《植物基因工程》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 oh n 等 1998 ） ：主要功能區(qū) ：同源區(qū) Ti質(zhì)粒 Ti質(zhì)粒的基因位點(diǎn)及其功能區(qū)域 （ 1） T－ DNA區(qū)（ transferredDNA regions）： TDNA是農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時(shí)，從 Ti質(zhì)粒上切割下來轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞的一段 DNA，故稱之為轉(zhuǎn)移 DNA。 Ti質(zhì)粒 ? Ti質(zhì)粒的 基因圖譜 不同的 Ti質(zhì)粒有二個(gè)同源區(qū)： ① Vir區(qū)（轉(zhuǎn)化所必須） 是毒性區(qū)，也叫毒性基因或 Vir基因或致病基因。 ? 基因圖譜構(gòu)建：轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法 利用細(xì)菌的轉(zhuǎn)座子（ transposon），使 Ti質(zhì)粒發(fā)生嵌入突變和缺失突變。 ? Ti物理圖譜構(gòu)建：經(jīng)限制性內(nèi)切酶處理之后的 Ti質(zhì)粒 DNA，用瓊脂糖凝膠電泳作片段分離，便可顯示出有 20多條大小不同的 DNA酶切片段。最近有人發(fā)現(xiàn)農(nóng)桿菌中還有其它的質(zhì)粒，稱之為隱秘質(zhì)粒。 （ 2）根癌農(nóng)桿菌侵染植物后產(chǎn)生兩種物質(zhì)：類植物激素和冠癭堿。細(xì)菌 DNA中的編碼基因在植物細(xì)胞中表達(dá)，刺激植物細(xì)胞不受控制的分裂，形成瘤。引起癭的因素有：受傷、昆蟲、病毒、細(xì)菌和特定的基因組織表達(dá)等。其基因（ TDNA）的轉(zhuǎn)移，是一個(gè)極為復(fù)雜而又巧妙的生物學(xué)過程。從目前看，大體上可分為三類： 概 述 ? 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 ? 以原生質(zhì)體或細(xì)胞（組織）作為受體的直接基因轉(zhuǎn)移，如： 聚乙二醇法（ PEG） 電擊（ EP ， electroporation） 脂質(zhì)體（ Lip， Lome） 磷酸鈣－ DNA共沉淀（ Ca－ P） 微注射（ Mi ， Microinjection） 基因槍法（ particle bombardment，簡稱 PB） 超聲波法（ Ulstrasonication） ? 種質(zhì)系統(tǒng)（ germ line transtormation）的基因轉(zhuǎn)移，如利用子房注射 、種胚以及花粉管通道等導(dǎo)入外源基因 植物轉(zhuǎn)基因的主要方法 在當(dāng)今眾多的植物基因轉(zhuǎn)化技術(shù)中，最為可靠和有效的方法之一是 農(nóng)桿菌 Ti質(zhì)粒 介導(dǎo)的外源基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。進(jìn)行植物轉(zhuǎn)化的方法也在不斷創(chuàng)新。 概 述 目前，人們對這一天然過程已有了較深入地了解，對其基因組織、結(jié)構(gòu)、遺傳功能，表達(dá)調(diào)控的研究不斷深入。其中一類瘤被叫作癭，癭的種類很多。 ? 細(xì)菌通過傷口進(jìn)入植物，在基因水平上轉(zhuǎn)化植物。 （ 1）根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞的能力是因?yàn)樗幸粋€(gè)叫作 Ti（ tumorinducing）的質(zhì)粒（ Ti plasmid）。 Ti質(zhì)粒 Ti質(zhì)粒是根癌農(nóng)桿菌染色體外的遺傳物質(zhì)，為 雙股共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA分子 ，其分子量為 95～ 156 106D，約有 200kb。 Ti質(zhì)粒 Ti質(zhì)粒的物理圖譜 ?物理圖譜：限制性內(nèi)切酶酶切片段在 TiDNA上的排列順序。 圖 5 3 章魚堿型 Ti 質(zhì)粒的物理圖 外圈： H i nd I I I 酶切圖： Ec oR I 酶切圖 內(nèi)圈： B a m H I 酶切圖 Ti質(zhì)粒 Ti質(zhì)粒的 基因圖譜 ? 基因圖譜：基因在 TiDNA上的排列順序。 目前已建立了十多個(gè) Ti質(zhì)粒的基因圖，其中主要是章魚堿型和胭脂堿型兩大類的 Ti質(zhì)?；驁D。 noc是編碼細(xì)菌利用胭脂堿的基因。 TDNA區(qū)與 Vir區(qū)在質(zhì)粒 DNA上彼此相鄰，合起來約占 Ti質(zhì)粒DNA的三分之一。 3. Ti 質(zhì)粒的基因位點(diǎn)及其功能區(qū)域從圖 5 6 可見各種 Ti 質(zhì)粒都分為四個(gè)區(qū)：（ 1 ） T － DNA 區(qū) （ t r a ns f e r r e d D N A r e gi ons ）： T D N A 是農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時(shí)，從 Ti 質(zhì)粒上切割下來轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞的一段DNA ，故稱之為轉(zhuǎn)移 DNA 。（ 3 ） C on 區(qū) （ r e gi ons e nc od i n g c on j u g a t i on s ）：該區(qū)段上存在著與細(xì)菌間接合轉(zhuǎn)移相關(guān)基因 （ t r a ），調(diào)控 Ti 質(zhì)粒在農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。表 5 2 Ti 質(zhì)粒上的部分基因及其功能基因縮寫 表 型 及 功 能在基因圖上的近似位置 （ kb ）pT i C 58( 21k b) pT i A c h5( 195kb)a pe 排斥噬菌體 A P I 1 1 1~1 13 1
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