【正文】 抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關(guān)。 、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。如果紅細(xì)胞表面有 D抗原，與細(xì)胞株 BS226細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)，使紅細(xì)胞發(fā)生凝集，為 RH陽性，如不發(fā)生凝集，表明紅細(xì)胞表明沒有 D抗原，為 RH陰 性。28℃避光保存，有效期為 1年，在效期內(nèi)用。 1 + = 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。 1滴滴 2%5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液于上述試管中，混勻。 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。 、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 ：將冰凍血漿裝入袋內(nèi)，再掛在解凍架上放妥當(dāng)，并用架上壓桿壓住，按確定。最后按一次“確定”鍵確認(rèn)即完成效正。 原理 凝聚胺是帶有高價陽離子的多聚季銨鹽 ,溶解后能產(chǎn)生大量正電荷，可以大量中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減弱紅細(xì)胞之間的排斥力，使紅細(xì)胞彼此之間的距離縮小，出現(xiàn)正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝集：低離子強(qiáng)度溶液降低了紅細(xì)胞的 Zeta 電位，進(jìn)一步增強(qiáng)抗原抗體間的引力，增強(qiáng)了血型抗體凝集紅細(xì)胞的能力。急診搶救輸血，未能事先采 血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標(biāo)簽、采取血標(biāo)本送檢。 ，目測紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，必須重做 。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ04 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （凝聚胺法） 生效日期： 20210211 第 15 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 7 注意事項(xiàng) 若受血者用血量大，需要 10個以上獻(xiàn)血員時，獻(xiàn)血員間也要進(jìn)行交叉配血。 申請輸用手工血小板的標(biāo)本。 采血者要在申請單和 標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。（約定：第 1管為主側(cè)，第 2管為次側(cè)，以此類推） ： 受血者紅細(xì)胞：用 40uL加樣槍取 40uL 受血者積壓紅細(xì)胞（ RBC）加入備好 1mL生理鹽水的試管中，混勻；制成 4%的紅細(xì)胞懸液；取下吸頭，換上 10uL 加樣槍，取 10uL 此4%的紅細(xì)胞懸液加入次側(cè)管中。 靈敏度 高、特異性高、重復(fù)度好； 客觀性好，避免主觀判讀結(jié)果的影響； 檢測結(jié)果可較長時間保存 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。 不完全抗體即 ABO 系統(tǒng)以外其它系統(tǒng)的抗體 ,也稱為免疫抗體 .多為 IgG,單倍體抗體，長度約 24nm ，多經(jīng)妊娠或輸血后免疫產(chǎn)生。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗(yàn) （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 21 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ，寫清采血時間，及時送檢。 三管中分別加入抗體篩查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ細(xì)胞 50ul 三管中均加入 25ul待檢樣本血漿或血清 37℃孵育 15分鐘 離心 10分鐘，判斷結(jié)果，記錄。 靈敏度高、特異性高、重復(fù)度好； 客觀性好，避免主觀判讀結(jié)果的影響； 檢測結(jié)果可較長時間保存 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。把效價視為抗體的含量，在臨床輸血檢驗(yàn)中用于鑒定標(biāo)準(zhǔn)血清效價的測定，以檢測抗血清試劑的質(zhì)量。 A或 B及 O細(xì)胞用生理鹽水稀釋為 2%濃度。 A血清效價應(yīng)該 128,抗 B血清效價應(yīng) 64。以及外觀，有效期的檢查。 ：抗 D血清效價≥ 64，陽性質(zhì)控出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集 4+，陰性質(zhì)控紅細(xì)胞不出現(xiàn)凝集，在有效期內(nèi)，外觀合格，否則視為失控。 結(jié)果分析： IgG 類抗體陽性質(zhì)控出現(xiàn)相應(yīng)的凝集強(qiáng)度， IgG 類抗體陰性質(zhì)控不出現(xiàn)凝集， IgM類抗體質(zhì)控反應(yīng)結(jié)果與預(yù)期一致。 （微柱凝膠法） 質(zhì)控品來源： IgM組：成都市血液中心的三個獻(xiàn)血員的紅細(xì)胞懸液合血辮子，其中三個標(biāo)本的 ABO血型互不相同并其中一個作為受者另外兩個作為供者。 結(jié)果失控后的處理 ，排除人為誤差 ，以查明質(zhì)控品是否過期或變質(zhì)； ，可以進(jìn)行儀器維護(hù)后再測失控項(xiàng)目，可排除儀器問題引起的失控。 微柱凝膠檢測法是凝膠分子篩技術(shù)和免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的產(chǎn)物，通過調(diào)節(jié)凝膠（葡聚糖）的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分離游離紅細(xì)胞和凝集紅細(xì)胞的目的。 . 標(biāo)本運(yùn)輸 室溫保存 . 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 溶血 、 受 污染，或者含有凝塊的樣品。 9. 結(jié)果 判斷模式 正定管 ABD,4+為陽性結(jié)果，（ ）為陰性結(jié)果。 13 方法局限性： 變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的陰或陽性結(jié)果； 因?yàn)閮\(yùn)不當(dāng)?shù)脑?，有時會發(fā)現(xiàn)在微管的頂部存有小水珠或在膠泡，在使用類似的凝膠卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn)有管內(nèi)膠量不足或干裂，請不要 使用 ； 如果所用的紅血球的懸液濃度與建議使用的 濃度不符，可能會引起錯誤結(jié)果； 使用非原廠的稀釋液來配制紅血球懸液可能會導(dǎo)致不良結(jié)果； 質(zhì)控結(jié)果必須 是 陰性，如果是陽性，檢測無效，用生理鹽水清洗紅細(xì)胞并重新配制懸液重新檢測，如果得到陰性質(zhì)控結(jié)果，則可以判讀結(jié)果； 為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，實(shí)驗(yàn)在室溫 25℃ 中進(jìn)行?？?D是一種能夠?qū)е录t細(xì)胞損壞的具有重大臨床意義的抗體，可能會引起新生兒溶血?。?HDN） 和輸血反應(yīng)。 采血者要在申請單和標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。 用 40ul加樣槍吸 40ul病人壓積紅細(xì)胞（ RBC） 加入備好 1ml生理鹽水的凹槽中或試管中（編號須對應(yīng)），混勻；制成 4%的紅細(xì)胞懸液； 取下吸頭，換上 10ul加樣槍，分別吸 10ul4%的紅細(xì)胞懸液加入第 4管中 離心 5分鐘，判讀結(jié)果，記錄。 4+反應(yīng) 紅細(xì)胞在柱的上面凝集，并形成一個環(huán)形帶。 11. 操作性 能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 操作簡 單方便。 標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血 標(biāo)本要求： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 5ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻 ） 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于 3500轉(zhuǎn) /分，時間必須大于 15分鐘 標(biāo)本采集要求 采血時，一定要認(rèn)真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。 室溫 運(yùn)輸 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強(qiáng)抽血時）在病人輸液時 采集標(biāo)本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 正反定型結(jié)果不一致原因 自身免疫性溶血性貧血引起的紅細(xì)胞被自身抗體包被； 紅細(xì)胞 A或 B抗原的弱化； 紅細(xì)胞懸液濃度過濃或過淡； 紅細(xì)胞抗原位點(diǎn)過少或抗原性減弱； 病人感染細(xì)菌或病毒后，細(xì)菌或病毒產(chǎn)生的酶使紅細(xì)胞上掩蔽的 T抗原暴露激活，由于正常人血漿中都含有抗 T抗體，因此可于正常人血漿中產(chǎn)生凝集反應(yīng)，正定型實(shí)驗(yàn)假陽 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK –CZ10 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒 定 （微柱 法 ORTho） 生效日期： 20210211 第 36 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 性； 嚴(yán)重感染的病人，其血漿中白細(xì)胞過多，堵塞凝膠篩間隙，影響紅細(xì)胞的沉降，引起假陽性。 1+反應(yīng) 大部分凝集的紅細(xì)胞停留在微柱的 下半部分。 質(zhì)控柱： 如果在質(zhì)控柱中觀察到任何程度的陽性反應(yīng)性，則無法正確判定血型。 。在添加紅細(xì)胞并隨后離心試劑卡之后， 凝集的紅細(xì)胞被玻璃珠阻擋在微柱上端，而未凝集的紅細(xì)胞則穿過玻璃珠到達(dá)微柱底部。 要確定紅細(xì)胞是否包含或缺少 A 和 /或 B血型抗原，須使用抗 A 和抗 B試劑進(jìn)行檢測。 可節(jié)省樣品紅細(xì)胞和血漿； 靈敏度高、特異性高、重復(fù)度好； 客觀性好，避免主觀判讀結(jié)果的影響； 檢測結(jié)果可較長時間保存； 操作者更少接觸血液標(biāo)本。 5%樣本紅細(xì)胞制備：壓積紅細(xì)胞 25ul或 50ul全血懸浮于 2號稀釋液中 ； 50ulA1,B標(biāo)準(zhǔn)反定細(xì)胞加入 A1,B管中， 50ul血清或血漿加入 A1,B管中 10u5%樣本紅細(xì)胞加入 Ctl， A,B,D管中。 血標(biāo)本標(biāo)簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。 ：輸血科主任負(fù)責(zé)對該標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 IgG組陰性質(zhì)控品：主側(cè)次側(cè)均不出現(xiàn)凝集。（質(zhì)控品采用微柱凝膠法和玻片法兩種方法進(jìn)行定標(biāo)。 ：每新一批次，同批次新開瓶，每日開始試驗(yàn)時。O細(xì)胞無凝集。 7 參考文獻(xiàn) 《陜西省醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床輸血技術(shù)與質(zhì)量管理手冊 》 《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》成都市第二 人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ08 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 室內(nèi)質(zhì)量控制 生效日期： 20210211 第 26 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 室內(nèi)質(zhì)量控制 1 目的 制度本制度，為了選擇適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)方法和步驟，連續(xù)評價本實(shí)驗(yàn)室檢測工作的可靠性程度，監(jiān)測和控制本實(shí)驗(yàn)室檢測工作的精密度，提高常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢測的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠，以保證輸血的安全可靠性。 以 3000r/min 離心 1 分鐘，以出現(xiàn)（ +）凝集強(qiáng)度試管的血清稀釋倍數(shù)的倒數(shù)為該 抗血清的效價。以抗體稀釋后仍能與抗原紅細(xì)胞出現(xiàn)肉眼明顯可見凝聚的最高血清稀釋倍數(shù)來表示抗體的效價。 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序可以檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集 。而如果常規(guī)作抗體篩選 /鑒定和交叉配血，則可避免漏檢，達(dá)到 100%的準(zhǔn)確性。 待 測標(biāo)本在 28℃ 下的保存時間為 48小時 室溫保存 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陰性；如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上 部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陽性。 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序可以檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集 。 10. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 測試結(jié)果安全可靠：對不完全抗體不會漏檢，在交叉配血過程中不會出現(xiàn)假陰性結(jié)果，可預(yù)防因 IgG類抗體引起的輸血反應(yīng)。 標(biāo)本儲存 待測標(biāo)本在 28℃ 下的保存時間為 72小時 ，已檢測標(biāo)本 28℃ 冰箱保存 7天。如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陰性；如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陽性。 ，應(yīng)盡快觀察結(jié)果，以免反應(yīng)減弱或消失。如果凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。 . 試劑 試劑名稱： 凝聚胺介質(zhì)試劑 試劑生產(chǎn)廠家： 珠海貝索生物技術(shù)有限公司 試劑 組成 ： 低離子溶液，凝聚胺溶液，懸浮液 器 ： 802上海手術(shù)器械廠 ，以 3000r/min離心 3分鐘，分離上層受、供著血清或血漿，并在壓積紅細(xì)胞制成 5%受、供著紅細(xì)胞生理鹽水懸液。 血標(biāo)本標(biāo)簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第二版） .南京：東南大學(xué)出版社， 1997， 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ04 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （凝聚胺法） 生效日期： 20210211 第 13 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 交叉配血（凝聚胺法） ： 在臨床用血前將患者血清和血細(xì)胞分別與獻(xiàn)血員血細(xì)胞和血清進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)，以排除各種因素引起的輸血反應(yīng)（如凝集或溶血），保證用血安全。使用蒸餾水的用戶也必須每周清洗換水。循環(huán)的水流既能加快冰凍血漿與水的熱交換，又能使冰凍血漿快速安全的溶解至適合人體輸入的溫度。 、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。報告方式同玻片法。 。 。 3 標(biāo)本儲存 ：操作完標(biāo)本 4℃冰箱保存 7天。 ，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。 ⑶不被臍帶血清凝集。 A型血而疑為有類 B抗原時，可用下列方法進(jìn)行鑒別： （ 1） 觀察細(xì)胞與抗 A及抗 B的凝集強(qiáng)度，與抗 A的反應(yīng)要比與抗 B的反應(yīng)強(qiáng)。 ，如結(jié)果呈陽性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了