度與顯示溫度相差 ，應(yīng)對解凍箱進(jìn)行校正。由于加熱箱與解凍槽的分離，加熱管與周圍高溫不會破壞血漿的有效成分。 操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。 9 操作性能 快速簡便，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。受檢者紅細(xì)胞 Rh（ D） 血型：陽性或陰性。 4 + = 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 4 標(biāo)本運(yùn)輸 ：室溫運(yùn)輸。 、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ01 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 ABO 血型鑒定（鹽水法） 生效日期： 20210211 第 7 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ⑷通常不與自身的血清凝集。這種區(qū)別用玻片法作試驗更為明顯。 用 A A B、 O紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ01 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 ABO 血型鑒定（鹽水法） 生效日期： 20210211 第 6 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。 ，常見者有以下幾種：分型血清效價太低、親和力不強(qiáng)。 161報告受檢者紅細(xì)胞 ABO血型 取清潔玻片 1張（或白瓷板 1塊），用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗 A、抗 B 和抗 A+B，分別用滴管滴加抗 A、抗 B和抗 A+B分型血清 2滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者 2%紅細(xì)胞懸液 1滴，混合。 ，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于 A、 B亞型、類 B或 cisAB的發(fā)現(xiàn)。 試劑 B血清，效價 128， 28℃避光保存，有效期為一年，在效期內(nèi)使用 . Ⅱ名稱：人 ABO血型反定型紅細(xì)胞試劑 Ⅱ生產(chǎn)廠家：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司 Ⅱ組成： A B及 O型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。所謂正定型，是用已知抗 A和抗 B 分型血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的 A抗原或 /和 B抗原；所謂反定型，是用已知 A細(xì)胞和 B細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗 A或 /和抗 B。 標(biāo)本應(yīng)無溶血，標(biāo)簽填寫內(nèi)容齊全，無涂改。 （內(nèi)徑 10mm*60mm） 3支，分別標(biāo)明 A、 B和 O細(xì)胞。 2 + = 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。如以玻片作試驗時，也可用 低倍鏡觀察結(jié)果。 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少（如亞型）或抗原性減弱（見于白血病或惡性腫瘤）以及類 B或 cisAB等。 如發(fā)現(xiàn) ABO正反定型結(jié)果不一致，首先要重復(fù)試驗 1次。 A抗原或 B抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗 A或抗 B血清作吸收及放射試驗以及受檢者唾液作 A、 B、 H血型物質(zhì)測定。 （ 4） 核對患者的診斷，類 B